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抗氧化剂对农杆菌介导的大豆下胚轴gus基因瞬时表达的影响

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植物生态学报 2006年第2期30卷 330-334页

作者：汲逢源王戈亮许亦农中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室北京100093

大豆(Glycine max)下胚轴作为大豆遗传转化的外植体材料,能快速高频再生不定芽。然而,在遗传转化过程中褐化影响基因转化效率。在该研究中,我们用含有gus染色基因和hptII(Hygromycin phosphotransferase II)筛选基因的农杆菌(Agrobacter... 详细信息

大豆(Glycine max)下胚轴作为大豆遗传转化的外植体材料,能快速高频再生不定芽。然而,在遗传转化过程中褐化影响基因转化效率。在该研究中,我们用含有gus染色基因和hptII(Hygromycin phosphotransferase II)筛选基因的农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404侵染大豆下胚轴,并用组织化学定位法测定了gus基因的瞬时表达,以确定大豆的优化基因转化条件。结果显示,在共培养基中加入硫代硫酸钠、L_半胱氨酸以及二硫苏糖醇等抗氧化剂,可以有效地抑制大豆下胚轴在组培过程中褐化的发生,并大幅度提高农杆菌在下胚轴的瞬时表达率。这些结果说明抗氧化剂可以降低这种影响并有效提高基因转化效率。

关键词：大豆下胚轴农杆菌 gus基因瞬时表达

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苜蓿愈伤组织诱导及gus基因瞬时表达

四川大学学报（自然科学版） 2001年第6期38卷 905-908页

作者：徐恒黎万奎谢志健吴炼张旭周宇四川大学生命科学院成都610064 中国科学院成都生物研究所成都610041 成都武侯区环境监测站成都610041

用电击转化法将质粒pBI12 1(含gus基因 ,β 葡萄糖苷酸酶基因 )导入苜蓿愈伤组织的小细胞团内。

关键词：苜蓿愈伤组织 gus基因瞬时表达电击转化

水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导gus基因的遗传转化

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南京林业大学学报（自然科学版） 2009年第4期33卷 33-37页

作者：魏开发漳州师范学院生物科学与技术系福建漳州363000

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是... 详细信息

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6-BA(2 mg/L)+ABA(2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是:改良N6+2,4-D(0.5 mg/L)+6-BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导gus基因转化,稳定表达抗性愈伤gus染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转gus基因阳性植株。

关键词：水仙胚性愈伤农杆菌介导法遗传转化 gus基因

用微弹轰击法将gus基因导入小麦的完整细胞

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生物工程学报 1992年第4期8卷 339-341页

作者：吴琴生姚国顺麦克·琼斯刘大钧南京农业大学

微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI gus作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用X-glucuronide染色,对gus基因产物的活性进... 详细信息

微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI gus作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用X-glucuronide染色,对gus基因产物的活性进行鉴定,gus基因表达的细胞呈深蓝色的小点。小麦幼胚表面的蓝点最多可达40～50个,悬浮细胞系中gus基因表达的细胞较少。试验表明微弹轰击法是小麦组织水平上进行外源基因导入的一个有效途径。试验对微弹轰击的有关参数及条件进行了讨论。

关键词：小麦基因导入微弹轰击 gus基因

基于gus基因瞬时表达优化云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)遗传转化方法

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云南农业大学学报（自然科学版） 2016年第6期31卷 1045-1051页

作者：彭绿春周微汪玲敏张露宋杰解玮佳关文灵李世峰云南省农业科学院花卉研究所云南昆明650205 云南省花卉育种重点实验室云南昆明650205 云南花卉技术工程研究中心云南昆明650205 九江农业科学院江西九江332101 云南农业大学园林园艺学院云南昆明650201

本研究以云南杜鹃无菌叶片和愈伤组织为受体材料,运用正交试验设计,通过组织染色分析法研究了预培养时间、菌液密度、侵染时间、共培养时间对农杆菌介导的gus基因瞬时表达的影响。结果表明:叶片是云南杜鹃较理想的遗传转化受体材料,无... 详细信息

本研究以云南杜鹃无菌叶片和愈伤组织为受体材料,运用正交试验设计,通过组织染色分析法研究了预培养时间、菌液密度、侵染时间、共培养时间对农杆菌介导的gus基因瞬时表达的影响。结果表明:叶片是云南杜鹃较理想的遗传转化受体材料,无菌叶片预培养0 d,菌液OD_(600)值0.5,侵染时间40 min,共培养5 d,gus基因瞬时表达率最高,平均表达率为70%。试验结果为云南杜鹃遗传转化研究提供了快速可靠的依据。

关键词：云南杜鹃 gus基因瞬时表达遗传转化方法

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内含子数量改变gus基因的瞬时表达调控

基因组学与应用生物学 2011年第5期30卷 571-576页

作者：关峰韦正乙王云鹏林春晶邢少辰马景勇吉林农业大学农学院长春130118 吉林省农业科学院生物技术研究中心长春130033

内含子是基因的重要组成部分,它与功能基因表达之间的关系越来越被重视。本研究以pCAM-BIA3301为载体,利用玉米泛素启动子Ubi1和水稻肌动蛋白启动子Actin1构建两个gus基因表达载体p33U1和p33A1,同时设置3个对照载体。通过基因枪轰击法... 详细信息

内含子是基因的重要组成部分,它与功能基因表达之间的关系越来越被重视。本研究以pCAM-BIA3301为载体,利用玉米泛素启动子Ubi1和水稻肌动蛋白启动子Actin1构建两个gus基因表达载体p33U1和p33A1,同时设置3个对照载体。通过基因枪轰击法将上述载体转入水稻胚性愈伤组织,探讨内含子对外源目的基因表达的调控作用。组织化学检测结果表明:CaMV35S启动子调控下的igus(带内含子)基因能够顺利表达;同样,Actin1启动子(带内含子)调控下的不带内含子的gus基因也可以正常表达,而当Actin1启动子(带内含子)驱动igus基因时,则导致gus染色反应不能发生。Ubi1启动子(带内含子)调控gus基因的瞬时表达也得出类似结果,证明表达框中内含子的数量为1个或两个时,对gus基因的表达起到了不同的调控作用。本研究结果对植物表达载体构建及功能基因表达都具有指导意义。

关键词：内含子 gus基因瞬时表达表达载体

农杆菌介导gus基因对多年生黑麦草转化的研究

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广西植物 2007年第1期27卷 121-126页

作者：张振霞刘萍杜雪玲苏乔杨中艺中山大学生命科学学院安徽淮北煤炭师范学院生物系安徽淮北235000 大连理工大学环境与生命学院辽宁大连116024

通过检测愈伤组织中gus基因的瞬间表达，研究农杆菌LBA4404／pCAMBIA1301介导多年生黑麦草的转化体系。通过对多年生黑麦草瞬间表达率的比较，确立了其遗传转化的最佳优化条件。研究发现，多年生黑麦草不同品种的转化率在25％～45％之... 详细信息

通过检测愈伤组织中gus基因的瞬间表达，研究农杆菌LBA4404／pCAMBIA1301介导多年生黑麦草的转化体系。通过对多年生黑麦草瞬间表达率的比较，确立了其遗传转化的最佳优化条件。研究发现，多年生黑麦草不同品种的转化率在25％～45％之间变化。多年生黑麦草遗传转化最佳优化条件是预培养10d的胚性愈伤组织、浓度为0．5～0．8OD的农杆菌菌液以及2d共培养时间。在共培养基中添加100μmol／L乙酰丁香酮能有效地提高植物瞬间表达率。两种侵染处理方法比较结果为滤纸滴加法比浸泡法更优。转化后对愈伤组织的干燥处理能抑制农杆菌过度繁殖，能改善愈伤状态，有利于提高转化率。

关键词：多年生黑麦草农杆菌转化 gus基因

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用基因枪将gus基因导入褐藻细胞中表达

海洋与湖沼 1994年第4期25卷 353-356页

作者：秦松张健李文斌王希华童顺孙勇如曾呈奎中国科学院海洋研究所青岛266071 中国科学院遗传研究所北京100101

于1993年11月-1994年2月，用高压氦气式基因枪，将PB1221质粒[装有CaMV35s启动子、gus（β-葡精苷酸酶）基因以及nos的3’调控区]导入海带和裙带菜组织切块中。48h后，在海带假根细胞和裙带菜中肋部叶片细胞中检测到gus基因的表达。实... 详细信息

于1993年11月-1994年2月，用高压氦气式基因枪，将PB1221质粒[装有CaMV35s启动子、gus（β-葡精苷酸酶）基因以及nos的3’调控区]导入海带和裙带菜组织切块中。48h后，在海带假根细胞和裙带菜中肋部叶片细胞中检测到gus基因的表达。实验表明，微粒子轰击法是外源基因导入大型褐藻的一个有效途径。CaMV35s启动子能够驱动外源基因在海洋藻类中的表达，可作为藻类基因工程的启动元件。

关键词：褐藻基因导入 gus基因细胞

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农杆菌介导的半夏gus基因瞬时表达

华北农学报 2007年第4期22卷 42-45页

作者：贾永芳马玉坤郭余龙李名扬河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 西南大学花卉研究所重庆400716

采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对gus基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对gus基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2... 详细信息

采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对gus基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对gus基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2的EHA101或EHA105农杆菌液中感染15 min,叶柄暗处共培养3 d,愈伤组织2 d,能够得到较高的gus基因瞬间表达。

关键词：半夏根癌农杆菌 gus基因瞬间表达