检索结果-南通市图书馆

作者：田瑞雪东北师范大学

学位级别：硕士

碳水化合物识别结构域(CRD)是凝集素与糖配体结合的结构基础,不同种类的凝集素所具有的不同CRD决定了其对糖残基的选择性识别。人巨噬细胞半乳糖型凝集素(hMGL)是C-型凝集素家族(CLRs)的重要成员之一,通过与不同的配体分子结合,引起免... 详细信息

碳水化合物识别结构域(CRD)是凝集素与糖配体结合的结构基础,不同种类的凝集素所具有的不同CRD决定了其对糖残基的选择性识别。人巨噬细胞半乳糖型凝集素(hMGL)是C-型凝集素家族(CLRs)的重要成员之一,通过与不同的配体分子结合,引起免疫激活或免疫耐受。现在已知,hMGL可以特异性地识别其糖配体分子末端的galnac,但对于其CRD中参与同galnac识别的关键氨基酸并不清楚。在本研究中,我们采用了生物膜干涉和流式细胞术两种实验方法,从蛋白和细胞两个水平分析了hMGL CRD的4种截短突变和17种单点突变对其与Gal NAc识别的影响,对hMGL与galnac结合的结构基础进行了初步解析。实验结果表明,Gln240、Asp242、Glu253、Asn265和Asp266对于hMGL与galnac的结合具有非常重要的作用。氨基酸序列比对和空间结构模拟分析表明,以上5个氨基酸不仅是hMGL CRD中的Ca结合位点,而且也参与了其与galnac的特异性识别。其次,证实了His257、Asp225、Thr227和Asp228对hMGL与galnac的结合也具有重要作用。氨基酸序列比对和空间结构模拟分析表明,以上4个氨基酸可能不是直接参与同galnac的结合,而是通过贡献于Ca结合位点空间结构的形成发挥重要作用。参与hMGL与galnac特异性结合的关键氨基酸位点的鉴定研究,不仅有助于揭示hMGL与其配体识别的结构基础,而且也为今后进一步研究不同的凝集素对糖分子的选择性识别机制提供重要的前期基础。

关键词： hMGL galnac 识别的结构基础生物膜干涉流式细胞术

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利用Click交联反应引入配体galnac以对siRNA进行功能化修饰

利用Click交联反应引入配体GalNAc以对siRNA进行功能化修饰

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中国化学会第30届学术年会-第二十八分会：化学生物学

作者：安钰坤席真南开大学化学学院南开大学元素有机化学国家重点实验室

RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNA)引发的基因沉默现象,RNAi技术是基因功能研究的重要手段。目前困扰siRNA进入临床的主要困难有siRNA分子易降解、稳定性差、递送效率低、存在脱靶效应和免疫刺激反应等。因此,高特异性siRNA的设计和修... 详细信息

RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNA)引发的基因沉默现象,RNAi技术是基因功能研究的重要手段。目前困扰siRNA进入临床的主要困难有siRNA分子易降解、稳定性差、递送效率低、存在脱靶效应和免疫刺激反应等。因此,高特异性siRNA的设计和修饰是siRNA安全有效应用于临床治疗的关键。本文的研究工作是以对siRNA进行功能性修饰为目的而展开的。首先,通过多步有机合成,制备一端带有叠氮基团,三端带有galnac配体的四端小分子,再利用固相合成得到含有炔基修饰的siRNA,然后使用经典的金属Cu(I)催化的Click反应来合成含有不同spacer长度的galnac修饰的siRNA,进而对其化学修饰后siRNA分子的药动学性状及RNAi功能进行了分析,从而实现高效的靶向性的siR NA的构建。

关键词： RNA干扰 galnac Click反应化学修饰

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外周血galnacT mRNA的表达与早期肺癌微转移的研究

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 666-668页

作者：潘永成孟利峰赵峰王建军华中科技大学同济医学院附属协和医院胸外科武汉430022

目的观察早期肺癌患者外周血及淋巴结中galnacT mRNA的表达，探讨其作为肺癌微转移标志物的可行性。方法应用巢式RT-PCR技术检测35例I、Ⅱ期肺癌患者和12例肺部良性病变患者外周血及淋巴结手术标本，以及10例来志健康志愿者血液标本中Ga... 详细信息

目的观察早期肺癌患者外周血及淋巴结中galnacT mRNA的表达，探讨其作为肺癌微转移标志物的可行性。方法应用巢式RT-PCR技术检测35例I、Ⅱ期肺癌患者和12例肺部良性病变患者外周血及淋巴结手术标本，以及10例来志健康志愿者血液标本中galnacT mRNA的表达。结果galnacT mRNA在经手术病理证实的35例I期、Ⅱ期肺癌患者外周血标本中8例（22．86％）为阳性，43个肺门及纵隔淋巴结21个（46．67％）为阳性。而在12例良性肺部肿瘤及10名健康志愿者外周血均为阴性。在手术切除的43个淋巴结中，RT-PCR法检测到21个（48．84％）有微转移，而常规病理检查只有11个（25．58％）淋巴结有转移，两者差异有统计学分析意义（P〈0．05）。结论galnacT mRNA可作为RT-PCR法检测早期肺癌患者外周血微转移的分子标志物，其特异性高，但敏感性较低，有助于早期诊断肺癌转移。

关键词：肿瘤标志物微转移肺癌 galnac T

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Homology Modeling of CrylAc Toxin-binding Alkaline Phosphatase Receptor from Helicoverpa armigera and Its Functional Interpretation

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Chinese Journal of Chemistry 2011年第3期29卷 427-432页

作者： Shan, Shiping Xia, Liqiu Ding, Xuezhi Zhang, Youming Hu, Shengbiao Sun, Yunjun Yu, Ziquan Han, Lizhen Key Laboratory of Microbial Molecular Biology of Hunan Province College of Life Science Hunan Normal University Changsha Hunan 410081 China College of Life Science Guizhou University Guiyang Guizhou 550025 China

Alkaline phosphatases （ALPs） attached to the midgut membrane with glycosyl phosphotidyl inositol （GPI） have been proposed as the putative CrylAc toxin receptor in Helicoverpa armigera. Activated toxins bind to ALP receptors on the brush border membrane vesicle （BBMV） of the midgut epithelium, which activates intracellular oncotic pathways and leads to cell death. However, with the long-term use of Cry toxin, insects can develop a strong resistance to insecticidal delta-endotoxins. Although the molecular mechanism of insect resistance has not been fully understood, insects develop resistance to biopesticides due to changes of toxins binding to midgut receptors. So, it is a good idea to investigate the molecular mechanism of insect resistance by analyzing ALP receptor from Helicoverpa armigera （Ha-ALP）. Based on crystal structure of shrimp alkaline phosphatase, the three-dimensional structure of the CrylAc toxin-binding Ha-ALP receptor was obtained by homology modeling and the model was further evaluated using PROSA energy and ERRAT. The important role of binding of toxin to galnac on Ha-ALP was discussed in the aspect of CrylAc toxicity. Specific recognition sites of the binding of oligosaccharides to Ha-ALP were predicted. Post-translational modification of ALP provides insights into the functional properties of ALP and leads to profound understanding of receptor and toxin interactions.

关键词： alkaline phosphatase receptor brush border membrane vesicle galnac oligosacchride

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肺癌患者外周血、淋巴结β1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶mRNA的检测及其临床意义

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实用医学杂志 2007年第15期23卷 2326-2328页

作者：赵峰孟利峰潘永成王建军刘全付校华中科技大学同济医学院附属协和医院胸外科武汉市430022

目的:通过研究分子标志物β1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶(galnac T)mRNA在肺癌患者外周血及淋巴结的表达,探讨肺癌微转移的临床意义。方法:应用巢式RT-PCR技术检测35例Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者标本(癌组织、淋巴结及外周血)和12例肺部良性病变... 详细信息

目的:通过研究分子标志物β1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶(galnac T)mRNA在肺癌患者外周血及淋巴结的表达,探讨肺癌微转移的临床意义。方法:应用巢式RT-PCR技术检测35例Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者标本(癌组织、淋巴结及外周血)和12例肺部良性病变患者手术标本及10例来自健康志愿者血液标本中galnac T mRNA的表达。结果:galnac T mRNA在35例Ⅰ期、Ⅱ期肺癌病人中22例(63%)为阳性,外周血标本中8例(23%)为阳性,43个肺门及纵隔淋巴结中21个(49%)为阳性。而在12例良性肺部肿瘤及10例健康志愿者外周血中均为阴性。结论:galnac T mRNA可作为RT-PCR法检测肺癌患者外周血微转移的分子标志物,有助于早期诊断肺癌转移,为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。

关键词：肺肿瘤肿瘤标记,生物学微转移 galnac T

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N-乙酰半乳糖胺工程化仿生基因药物递送系统的构建及其肝靶向性研究

N-乙酰半乳糖胺工程化仿生基因药物递送系统的构建及其肝靶向性研...

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作者：何轩华南理工大学

学位级别：硕士

代谢相关脂肪性肝病(Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)严重危害我国人民生命健康,基因治疗为改善MAFLD提供了新思路。肝实质细胞约占肝细胞总数的60%-70%,与MAFLD的发生发展密切相关,是基因治疗的重要靶细... 详细信息

代谢相关脂肪性肝病(Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)严重危害我国人民生命健康,基因治疗为改善MAFLD提供了新思路。肝实质细胞约占肝细胞总数的60%-70%,与MAFLD的发生发展密切相关,是基因治疗的重要靶细胞。阳离子脂质纳米颗粒(Cationic lipid nanoparticles,LNPs)已成功应用于临床的肝靶向基因递送,但仍面临肝实质细胞靶向不高、枯否细胞的非特异性吞噬和肝毒性等挑战。发展兼具高靶向性和生物安全性以及低免疫原性的肝实质细胞靶向递送系统极具挑战性,是当前生物医学工程领域发展的前沿方向。三触角N-乙酰半乳糖胺(Triantennary N-acetylgalactosamine,Tri-galnac,GN3)对肝实质细胞表面高表达的去唾液酸糖蛋白受体(Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)具有较高的亲和力,而细胞膜仿生载体具有低免疫原性和高生物安全性等特性。受此启发,本论文将GN3整合至细胞膜表面,构筑GN3工程化仿生递送系统,以期提高肝实质细胞的靶向性并降低免疫原性。细胞膜表面GN3工程化的选择和效率影响了GN3配体在细胞膜上的分布行为学,进一步左右了其与ASGPR结合以及递送系统内化的效率,终而决定了肝实质细胞靶向效果。点击化学法和脂质插入法均是细胞膜表面工程化中常用的重要方法之一,具有操作简便、耗时短等优势。因此,本论文拟使用化学工程化中的点击化学法和物理工程化中的脂质插入法对细胞膜进行GN3工程化,但二者的工程化效率对肝实质细胞靶向效果的影响规律尚未清楚。本论文拟在回答GN3工程化仿生递送系统的构建方式如何影响其肝实质细胞靶向性和免疫原性的基础上,发展兼具高靶向性和低免疫原性的GN3工程化仿生递送系统,进一步探索其递送siRNA实现MAFLD治疗的有效性和安全性,证实该仿生肝实质细胞靶向系统在靶向性、免疫原性和生物安全性中的独特优势,主要取得了如下研究成果:(1)首先通过脂质插入和点击化学对配体工程化效率进行考察和优化,结果表明脂质插入法具有更高的GN3工程化效率和肝实质细胞靶向性。进一步考察脂质插入顺序和细胞膜来源对肝实质细胞(Hepatocytes,HCs)靶向效率的影响,证实对细胞膜进行脂质后插入再对MSNs进行包覆的MSN@CM-GN3肝实质细胞靶向效率更高,并发现了巨噬细胞膜制备的MSN@CM-GN3-R比骨髓来源的间充质干细胞膜制备的系统具有更显著的肝实质细胞靶向性。最后,本论文通过脂质后插入法制备GN3工程化巨噬细胞膜包覆的递送系统,其具有最优的GN3工程化效率以及肝实质细胞靶向能力。(2)在此基础上,本论文证实细胞对MSN@CM-GN3的摄取具有时间和浓度依赖性,其肝实质细胞靶向依赖于递送系统的高密度GN3和细胞的高ASGPR受体水平。细胞对MSN@CM-GN3的摄取过程呈现能量依赖性,涉及网格蛋白、小窝蛋白或巨胞饮介导的内吞途径。重点比较了MSN@CM-GN3和GN3工程化脂质递送系统(MSN@LP-GN3)在体内外的HCs靶向、枯否细胞(Kupffer cells,KCs)逃逸和细胞安全性,结果表明与传统MSN@LP-GN3相比,MSN@CM-GN3具有良好的细胞安全性。在动物水平证实了MSN@CM-GN3可有效富集至肝脏,与MSN@LP-GN3相比,MSN@CM-GN3在保留肝实质细胞高效靶向能力的同时还有效地减少了枯否细胞的吞噬。(3)最后本论文以可特异性沉默PCSK9的siRNA为模型药物,构建GN3工程化仿生递送系统,在体内外水平考察GN3工程化仿生递送系统的基因沉默效率,优化给药剂量和给药时间。结果表明MSN/siRNA@CM-GN3可有效增加siRNA在肝实质细胞中的富集,且其在体内外的基因治疗效率呈现时间和剂量依赖性。在HFD诱导MAFLD模型小鼠中,MSN/siRNA@CM-GN3能够通过PCSK9/LDLR途径启动机体的基因沉默过程,显著降低MAFLD小鼠的LDL-C、TC和TG水平,减轻了MAFLD小鼠肝脏脂肪大量蓄积的情况,改善脂质积累。MSN/siRNA@CM-GN3的降脂效果和安全性均优于MSN/siRNA@LP-GN3,初步证实了该仿生递送系统用于肝实质细胞特异性基因沉默的有效性和安全性。综上,本论文围绕如何开发兼具高靶向效率和低免疫原性的肝实质细胞靶向递送系统的关键科学问题,通过精准调节仿生递送系统细胞膜上的靶向配体分布,开发了肝实质细胞靶向性高、免疫原性低的GN3工程化仿生递送系统,克服了肝实质细胞靶向高和低免疫原性难以兼顾的挑战,为实现高效、安全的肝脏实质疾病的基因治疗提供了潜在材料;发现了GN3工程化仿生递送系统的构建方式对

关键词：仿生递送系统肝实质细胞靶向 galnac siRNA递送

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