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中华锯齿米虾gustavus的鉴定及在繁育中的初步应用

中华锯齿米虾Gustavus的鉴定及在繁育中的初步应用

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作者：梁美玲河北大学

学位级别：硕士

gustavus是与节肢动物繁殖相关的正向调控因子,含有SPRY和C端SOCX box两个保守结构域,是SPSB蛋白家族同源蛋白。此外,gustavus是Vasa在极质正确定位所必需的,有助于生殖细胞形成。在高等动物中,研究发现SPSB家族由SPSB1-SPSB4组成,并在... 详细信息

gustavus是与节肢动物繁殖相关的正向调控因子,含有SPRY和C端SOCX box两个保守结构域,是SPSB蛋白家族同源蛋白。此外,gustavus是Vasa在极质正确定位所必需的,有助于生殖细胞形成。在高等动物中,研究发现SPSB家族由SPSB1-SPSB4组成,并在多种生命活动中发挥重要作用,诸如免疫应答、细胞凋亡、生长发育以及应急反应等。然而,对于甲壳动物SPSB家族的研究正处于起步研究阶段,且SPSB发挥功能的机制有待进一步确定。本研究以中华锯齿米虾作为研究对象,综合运用生物信息学分析、基因克隆与表达分析以及RNA干扰等研究方法,对可变剪接产生的Nd Gus X1和Nd Gus X2进行生殖功能及互补机制的初步研究。本研究为深入探讨SPSB的生物学功能,以及在调节甲壳动物生殖发育方面奠定理论基础。研究结果如下:1.根据中华锯齿米虾基因组与转录组数据拼接获得Nd Gus X1、Nd Gus X2序列信息,并对Nd Gus X1、Nd Gus X2序列进行基因结构的分析,发现中华锯齿米虾gustavus由于发生可变剪接而形成两个转录本(Nd Gus X1与Nd Gus X2)。通过PCR方法扩增获得了Nd Gus X1、Nd Gus X2 c DNA序列片段。Nd Gus X1的开放阅读框(ORF)包含849 bp,Nd Gus X2的ORF包含2019 bp。Nd Gus X1与Nd Gus X2编码蛋白均含有SPRY和SOCX box两个保守结构域。多重序列比对与系统进化分析发现,Nd Gus X1与Nd Gus X2在不同物种间具有高度保守性。此外,Nd Gus X1和Nd Gus X2与SPSB1/4的同源性高。2.借助实时荧光定量PCR技术对Nd Gus X1与Nd Gus X2在成体组织、不同发育阶段胚胎以及铜离子刺激下性腺中的表达模式进行分析。Nd Gus X1与Nd Gus X2分别在卵巢与肌肉中高表达。在不同的胚胎发育时期,Nd Gus X1与Nd Gus X2表达趋势大致相同,呈现先下降后上升的表达趋势。在铜离子刺激下,Nd Gus X1表达量在刺激后24 h时显著上升(P基因(Vg)表达量显著降低(P基因(Vg R)表达水平没有显著的变化(P>0.05),Vasa表达量在干扰后的24 h也发生显著下降(P<0.01);卵巢中总蛋白含量以及甘油三酯含量均发生显著性下降(P<0.05);卵巢的性腺发育指数并未发生变化,但是成熟期卵母细胞体积变小,无法充满整个滤泡腔。

关键词：中华锯齿米虾卵巢发育 gustavus基因 RNA干扰

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