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Characterization of CircRNA-Associated CeRNA Networks in Folate Deficiency-Induced Neural Tube Defects

生物医学与环境科学:英文版 2023年第9期36卷 837-849页

作者： WANG Shan ZENG Yu Bing PEI Pei HE Xue Jia LIU Fan WANG Yi ZHANG Ting Beijing Municipal Key Laboratory of Child Development and Nutriomics Capital Institute of PediatricsBeijing 100020China Capital Institute of Pediatrics-Peking University Teaching Hospital Beijing 100020China Children's Hospital Capital Institute of Pediatrics Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical CollegeBeijing 100020China

Objective Circular RNAs(circRNAs)participate in several important pathological processes and have been used in the diagnosis and treatment of various diseases.This study aimed to investigate the role of circRNAs in neural tube defects(NTDs).Method We characterized circRNA-associated competitive endogenous RNA(ceRNA)networks in brain tissue of low folate-induced NTDs mouse at embryonic day 13.5 by high-throughput sequencing.The expression levels of Circzfp644,miR-20-5p and gas7 were detected by RT-PCR.gas7 and Circzfp644functions were determined by miRNA-mimics and inhibitors in mouse teratocarcinoma cells(F9 cells),and luciferase gene reporter assay was assessed in the F9 cells.In addition,the expression levels of Circzfp644,miR-20-5p and gas7 were determined by Nanostring in human NTDs tissues.Results We detected 57 circRNA transcripts,16 miRNAs,and 148 mRNAs that were significantly dysregulated in NTDs brain tissues compared with their expression levels in control(normal)tissues.Circzfp644 shared miRNA response elements with the growth arrest specific 7(gas7)gene and competitively bound with miR-20-5p to increase the expression of gas7.Downregulation of Circzfp644and gas7 and upregulation of miR-20-5p were found in human NTD tissue.Conclusion This study provides new perspectives on the role of circRNAs in nervous system development and the pathogenesis of NTDs.

关键词： Circzfp644 gas7 miR-20-5p Folate deficiency NTDs

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Co-immunolocalization of Disc1 and gas7 protein in adult mice brain

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Brain Science Advances 2022年第1期8卷 70-77页

作者： Udaya Kumar Unit of Biochemistry Department of ZoologyUniversity of MadrasChennaiTamil NaduIndia Department of Neurology University of California Los AngelesLos AngelesCaliforniaU.S.A.

Objective: The aim of the present study was to check the potential interaction of two neurodevelopmental proteins, Disc1 and gas7, in the adult mice brain. Methods: Twenty-four male Swiss albino mice were used for the study. The mice were 12 weeks old in the beginning of the experiment. Immunohistochemistry and co-immunofluorescence were performed on the coronal sections of mice brain and immunoblotting and co-immunoprecipitation were done on the whole brain lysate. Results: Data from immunohistochemistry and co-immunofluorescence indicate the occurrence and co-localization of Disc1 and gas7 proteins in soma and projections of the brain cells. Immunostaining was observed in cerebral cortex, hypothalamus, midbrain, pons, medulla oblongata and CA3 of hippocampus of the brain. The data from Immunoblotting and co-immunoprecipitation validates the presence and interaction of Disc1 and gas7 protein in whole brain lysate. Conclusion: Data indicates the potential interaction of Disc1 and gas7 protein in adult brain. The study highlights the need for further research on Disc1-gas7 protein interaction in brain development and neuro-disorders.

关键词： Disc1 gas7 co-immunolocalization co-immuno-fluorescence co-immunoprecipitation

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gas7、ALDH3B1及AHNAK在急性髓系白血病治疗前后的表达变化及机制研究

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2023年第6期 39-41页

作者：郭丽影姜丽波卢停刘雪包晓琳齐齐哈尔医学院附属第二医院血液科黑龙江齐齐哈尔161000

探索在急性髓系白血病(AML)治疗前及缓解后gas7、ALDH3B1及AHNAK基因的表达变化及机制研究。方法:通过使用实时荧光定量 RT-PCR方法检测gas7、ALDH3B1及AHNAK基因在33例初诊急性髓系白血病(AML)患者治疗前及完全缓解后骨髓中gas7、ALDH... 详细信息

探索在急性髓系白血病(AML)治疗前及缓解后gas7、ALDH3B1及AHNAK基因的表达变化及机制研究。方法:通过使用实时荧光定量 RT-PCR方法检测gas7、ALDH3B1及AHNAK基因在33例初诊急性髓系白血病(AML)患者治疗前及完全缓解后骨髓中gas7、ALDH3B1及AHNAK基因的表达情况。结果:gas7、ALDH3B1及AHNAK在初诊急性髓系白血病(AML)患者骨髓中相对表达量低于治疗后缓解组中的表达水平 ( Pgas7、ALDH3B1及AHNAK基因在急性髓系白血病中的表达水平较缓解后表达水平低,考虑gas7、ALDH3B1及AHNAK基因可能参与了急性髓系白血病的发生发展。

关键词： gas7 ALDH3B1 AHNAK RT-PCR 急性髓系白血病AML

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gas7在人骨肉瘤中的表达及其意义(英文)

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The Chinese-German Journal of Clinical Oncology 2008年第2期7卷 118-120页

作者： Hua Chen Jianchao Wang Jie Xie Jinsheng Li Fang Wang Shenghong Liu Department of Orthopedics Tongji Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Wuhan 430030 China Department of Histology and Embryology Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Wuhan 430030 China

Objective: To detect the expression of gas7 in osteosarcoma and discuss its significance. Methods: Immuno- histochemistry SABC method was applied to detect gas7 expression in specimens of 54 osteosarcoma and 15 osteochon- droma cases. Results: The positive expression rate of gas7 was 74.7% (40/54) in the group of osteosarcoma and 0% (0/15) in the group of osteochondroma. There was a significant difference in the comparison of gas expression in these two groups (P gas7 was higher expressed in the samples which complicated with relapse or pulmonary metastasis than the control group (P gas7 expression and the size of tumor, the gender or the age of the patients (P > 0.05). Conclusion: The hyper-expression of gas7 may play an important role in the initiation and development of human osteosarcoma.

关键词： gas7 人骨肉瘤基因表达治疗方法

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gas7在大鼠海马和齿状回发育过程中的动态表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2011年第6期20卷 567-571页

作者：侯良芹熊克仁赵健丁艳霞皖南医学院解剖教研室安徽芜湖241000

目的研究生长休止蛋白7(gas7)在大鼠海马和齿状回不同发育阶段的表达。方法采用免疫组织化学方法观察gas7在SD大鼠胚胎第18d(E18)、新生(P0)、生后第7d(P7)、P14、P21和成年海马和齿状回中的表达和分布。结果在大鼠脑海马和齿状回部位... 详细信息

目的研究生长休止蛋白7(gas7)在大鼠海马和齿状回不同发育阶段的表达。方法采用免疫组织化学方法观察gas7在SD大鼠胚胎第18d(E18)、新生(P0)、生后第7d(P7)、P14、P21和成年海马和齿状回中的表达和分布。结果在大鼠脑海马和齿状回部位的冠状切片上,gas7免疫反应阳性产物主要表达在海马的锥体细胞、齿状回的颗粒细胞和门区的多形层细胞。随着发育的进程,在海马,gas7较早表达在CA3区,其次是CA2和CA1区;在齿状回,gas7在外臂的表达早于内臂,在颗粒细胞层的表达是按先外层后内层的顺序。在围生期,gas7在海马和齿状回各区的表达逐渐增强,至P14达到高峰,后逐渐降低,至P21其表达强度和分布趋于恒定至成年水平。结论 gas7在大鼠海马和齿状回发育过程中的动态表达具有时间和空间上的特异性,提示gas7可能参与了海马和齿状回形态形成和功能成熟的调控。

关键词： gas7 海马齿状回发育大鼠

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gas7在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2013年第3期22卷 203-206页

作者：侯良芹熊克仁丁艳霞丁见皖南医学院人体解剖学教研室安徽芜湖241000

目的研究生长休止蛋白7(gas7)在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达。方法成年SD大鼠12只,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、焦油紫染色以及免疫组织化学方法来观察gas7基因核酸和蛋白在成年SD大鼠脊髓和脊神经节的表达。结果 RT-PCR结... 详细信息

目的研究生长休止蛋白7(gas7)在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达。方法成年SD大鼠12只,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、焦油紫染色以及免疫组织化学方法来观察gas7基因核酸和蛋白在成年SD大鼠脊髓和脊神经节的表达。结果 RT-PCR结果显示,脊髓和脊神经节有较丰富的gas7mRNA表达。免疫组化结果显示:与焦油紫染色相对照,脊髓灰质各板层神经元均表达gas7蛋白,与其它版层相比较,后角Ⅱ版层胶状质的小细胞和前角Ⅸ版层的运动神经元显色较深且数量较多。脊髓白质gas7免疫阳性反应较弱且分布均匀。脊神经节内大型感觉神经元呈gas7免疫强阳性反应,中、小型感觉神经元为弱阳性反应。结论本文首次描述了gas7在成年大鼠脊髓和脊神经节的表达,为进一步研究gas7在成年神经系统再生和修复过程中的功能提供形态学基础。

关键词： gas7 脊髓脊神经节大鼠

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gas7在大鼠梨状皮质发育过程中的表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2014年第2期23卷 154-158页

作者：黄锐刘敏侯良芹熊克仁皖南医学院人体解剖学教研室芜湖241000

目的研究生长休止蛋白(Growth arrest-specific protein 7,gas7)在大鼠梨状皮质发育过程中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测gas7核酸与蛋白在SD大鼠胚胎第18.5天(E18.5)、E20.5、出生当天(P0)、... 详细信息

目的研究生长休止蛋白(Growth arrest-specific protein 7,gas7)在大鼠梨状皮质发育过程中的表达。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测gas7核酸与蛋白在SD大鼠胚胎第18.5天(E18.5)、E20.5、出生当天(P0)、生后第7天(P7)、P14、P21和成年(Adult)各时期梨状皮质中的表达。结果 RT-PCR结果显示gas7核酸在大鼠梨状皮质各发育时期均有表达,在P14时表达最强;免疫组织化学方法显示梨状皮质在E18.5时即出现gas7免疫阳性产物,至P7时出现清晰的gas7免疫阳性细胞,至P14时细胞数达到峰值,免疫阳性反应最强,P21细胞数少于P14(Pgas7在梨状皮质的表达具有时间上的差异性,提示gas7可能在梨状皮质结构形成和功能成熟方面起着重要的调控作用。

关键词： gas7 梨状皮质发育大鼠

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LTCONS00014107-miR-29b-2-3p-gas7轴在热刺激诱导的大鼠食管癌前病变模型中的作用研究

LTCONS00014107-miR-29b-2-3p-GAS7轴在热刺激诱导的大鼠食管癌前...

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作者：王晶郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,全世界范围内在癌症导致的死亡中食管癌位列第六,2018年约50.9万人死于食管癌,约占所有癌症相关死亡的5%。食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是其最常见的亚型,主要... 详细信息

背景和目的食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,全世界范围内在癌症导致的死亡中食管癌位列第六,2018年约50.9万人死于食管癌,约占所有癌症相关死亡的5%。食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是其最常见的亚型,主要分布在中国北部,伊朗东北部和南非。目前有足够的流行病学证据支持食用高温食品和饮料是ESCC的重要危险因素。例如在中国北方,尤其是太行山地区,如河南林州市,人们习惯于喝热水,这导致林州是全国范围内ESCC发生率最高的地区之一。长期以来,人们一直猜测食用热食热饮与ESCC之间的关系。尽管有证据表明热刺激与ESCC之间存在正相关,但其潜在机制仍不清楚。长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA。目前的研究证明,lncRNA在细胞周期调控、表观遗传调控等多种生命活动中发挥着至关重要的作用,成为遗传学研究热点。MicroRNA(miRNA)是一种小型,高度保守的单链非编码RNA,通常由20至24个核苷酸组成。它可以特异性结合靶mRNA的3’-末端非编码区(3’-UTR)并诱导靶mRNA降解或抑制翻译过程,导致生物学功能的改变,例如细胞增殖,分化和凋亡。据报道,在哺乳动物暴露于各种应激源后,lncRNA和miRNA的表达谱将发生变化,但是关于其受热调控的改变却鲜有报道。本研究中,我们模拟人食用热食及热饮的习惯,首先构建热刺激诱导的大鼠食管癌前病变动物模型。然后,通过转录组测序技术(RNA-seq)分析lncRNA和miRNA的表达谱,筛选出差异表达的lncRNA LTCONS0014107和miRNA miR-29b-2-3p,并猜测 LTCONS0014107 可能为 miR-29b-2-3p 前体,两者共同在热刺激诱导的食管鳞癌中发挥作用,并进一步通过细胞热刺激实验和细胞表型实验进行验证。最后,通过数据库分析和qRT-PCR技术发现miR-29b-2-3p潜在的靶基因可能是gas7,通过对gas7在食管癌中的作用研究,进一步明确LTCONS0014107-miR-29b-2-3p-gas7轴在热刺激诱导的食管癌变过程中的发生机制,为热刺激诱导的食管鳞癌的防治提供一定的实验基础和理论依据。方法1.构建热刺激诱导的大鼠食管癌前病变动物模型,HE染色法检测热刺激对大鼠食管粘膜的影响。2.将各组大鼠食管组织进行RNA-seq,筛选与热刺激相关的差异表达的lncRNAs 和 miRNAs。3.通过设计差异表达的lncRNA LTCONS0014107的特异性qRT-PCR引物来验证RNA-seq数据,并在大鼠细胞中确定其与miR-29b-2-3p的关系。4.在大鼠皮肤成纤维细胞(RS1)中,利用siRNA敲低LTCONS0014107表达,通过MTT、Soft agar克隆形成实验研究其生物学功能。5.利用qRT-PCR技术,检测miR-29b-2-3p在食管鳞癌细胞中的表达情况。6.构建miR-29b-2-3p sponge载体沉默miR-29b-2-3p的表达,利用慢病毒上调rniR-29b-2-3p的表达,并通过MTT、平板克隆和Soft agar克隆形成实验研究其在食管鳞癌中的生物学功能。7.利用生物信息学网站预测,结合相关文献报道,筛选miR-29b-2-3p调控的靶基因,并通过qRT-PCR技术验证miR-29b-2-3p与靶基因之间的关系。结果1.长期饮用65℃热水可导致大鼠食管黏膜癌前病变。2.RNA-seq分析显示LTCONS0014107在大鼠食管组织中的表达下调,miR-29b-2-3p的表达上调。3.LTCONS0014107和miR-29b-2-3p的序列比对以及热刺激实验表明LTCONS0014107 的降解促进了 miR-29b-2-3p 的表达,LTCONS0014107 可能是miR-29b-2-3p的前体。4.敲低LTCONS0014107明显抑制RS1细胞的生长速度和克隆形成能力。5.与正常食管上皮细胞相比,miR-29b-2-3p在大多数食管鳞癌细胞系中表达上调。6.沉默miR-29b-2-3p抑制食管鳞癌细胞增殖和克隆形成能力,而过表达miR-29b-2-3p促进食管鳞癌细胞增殖和克隆形成能力。7.gas7是miR-29b-2-3p的潜在靶基因,且两者的表达呈负相关。结论1.长期热刺激可诱发大鼠食管粘膜的癌前病变,导致LTCONS0014107的降解和miR-29b-2-3p的表达上调。2.miR-29b-2-3p通过抑制靶基因gas7的表达,促进食管鳞癌细胞增殖和克隆形成。3.热刺激通过LTCONS0014107-miR-29b-2-3p-gas7轴促进食管鳞癌的发生和发展。

关键词：食管鳞癌热刺激 LTCONS00014107 miR-29b-2-3p gas7

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细胞龄相关分子在不同月龄大鼠睾丸和附睾的表达

细胞龄相关分子在不同月龄大鼠睾丸和附睾的表达

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作者：段永刚华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾的表达目的:检查c-Kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾组织中的表达差异,研究睾丸和附睾在成熟和衰老过程中表达的规律性改变,为研究男性生殖系统衰老提供理论依据。... 详细信息

第一部分c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾的表达目的:检查c-Kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾组织中的表达差异,研究睾丸和附睾在成熟和衰老过程中表达的规律性改变,为研究男性生殖系统衰老提供理论依据。方法:运用免疫组织化学(S-P法)检查6月龄、12月龄和24月龄SD大鼠睾丸和附睾组织中c-Kit、HIWI和波形蛋白抗血清免疫反应强度,并对其进行比较分析。结果:c-Kit特异性免疫反应阳性主要表达于精原细胞,其他细胞表达水平甚弱。附睾上皮、附睾管腔内成分亦有c-Kit阳性表达。HIWI在大鼠睾丸和附睾组织中表达也很丰富,6月龄和12月龄大鼠中各级生精细胞,特别是精原细胞和初级精母细胞为免疫反应强阳性细胞;支持细胞、间质细胞、类肌细胞和血管内皮细胞亦为HIWI阳性细胞。附睾上皮有HIWI阳性表达。但是24月龄大鼠睾丸和附睾组织中随年龄增长HIWI表达下调(P>0.05)。波形蛋白在睾丸和附睾组织中表达模式为6月龄大鼠睾丸和附睾组织中低表达,24月龄大鼠睾丸和附睾组织表达明显上调(P >0.01)。结论:c-kit、HIWI在24月龄动物睾丸和附睾组织中表达下调,波形蛋白表达随增龄而明显增强。结果提示,睾丸和附睾组织的衰老与细胞和细胞信号转导异常密切相关. 第二部分gas7在不同月龄大鼠睾丸和附睾的表达实验一gas7-GST融合蛋白的表达和多克隆抗体的制备目的:制备gas7多克隆抗体,为深入研究gas7在睾丸和附睾的结构与功能的关系提供特异工具。方法:PCR扩增编码大鼠gas7羧基末端456bp的DNA片段,DNA重组入原核表达质粒pGEX-3X,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-gas7融合蛋白。经谷胱甘肽-琼脂糖珠(Glutathione Sepharose 4B)介质填充的层析柱分离纯化蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体,Western Blot检测抗体的免疫效果和抗体的特异性。结果:成功构建pGEX-3X-gas7原核表达载体,获得分子量约为43kD的融合蛋白,免疫家兔后得到抗gas7的多克隆抗体。通过Western Blot检测显示,抗体的效价在1:100 000以上;在脑组织和睾丸组织的表达与国外报道一致,同时发现在附睾组织亦有表达。结论:重组质粒表达的gas7- GST融合蛋白具有良好的抗原性,成本效益良好。制备的特异性和高效价的抗gas7的多克隆抗体,能够满足针对gas7免疫印迹和免疫组化技术检查等实验要求。实验二gas7蛋白及其mRNA在不同月龄大鼠睾丸和附睾的表达目的:检查gas7蛋白及其mRNA在不同月龄大鼠睾丸和附睾组织中的表达差异,研究睾丸和附睾在成熟和衰老过程中规律性变化,旨在研究男性生殖系统衰老的病理机制。方法:运用免疫组织化学方法(S-P法)和组织原位杂交技术检查6月龄、12月龄和24月龄SD大鼠睾丸和附睾组织中gas7蛋白及其mRNA表达情况,并对其进行比较分析。结果:免疫组化S-P法显示,gas7蛋白在6月龄和12月龄睾丸和附睾组织中呈低表达,主要表达于减数分裂后的圆形精子细胞、长形精子细胞的尾部、间质细胞、类肌细胞、附睾管壁及精子尾部;在24月龄睾丸和附睾组织表达明显上调。原位杂交方法显示结果与免疫组化结果相似,gas7mRNA阳性棕黄色颗粒杂交信号在6月龄和12月龄睾丸和附睾组织中呈低表达,而在24月龄睾丸和附睾组织呈高表达。结论:gas7蛋白及其mRNA随年龄增长在大鼠睾丸和附睾表达明显增强。该结果提示,睾丸和附睾组织的衰老与细胞和细胞信号转导异常密切相关,即老化分子的堆积而影响细胞行为。

关键词： c-Kit HIWI 波形蛋白睾丸附睾衰老 gas7 原核表达多克隆抗体免疫印迹法 gas7蛋白 gas7mRNA 大鼠

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生长休止蛋白7在成年大鼠肾脏、心脏和肝脏中的差异表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2013年第2期22卷 145-149页

作者：侯良芹丁艳霞熊克仁皖南医学院人体解剖学教研室芜湖241000

目的研究生长休止蛋白7(gas7)在成年大鼠肾脏、心脏和肝脏的表达。方法成年SD大鼠16只,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测gas7基因mRNA和蛋白在成年SD大鼠肾脏、心脏和肝脏的表达,并进行图像分析和统计学... 详细信息

目的研究生长休止蛋白7(gas7)在成年大鼠肾脏、心脏和肝脏的表达。方法成年SD大鼠16只,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法检测gas7基因mRNA和蛋白在成年SD大鼠肾脏、心脏和肝脏的表达,并进行图像分析和统计学处理。结果 RT-PCR结果显示,gas7mRNA在肾脏高表达,在心脏的表达弱于肾脏(Pgas7免疫阳性产物在近髓肾单位的近曲小管呈强阳性反应,在集合管表达较弱,在肾小球和其余肾小管未见表达;在心脏中,gas7免疫阳性产物均匀分布于心肌细胞,呈中等强度反应,弱于肾脏(Pgas7蛋白未见明显表达,与其mRNA在肝脏的表达相似。结论 gas7在大鼠肾脏、心脏和肝脏表达的不同,尤其在肾脏组织分布的差异性,提示gas7在成年大鼠肾脏和心脏结构以及功能的维持中可能起着重要作用。

关键词： gas7 肾脏心脏肝脏大鼠

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