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作物杂志 2012年第4期 41-44页

作者：唐立郦朱延明才华纪巍罗晓吴婧赵阳柏锡东北农业大学生命科学学院植物生物工程研究室黑龙江哈尔滨150030

从野生大豆中获得的具有耐旱、耐冷特性的锌指转录因子gszfp1基因,构建到以CaMV35S为启动子、E12为增强子的植物表达载体pCEOM中,以bar基因为筛选标记基因,通过农杆菌介导法将构建的植物表达载体转化苜蓿品种农菁1号的子叶节,用含0.5mg/... 详细信息

从野生大豆中获得的具有耐旱、耐冷特性的锌指转录因子gszfp1基因,构建到以CaMV35S为启动子、E12为增强子的植物表达载体pCEOM中,以bar基因为筛选标记基因,通过农杆菌介导法将构建的植物表达载体转化苜蓿品种农菁1号的子叶节,用含0.5mg/L草丁磷的筛选培养基进行筛选,获得了70株抗性植株,用PCR检测得到20株bar基因阳性植株,将获得的转基因植株进行gszfp1基因的RT-PCR鉴定,获得3株RT-PCR阳性植株。结果表明,gszfp1基因在苜蓿中得到表达。

关键词：苜蓿 gszfp1基因农杆菌介导转基因株系

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农杆菌介导亚洲百合转化体系的建立及转gszfp1基因研究

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生物技术通报 2014年第2期30卷 91-96页

作者：张焕郑佳阚丹丹樊金萍东北农业大学园艺学院哈尔滨150030 伊春市南岔区人事局伊春153000 黑河市爱辉区纪检委黑河164300

以亚洲百合‘耀眼’(Cedeazzle)无菌苗小鳞片为遗传转化受体,并利用农杆菌介导法将锌指转录因子基因gszfp1转化‘耀眼’无菌苗小鳞片,初步建立亚洲百合‘耀眼’的遗传转化体系,通过筛选获得了50株疑似转化植株,通过用PCR方法对获得的50... 详细信息

以亚洲百合‘耀眼’(Cedeazzle)无菌苗小鳞片为遗传转化受体,并利用农杆菌介导法将锌指转录因子基因gszfp1转化‘耀眼’无菌苗小鳞片,初步建立亚洲百合‘耀眼’的遗传转化体系,通过筛选获得了50株疑似转化植株,通过用PCR方法对获得的50株疑似抗性植株进行检测,结果显示20株呈阳性,PCR阳性转化率为40%;将得到的阳性植株进行RT-PCR检测,获得12株RT-PCR阳性植株。结果表明,锌指转录因子基因gszfp1在亚洲百合‘耀眼’中得到表达。

关键词：亚洲百合鳞片转化体系农杆菌介导 gszfp1基因

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农杆菌介导gszfp1基因转化亚洲百合‘Cedeazzle’的研究

农杆菌介导GsZFP1基因转化亚洲百合‘Cedeazzle’的研究

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作者：张焕东北农业大学

学位级别：硕士

百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根花卉,其花大、色彩丰富、花型优美,是世界上重要的鲜切花之一,有2000余年栽培历史,具有较高的经济价值和观赏价值。而亚洲百合的花色、花型各异,花姿奇特,... 详细信息

百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根花卉,其花大、色彩丰富、花型优美,是世界上重要的鲜切花之一,有2000余年栽培历史,具有较高的经济价值和观赏价值。而亚洲百合的花色、花型各异,花姿奇特,经常用于盆栽观赏,花坛、花镜布置或丛植、片植于园林、绿地中美化环境。然而,由于亚洲百合系列品种对栽培养护要求较高,不喜高温,喜凉爽湿润的气候,夏季栽培需用遮阳网,生产成本高。并且在北方亚洲百合生产受到土地盐渍化、季节性干旱等逆境的胁迫,限制了其在北方地区的广泛应用,因此,急需培育抗逆性强的亚洲新株系来满足广大消费者的需求。本研究以亚洲百合‘耀眼’为试材,利用农杆菌介导法将耐逆基因gszfp1导入亚洲百合中,建立了亚洲百合‘耀眼’的高频再生体系和遗传转化体系。通过抗性筛选、PCR检测和RT-PCR检测,得到阳性转基因植株。然后对阳性植株进行干旱胁迫处理,分析其耐干旱胁迫的能力及生长发育情况,培育出耐旱的转基因亚洲百合新株系。从而充分利用我国北方的土地资源,扩大亚洲百合的种植面积,提高亚洲百合的生产质量,来满足大众的需求,并为我国的城市绿化节约水资源,具有重要的研究价值和广阔的开发应用前景。主要研究结果如下：1.构建了由E12-CaMV35S强组成型启动子调控的植物表达载体pCEOM-gszfp1,用于基因gszfpl在单子叶植物中的整合表达。2.建立了亚洲百合‘耀眼’高频直接分化再生体系。以亚洲百合‘耀眼’鳞片为外植体,诱导不定芽分化适宜培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+NA A0.2mg/L;无菌苗鳞片叶不定芽诱导适宜培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.3mg/L;无菌苗叶片诱导不定芽分化适宜培养基为：Ms+NA A1.0mg,L+6-BA0.4mg/L+KT0.2mg/L;小鳞片诱导不定芽分化适宜培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+NA A0.2mg/L+30g/L蔗糖;生根诱导适宜培养基为：MS培养基。3.建立了农杆菌介导亚洲百合‘耀眼’的遗传转化体系。以小鳞片作为转化材料,预培养5d;农杆菌侵染液OD600值为0.6左右,侵染时间为20min;共培养时间为3d,且培养基中不含NH4N03:抑菌剂Cef的使用浓度为350mg/L;诱导小鳞片不定芽分化时,筛选剂草丁磷(PPT)的适宜浓度为1.75mg/L;诱导根分化时,筛选剂草丁磷(PPT)的适宜浓度为1.25mg/L。4.通过农杆菌介导法将gszfp1基因导入亚洲百合‘耀眼’中,经PCR检测,转gszfpl基因的‘耀眼’植株呈阳性的有36株,PCR阳性率为23.08%;对PCR阳性植株进行RT-PCR检测,其中16株呈阳性。***基因能提高亚洲百合‘耀眼’的耐旱性。

关键词：亚洲百合‘耀眼’ gszfp1基因遗传转化耐旱性

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gszfp1和GsWRKY20基因转化苜蓿及耐盐耐旱性分析

GsZFP1和GsWRKY20基因转化苜蓿及耐盐耐旱性分析

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作者：唐立郦东北农业大学

学位级别：硕士

非生物胁迫，尤其是干旱、低温和盐碱，是导致作物减产和限制作物地理分布的主要因素。紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界上栽培面积最大、应用最广泛的多年生豆科牧草。苜蓿中富含蛋白、纤维等营养成分及钙、磷等矿物质，是世界公... 详细信息

非生物胁迫，尤其是干旱、低温和盐碱，是导致作物减产和限制作物地理分布的主要因素。紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界上栽培面积最大、应用最广泛的多年生豆科牧草。苜蓿中富含蛋白、纤维等营养成分及钙、磷等矿物质，是世界公认的优良牧草，在世界各国都大面积种植。虽然苜蓿具有抗旱、耐寒、耐盐碱的特性，但只适宜在轻度干旱和轻度盐碱的土地上种植，在中、重度盐渍化及干旱的土地上种植则受到很大限制。我们在前期研究中从野生大豆中克隆了两个基因gszfp1和GsWRKY20，在拟南芥中研究表明：gszfp1和GsWRKY20基因过量表达能提高拟南芥植株的抗旱性。本研究拟将这两个基因转化豆科植物苜蓿，目的是在获得耐旱转基因苜蓿新材料的同时，在苜蓿中研究这两个基因的功能及其作用机理。具体研究内容包括：构建gszfp1和GsWRKY20基因植物表达载体，采用农杆菌介导法转化苜蓿品种——农菁1号，通过子叶节再生途径获得再生植株。采用PCR方法鉴定转基因苜蓿，采用半定量RT-PCR、qPCR方法鉴定出gszfp1和GsWRKY20基因过量表达的转基因苜蓿新材料。对转基因苜蓿进行NaCl和干旱胁迫处理，分析胁迫处理下的植株表型和生理指标。测定转基因苜蓿根和叶中的Na+和K+含量，分析gszfp1和GsWRKY20基因提高苜蓿抗盐性机理。采用qPCR方法分析转基因苜蓿中干旱胁迫相关marker基因表达;离体叶片失水速率;采用扫描电镜方法观测转基因苜蓿叶片的气孔密度和大小;采用透射电镜方法观测转基因苜蓿叶片角质层厚度，分析gszfp1和GsWRKY20基因提高苜蓿抗旱性机理。本研究取得的主要研究结果如下： 1.获得转化gszfp1基因苜蓿新材料3份;获得转化GsWRKY20基因苜蓿新材料3份。 2. gszfp1和GsWRKY20基因能提高苜蓿的耐盐性，其作用的机理是：gszfp1和GsWRKY20基因能减少NaCl处理下苜蓿细胞中的钠离子含量的增加，同时减少细胞中钾离子含量的降低，从而维持细胞中稳定的钠钾离子含量，保护细胞内环境稳定和离子平衡，从而提高植物耐盐性。 3. gszfp1基因能提高苜蓿的耐旱性，其作用的机理是：gszfp1基因上调干旱相关marker基因MtCOR47、MtRD2、MtP5CS和MtRAB18表达;通过减小苜蓿气孔大小，增加叶片角质层厚度，降低叶片散水率，从而提高植物耐旱性。 4. GsWRKY20基因能提高苜蓿的耐旱性，其作用的机理是：GsWRKY20基因上调干旱相关marker基因MtCOR47、MtRAB18、MtP5CS、MtRD2和MtOST1表达;通过降低苜蓿气孔密度，增加叶片角质层厚度，降低叶片散水率，从而提高植物耐旱性。

关键词：苜蓿转基因抗旱性抗盐性 gszfp1基因 GsWRKY20基因气孔角质层

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