检索结果-南通市图书馆

中国农业科学 2022年第6期55卷 1253-1262页

作者：龙艳碧吴云飞张倩陈鹏潘敏慧西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学农业农村部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室

【目的】HSP90 是热休克蛋白家族的成员之一，在昆虫的抗逆性和变态发育中发挥重要作用，已有研究表明 HSP90能够促进家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的增殖，但作用机制尚不清楚。本研究通过鉴定 BmHSP90... 详细信息

【目的】HSP90 是热休克蛋白家族的成员之一，在昆虫的抗逆性和变态发育中发挥重要作用，已有研究表明 HSP90能够促进家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的增殖，但作用机制尚不清楚。本研究通过鉴定 BmHSP90 的相互作用蛋白，为其促进 BmNPV 增殖的作用机制解析提供参考。【方法】构建连接在 pIZ/V5-His 的BmHSP90HA真核过表达载体，在家蚕 BmN-SWU1 细胞中转染 48 h 后，感染 BmNPV 继续培养 48 h 后收集蛋白，保留总蛋白后将这些蛋白均分两管，进行免疫共沉淀，分别用抗 HA 抗体和 IgG 抗体钓取相互作用蛋白，对蛋白胶进行硝酸银染色后，获取差异条带并做质谱分析，将质谱结果与信息分析结合进行候选互作蛋白筛选，并克隆鉴定互作蛋白。通过免疫荧光验证 HSP90 与互作蛋白的共定位情况，并进一步采用免疫共沉淀试验确定其是否存在相互作用关系。【结果】硝酸银染色结果显示，试验组与对照组在 90、70 和 60 kD 附近处存在差异条带，并验证了 90 kD 处的差异条带为诱饵蛋白；将另外两条差异带进行质谱分析，共鉴定到 7 个候选相互作用蛋白，通过分析选择其中两个候选蛋白作后续研究，分别为Tubulin-specific chaperone E(Tbce)和 Golgin subfamily A member 5(golga5)。BmTbce 的最大开放阅读框长度为 1 728bp，编码 576 个氨基酸，Bmgolga5 的最大开放阅读框长度为 1 854 bp，编码 618 个氨基酸；同源比对和系统进化树显示 BmTbce的微管结合结构域(cytoskeleton-associated protein-glycine-rich,CAP-Gly)位于 N 端且在不同物种之间保守性较高，Bmgolga5 的跨膜区(transmembrane domain,TMD)位于 C 端，也较为保守；荧光共定位显示 BmHSP90 与 BmTbce 和 Bmgolga5在细胞质中发生共定位，并进一步通过免疫共沉淀证明 BmHSP90HA和 BmTbceFlag、BmHSP90HA和 Bmgolga5Flag具有相互作用关系。【结论】经过筛选与鉴定，在 BmNPV 感染家蚕细胞的过程中，与家蚕热休克蛋白 HSP90 发生相互作用的蛋白为 BmTbce 和Bmgolga5。

关键词：家蚕家蚕核型多角体病毒 HSP90 Tbce golga5

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