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gli1基因I495L和D933G多态性与先天性心脏病的相关性

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实用儿科临床杂志 2010年第19期25卷 1494-1496页

作者：邱广蓉李晓明辛娜姜红堃刘红波孙开来中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室沈阳110001 中国医科大学附属第一临床医院儿科沈阳110001 中国医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室沈阳110001

目的探讨gli1基因I495L和D933G多态性与先天性心脏病(CHD)的相关性。方法采用病例对照研究,选择180例CHD患儿[病例组,包括ASD37例、VSD65例及法洛四联症(TOF)78例]和200名健康体检儿童(健康对照组)。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多... 详细信息

目的探讨gli1基因I495L和D933G多态性与先天性心脏病(CHD)的相关性。方法采用病例对照研究,选择180例CHD患儿[病例组,包括ASD37例、VSD65例及法洛四联症(TOF)78例]和200名健康体检儿童(健康对照组)。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行gli1基因I495L和D933G位点多态性检测,分析上述2个多态位点基因型频率和等位基因频率在病例组和对照组的分布,比较各个位点不同基因型与CHD患病风险的关系。应用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果 gli1基因I495L多态位点基因型频率在VSD组、TOF组的分布与健康对照组比较差异有统计学意义(P=0.024,0.029),等位基因频率的分布亦存在统计学差异(P=0.015,0.004),且C等位基因携带者患VSD和TOF的风险高于A等位基因携带者(VSD:OR=1.658,95%CI1.101～2.496;TOF:OR=1.757,95%CI1.198～2.575);gli1基因D933G多态位点基因型频率在VSD组、TOF组的分布与健康对照组比较存在统计学差异(P=0.015,0.018),等位基因频率的分布亦存在统计学差异(P=0.039,0.008),且G等位基因携带者患VSD和TOF的风险高于A等位基因携带者(VSD:OR=1.520,95%CI1.020～2.266;TOF:OR=1.654,95%CI1.137～2.406)。结论 gli1基因I495L和D933G多态性与CHD具有明显的相关性,具有C、G等位基因的个体患CHD的风险增高。

关键词：心脏病,先天性 gli1基因多态性

沉默gli1基因对人非小细胞肺癌A549/DDP顺铂耐药性的影响

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中国免疫学杂志 2014年第8期30卷 1064-1068页

作者：达丽隽李华张献全重庆医科大学附属第二医院肿瘤科重庆400010

目的:以gli1 siRNA转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP,研究其对靶细胞顺铂耐药性的影响。方法:以gli1siRNA转染A549/DDP细胞,分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果,同时检测蛋白Bcl-2、caspase-3、cyclinD1的变化;Hoechst33258染色观察各组细... 详细信息

目的:以gli1 siRNA转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP,研究其对靶细胞顺铂耐药性的影响。方法:以gli1siRNA转染A549/DDP细胞,分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果,同时检测蛋白Bcl-2、caspase-3、cyclinD1的变化;Hoechst33258染色观察各组细胞自发性凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期;MTT法测定顺铂对各组细胞的半数抑制浓度(IC50);Annexin V-FITC法检测顺铂诱导的细胞凋亡率。结果:转染gli1 siRNA能有效抑制gli1在mRNA和蛋白水平上的表达(P=0.001);Bcl-2和cyclinD1蛋白表达水平明显下降(P=0.003),caspase-3表达量显著升高(P=0.001);实验组细胞的自发性凋亡率高于对照组;细胞周期显示:gli1 siRNA能使更多细胞停滞在G1期;IC50值由干扰前的(12.63±1.11)μg/ml/(13.81±1.14)μg/ml下降为干扰后的(2.65±0.85)μg/ml(P=0.000);顺铂诱导的细胞凋亡率明显提高(35.19%±3.92%vs6.43%±0.11%/5.01%±0.77%,P=0.000)。结论:利用RNA干扰技术能有效抑制gli1基因的表达,提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。这将为逆转肺癌细胞的耐药性提供新的研究思路和作用靶点。

关键词： gli1基因肺癌 RNA干扰顺铂耐药凋亡

肿瘤转移抑制基因1及gli1基因在子宫内膜腺癌细胞系中的表达

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中国生物制品学杂志 2016年第7期29卷 701-703,710页

作者：周向东李雪马彦张萍萍张思刘元林王洋童英张毅中国人民解放军空军总医院妇产科北京100142 军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室北京100850

目的探讨肿瘤转移抑制基因1(metastasis suppressor 1,MTSS1)及gli1基因在子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa和HEC-1A中的m RNA的转录及蛋白表达水平。方法体外培养子宫内膜高分化腺癌细胞系Ishikawa和中分化腺癌细胞系HEC-1A细胞,采用RT-PCR... 详细信息

目的探讨肿瘤转移抑制基因1(metastasis suppressor 1,MTSS1)及gli1基因在子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa和HEC-1A中的m RNA的转录及蛋白表达水平。方法体外培养子宫内膜高分化腺癌细胞系Ishikawa和中分化腺癌细胞系HEC-1A细胞,采用RT-PCR和Western blot法分别检测两株癌细胞系中MTSS1和gli1基因m RNA的转录及蛋白的表达水平。结果子宫内膜高分化腺癌细胞系Ishikawa中MTSS1基因m RNA的转录及蛋白的表达水平显著高于中分化细胞系HEC-1A(Pgli1基因m RNA转录及蛋白表达水平显著低于HEC-1A细胞系(P基因,通过调控Sonic hedgehog(Shh)信号通路参与子宫内膜腺癌的发生发展,为进一步研究子宫内膜腺癌的发生发展机制奠定了基础。

关键词：肿瘤转移抑制基因1 gli1基因子宫内膜腺癌 Ishikawa细胞 HEC-1A细胞

沉默gli1基因对人肺腺癌细胞株A549/DDP顺铂耐药性的影响

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沉默Gli1基因对人肺腺癌细胞株A549/DDP顺铂耐药性的影响

作者：达丽隽重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：以gli1siRNA转染人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP，研究基因沉默效应对靶细胞顺铂耐药性的影响及可能机制。方法1应用MTT法测定顺铂对A549、A549/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50），从而计算A549/DDP细胞的耐药指数。2采用qRT-PCR和we... 详细信息

目的：以gli1siRNA转染人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP，研究基因沉默效应对靶细胞顺铂耐药性的影响及可能机制。方法1应用MTT法测定顺铂对A549、A549/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50），从而计算A549/DDP细胞的耐药指数。2采用qRT-PCR和western blot分别从mRNA和蛋白水平检测A549及A549/DDP细胞中gli1的表达。3以gli1siRNA转染A549/DDP细胞。qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光分别从mRNA和蛋白水平检测gli1的干扰效果。4Western blot检测干扰后gli1的下游蛋白Bcl-2、cyclinD2及caspases-3表达量的变化。5Hoechst33258染色及流式细胞术分别测定转染后细胞的自发性凋亡情况及细胞周期变化。6MTT法测定转染后顺铂对各组细胞抑制率的变化;AnnexinV-FITC法检测顺铂诱导的各组细胞凋亡率。结果1顺铂对A549和A549/DDP细胞的的IC50分别为2.38±0.31μg/mL和16.75±0.54μg/mL，A549/DDP细胞耐药指数约为7.04(P＜0.001)，为中等耐药细胞株。2与A549细胞相比，A549/DDP细胞中gli1在mRNA和蛋白水平的表达均显著增高(P＜0.01)。3转染gli1siRNA后48h，实验组gli1mRNA和gli1蛋白的表达量明显低于阴性转染组及空白对照组（P＜0.001)。4转染后48h实验组Bcl-2、cyclinD2的表达量显著低于阴性转染组和空白对照组(P＜0.01);而凋亡蛋白caspases-3在实验组的表达量明显高于在阴性转染组和空白对照组中的表达（P＜0.001）。5转染48h后，利用Hochest33258对细胞进行染色。可见实验组发生核固缩和核亮染的细胞数量明显多于阴性转染组及空白对照组。细胞周期显示：实验组G1期(77.54±0.71%), S期(17.72±0.66%) vs阴性转染组G1期(62.47±1.15%), S期(33.50±1.05%)/空白对照组G1期(61.88±1.18%), S期(32.93±1.76%)（P＜0.001）。6MTT结果示： IC50值由干扰前的12.63±1.11μg/mL/13.81±1.14μg/mL下降为干扰后的2.65±0.85μg/mL(P＜0.001）。顺铂诱导的细胞凋亡率：实验组35.19±3.92%;阴性转染组6.43±0.11%;空白对照组5.01±0.77%（P＜0.001）。结论1gli1基因在人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549，提示gli1与肺癌顺铂耐药可能相关。2利用RNA干扰技术能显著抑制gli1基因的表达，从而下调Bcl-2、cyclinD2蛋白水平，提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

关键词： gli1基因肺腺癌 RNA干扰顺铂耐药

骨髓增生异常综合征患者外周血单个核细胞中OTC4,gli1基因的表达及与预后的COX回归分析

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现代检验医学杂志 2022年第6期37卷 58-64页

作者：张冬梅万顺伦于丽华中国人民解放军海军青岛特勤疗养中心五区检验科山东青岛266000 中国人民解放军海军第971医院神经内科山东青岛266000

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者外周血单个核细胞中八聚体结合转录因子4(octamer binding transcription factror 4,OTC4),gli1基因的表达及与预后的COX回归分析。方法对2017年3月~2018年3月收治的54例MDS患者进行临床及随访研究,另选取40例同期体检健康者为对照组,采集所有受试者骨髓后分离单个核细胞,以实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测OTC4和gli1基因相对表达情况,并分析其与MDS患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制MDS患者生存曲线,并采用COX回归分析MDS患者预后的影响因素。结果OTC4(2.78±0.31),gli1(1.35±0.33)基因在MDS患者外周血单个核细胞中的相对表达水平明显高于健康对照组(1.07±0.17,0.53±0.13),差异有统计学意义(t=31.524,14.868,均P基因表达与MDS患者Hb,PLT,IPSS-R危险分层有关;gli1基因表达与MDS患者PLT,IPSS-R危险分层有关(t=2.722,2.282,均P11,P>0.05)。OTC4基因低表达MDS患者OS(36.73±1.46个月),PFS(26.28±0.91个月)均明显长于OTC4基因高表达MDS患者水平(29.10±1.26个月,22.54±1.08个月)(Log-rankχ^(2)=10.038,13.623,均Pgli1基因低表达MDS患者OS(35.74±1.29个月),PFS(27.81±0.94个月)均明显长于OTC4基因高表达MDS患者水平(26.16±1.37个月,19.61±0.96个月)(Log-rankχ^(2)=16.210,20.135,均P基因相对表达水平、gli1基因相对表达水平均为阳性MDS患者预后的独立影响因素(Pgli1基因在MDS患者外周血单个核细胞中呈高表达,且与WBC,WHO(2008)分型、IPSS-R危险分层均为影响MDS患者预后的独立因素。抑制OTC4,gli1基因表达有望成为MDS潜在治疗靶点。

关键词：骨髓增生异常综合征八聚体结合转录因子4基因 gli1基因 COX回归分析

结肠癌组织中Shh和gli1基因的表达及临床意义

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中国医药科学 2011年第9期1卷 12-14,21页

作者：蔡清河涂海健余加和杨莺卿谢志勇莆田学院附属医院普通外科福建莆田351100 莆田学院附属医院检验科福建莆田351100 莆田学院附属医院血透室福建莆田351100

目的探讨Shh和gli1基因在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用RT-PCR方法和免疫组织化学对38例结肠癌手术切除的标本进行Shh和gli1基因表达检测,评估Shh和gli1基因表达与结肠癌临床病理的关系。结果癌组织的Shh和gli1基因呈高表达,与癌... 详细信息

目的探讨Shh和gli1基因在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用RT-PCR方法和免疫组织化学对38例结肠癌手术切除的标本进行Shh和gli1基因表达检测,评估Shh和gli1基因表达与结肠癌临床病理的关系。结果癌组织的Shh和gli1基因呈高表达,与癌旁组织比较,两者有显著性差异;Shh和gli1基因表达强度与癌的分期密切相关,早期结肠癌的表达强度明显高于进展期癌。结论 Shh信号通路异常的活性状态有可能参与结肠癌的发生过程。Shh和gli1基因检测对评估结肠癌的分期和预后具有重要意义。

关键词：肿瘤结肠 Shh基因 gli1基因

靶向人转录因子gli1基因的RNAi真核表达载体的构建与鉴定

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中华胰腺病杂志 2013年第2期13卷 118-121页

作者：郭杰芳高军龚燕芳金晶吴红玉满晓华李兆申第二军医大学长海医院消化内科上海200433

目的利用pGCsi—U6-GFP质粒构建干扰人转录因子gli1基因的小发夹RNA（shRNA）表达载体，并进行干扰活性鉴定。方法根据GenBank中gli1cDNA的序列，设计并合成3条gli1siRNA，分别克隆至质粒载体pGCsi-U6-GFP中构建重组质粒，转化大肠杆菌D... 详细信息

目的利用pGCsi—U6-GFP质粒构建干扰人转录因子gli1基因的小发夹RNA（shRNA）表达载体，并进行干扰活性鉴定。方法根据GenBank中gli1cDNA的序列，设计并合成3条gli1siRNA，分别克隆至质粒载体pGCsi-U6-GFP中构建重组质粒，转化大肠杆菌DH5a，扩增后提取质粒，行PCR及测序鉴定。脂质体转染法将鉴定正确的3个重组质粒pGCsi—U6-gli1siRNA-1、pGCsi—U6-GHlsiRNA4、pGCsi—U6-gli1siRNA-3及作为阴性对照质粒的pGCsi—U6-gli1siRNA—C分别与过表达质粒pEGFP—N1-gli1共转染HEK293细胞株，48h后收集细胞，半定量RT—PCR及蛋白质印迹法检测各组细胞gli1mRNA及蛋白的表达，鉴定筛选出最佳干扰质粒。结果3个重组质粒pGCsi-U6-gli1siRNA-1、pGCsi—U6-gli1siRNA-2、pGCsi-U6-gli1siRNA-3均扩增出预期大小（369bp）的片段，经测序证实与设计合成的序列完全一致。3个重组质粒转染HEK29细胞后细胞gli1mRNA表达量分别为0．290±0．011、0．421±0．018、0．373±0．018，蛋白表达量分别为0．318±0．026、0．433±0．021、0．381±0．018，均显著低于阴性对照质粒转染细胞的0．834±0．022及0．818±0．024（P=0．000）。gli1mRNA表达抑制率分别达65．8％、50．7％、55．7％，蛋白表达抑制率分别为63．9％、48．3％、53．9％，以pGCsi-U6-gli1siRNA．1的干扰作用最强。结论成功构建了靶向gli1的shRNA表达载体，筛选出具有最佳干扰效果的质粒，为进一步研究gli1基因功能奠定了基础。

关键词： RNA干扰 shRNA 转录因子 gli1基因 Hedgehog信号通路

靶向gli1基因增强卵巢癌细胞化疗敏感性的实验研究

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中国肿瘤外科杂志 2010年第2期2卷 81-85页

作者：巩向玲宋彩霞刘世松王平青岛经济技术开发区妇幼保健院妇产科山东青岛266555 胶南市人民医院高压氧治疗中心山东青岛266400 四川大学华西医院妇产科四川成都317000

目的探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株gli1基因的表达,促进凋亡并逆转其顺铂耐药的可行性。方法体外构建gli1小发夹状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/DDP细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检... 详细信息

目的探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株gli1基因的表达,促进凋亡并逆转其顺铂耐药的可行性。方法体外构建gli1小发夹状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/DDP细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测gli1 mRNA的表达;使用免疫细胞化学法(ICC)检测gli1蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果 gli1 shRNA转染组细胞gli1 mRNA的表达与其他两组相比明显减弱(Pgli1蛋白表达明显下调(Pgli1合成的siRNA能够有效地抑制gli1 mRNA和蛋白的表达,促进卵巢癌耐药细胞凋亡并能恢复其对顺铂的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。

关键词：卵巢癌 gli1基因 RNA干扰逆转耐药

Hedgehog信号通路基因Shh、Ptch1、Smo及gli1在胰腺癌中的表达及意义

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世界华人消化杂志 2015年第18期23卷 2894-2900页

作者：依马木买买提江.阿布拉李东伟易超李海军新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830011 中国人民解放军兰州军区兰州总医院普通外科甘肃省兰州市730050 深圳大学附属罗湖医院外科中心广东省深圳市518000

目的:检测Hedgehog信号通路基因Sonic Hedgehog(Shh)、Patched1(Ptch1)、Smoothened(Smo)及神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(glioma-associated oncogene homolog 1,gli1)在胰腺癌组织中的表达及其生物学意义.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测48例胰腺癌组织和配对的癌旁组织中Shh、Ptch1、Smo及gli1 mRNA的表达情况.结果:RT-PCR检测结果显示:Shh、Ptch1、Smo及gli1 mRNA在胰腺癌组织中的相对表达量分别是0.652±0.036、0.604±0.063、0.493±0.011、0.512±0.052,在胰腺癌旁组织中为0.312±0.013、0.319±0.053、0.214±0.046、0.247±0.059(P1、Smo及gli1 mRNA表达量显著升高(P1、Smo及G l i1mRNA表达与胰腺癌的分化程度有显著性差异(P19-9)无显著性差异(P>0.05).结论:Hedgehog信号通路基因Shh、Ptch1、S m o及G l i1在胰腺癌组织中表达增高,Hedgehog信号通路的异常激活可能与胰腺癌发生发展过程相关.

关键词：胰腺癌 Shh基因 Ptch1基因 Smo基因 gli1基因