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水稻Os05g0442400基因启动子分析以及由Os05g0442400基因启动子引导gus报告基因在转基因水稻中的表达

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上海师范大学学报（自然科学版） 2013年第2期42卷 186-191页

作者：宋亚娥张红梅李建粤上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 上海市闵行区第三中学上海200240

采用Plant CARE和PLACE软件分析预测水稻Os05g0442400基因启动子序列中可能存在的顺式作用元件.结果显示,在起始密码子ATG上游1500bp区域内,除了启动子基本的核心作用元件外,还存在一些与植物抵御非生物胁迫过程有关的作用元件、脱落酸... 详细信息

采用Plant CARE和PLACE软件分析预测水稻Os05g0442400基因启动子序列中可能存在的顺式作用元件.结果显示,在起始密码子ATG上游1500bp区域内,除了启动子基本的核心作用元件外,还存在一些与植物抵御非生物胁迫过程有关的作用元件、脱落酸应答元件、光诱导启动子作用元件、病原菌诱发因子作用元件,以及根特异性结合位点.采用根癌农杆菌介导法成功将Os05g0442400 promoter::gus构建导入"中花11"水稻.由不同组织部位gus染液检测表明:在水稻苗期,内源Os05g0442400基因可能主要在根部表达;随着水稻生殖期的延续,水稻内源Os05g0442400基因在颖壳中的表达区域由上向下面积增大,并在抽穗后达到最大表达区域.这些结果可能与Os05g0442400基因启动子上分别存在根特异性结合位点和光诱导启动子作用元件具有一定的联系.

关键词：水稻 Os05g0442400基因启动子顺式作用元件转基因 gus报告基因

一个新的重组酶系统在转基因植物外源基因删除中的应用

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高技术通讯 2005年第7期15卷 61-66页

作者：罗克明赵德刚 Li Yi 裴炎西南大学生物技术中心重庆400716康涅狄格州立大学植物学系CT 06269USA 贵州大学农业生物技术重点实验室贵阳550025康涅狄格州立大学植物学系CT 06269USA 康涅狄格州立大学植物学系 CT 06269USA 西南大学生物技术中心重庆400716

为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、gus报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融... 详细信息

为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、gus报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融合识别位点loxFRT之间.将上述重组酶系统通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草,获得的再生植株分别通过gus组织染色和PCR分析等方法进行鉴定.然后在37℃下热激处理转基因植株,利用gus组织染色检测重组酶系统在转基因植株T1代幼苗中删除外源基因的效率,结果显示,该系统删除效率达到了48.2%～84.9%,说明通过重组酶系统pLFHFGN能够有效地删除转基因植物中的外源基因,这为解决转基因植物潜在的安全性问题提供了一条新的途径.

关键词：转基因植物酶系统基因删除位点特异性重组 gus报告基因安全性问题转基因植株应用外源基因筛选标记基因根癌农杆菌 PCR分析热激蛋白识别位点介导转化再生植株热激处理系统删除启动子重组酶酶基因染色

水稻组织特异型人工合成启动子的设计、构建及功能鉴定

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作物学报 2017年第6期43卷 789-794页

作者：王睿朱梦琳高方远任鄄胜陆贤军任光俊林拥军华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室湖北武汉430070 四川省农业科学院作物研究所四川成都610066

合成启动子是合成生物学的一个重要研究领域及研究热点。水稻是世界上最重要的粮食作物之一,亦是禾本科作物功能基因组研究的模式植物。本研究旨在对水稻组织特异表达启动子的合成作有益尝试。根据已发表的文献选取了一些与组织特异表... 详细信息

合成启动子是合成生物学的一个重要研究领域及研究热点。水稻是世界上最重要的粮食作物之一,亦是禾本科作物功能基因组研究的模式植物。本研究旨在对水稻组织特异表达启动子的合成作有益尝试。根据已发表的文献选取了一些与组织特异表达相关的顺式元件,将它们以不同的方式组合并连接Mini 35S核心启动子以驱动gus报告基因的表达。转基因水稻的gus组织化学染色和酶活测定结果证实,通过上述方法在水稻中成功构建出组织特异型合成启动子,同时也揭示了顺式元件在合成启动子中不同的组合方式对启动子的表达活性和表达模式起着关键作用。本研究为植物合成启动子的设计思路和构建方法提供了有益信息和实践基础。

关键词：水稻合成启动子 gus报告基因顺式调控元件

Ac/Ds(gus)结构介导的水稻启动子捕获系统的建立

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植物生理与分子生物学学报 2005年第6期31卷 575-580页

作者：王爱民陈石燕沈革志王新其鞠丹花王钟林王宗阳蔡秀玲中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海市农业科学院作物研究所上海201106 华东理工大学上海200237

构建了基于Activator/Dissociation(β-glucuronidase)[简称Ac/Ds(gus)]结构的捕获质粒p13B,用于分离水稻基因启动子。以此质粒用农杆菌介导的方法转化粳稻品种中花11的胚性愈伤组织,对获得的18个独立转化株的T2代植株进行了抗除草剂筛... 详细信息

构建了基于Activator/Dissociation(β-glucuronidase)[简称Ac/Ds(gus)]结构的捕获质粒p13B,用于分离水稻基因启动子。以此质粒用农杆菌介导的方法转化粳稻品种中花11的胚性愈伤组织,对获得的18个独立转化株的T2代植株进行了抗除草剂筛选,从141个抗除草剂转基因植株中用PCR方法检测到其中37株是Ds因子发生了转座的植株,而且这种转座到新位置上的Ds因子是遗传的。初步观察到其中5株的gus染色呈阳性。

关键词： Ac/Ds双因子启动子捕获 gus报告基因 Bar基因水稻

带有报告基因的板栗疫病菌寄生隐赤壳分泌表达突变体库的构建及分泌缺陷突变体的筛选

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菌物学报 2021年第7期40卷 1688-1699页

作者：李茹仇金凤杨彦彦王金子陈凤月陈保善广西大学生命科学与技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西南宁530004 广西大学农学院广西南宁530004 广西民族大学海洋与生物技术学院广西南宁530006

丝状真菌分泌蛋白与其致病性密切相关,目前对于病原真菌的蛋白胞外分泌途径及其调控机制的报道不多。为建立一个方便高效的真菌分泌蛋白调控途径的遗传研究体系,本研究以植物病原丝状真菌——板栗疫病菌寄生隐赤壳Cryphonectria parasit... 详细信息

丝状真菌分泌蛋白与其致病性密切相关,目前对于病原真菌的蛋白胞外分泌途径及其调控机制的报道不多。为建立一个方便高效的真菌分泌蛋白调控途径的遗传研究体系,本研究以植物病原丝状真菌——板栗疫病菌寄生隐赤壳Cryphonectria parasitica为对象,选取分泌表达量最高的两个分泌蛋白的信号肽SP1和SP2,分别构建带有gus报告基因的分泌蛋白表达载体p CPXBle-SP1-gus和p CPXBle-SP2-gus并用于转化板栗疫病菌。选择高效分泌gus蛋白的转化株SP1-9为出发菌株,利用农杆菌介导的遗传转化技术构建了T-DNA插入突变体库,从576个突变体中筛选到2株gus分泌表达明显降低的突变体。本研究成功构建了可用于研究丝状真菌蛋白分泌的遗传研究体系,并筛选获得了分泌蛋白缺陷突变体,为深入研究丝状真菌分泌途径及其调控机制奠定了基础。

关键词：寄生隐赤壳分泌途径 gus报告基因根癌农杆菌

花生AhFAD2-1基因启动子及5'-UTR内含子功能验证及其低温胁迫应答

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作物学报 2021年第9期47卷 1703-1711页

作者：石磊苗利娟黄冰艳高伟张忠信齐飞艳刘娟董文召张新友河南省农业科学院河南省作物分子育种研究院/农业农村部黄淮海油料作物重点实验室/河南省油料作物遗传改良重点实验室/花生遗传改良国家地方联合工程实验室河南郑州450002 河南生物育种中心有限公司河南郑州450002 河南省农业科学院经济作物研究所河南郑州450002

Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因(FAD2)催化油酸生成亚油酸,是决定油酸亚油酸比值的关键基因。高油酸花生对低温更加敏感,暗示FAD2在低温响应中发挥作用。为探索花生FAD2的低温胁迫应答,本研究分析了花生FAD2-1A/B的基因结构,从普通油酸花生... 详细信息

Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因(FAD2)催化油酸生成亚油酸,是决定油酸亚油酸比值的关键基因。高油酸花生对低温更加敏感,暗示FAD2在低温响应中发挥作用。为探索花生FAD2的低温胁迫应答,本研究分析了花生FAD2-1A/B的基因结构,从普通油酸花生品种豫花9326中克隆了FAD2-1A/B启动子和内含子,并通过转化拟南芥验证了功能及其对冷胁迫的应答。结果表明,AhFAD2-1A/B包含2个外显子和1个位于5'-UTR的内含子;AhFAD2-1A/B基因启动子功能较弱,仅AhFAD2-1B启动子在子叶期幼苗的子叶叶尖中观察到蓝色;AhFAD2-1假基因5'侧翼序列具有启动子活性,可调控基因在子叶、下胚轴、种子中表达。AhFAD2-1内含子序列具有启动子的功能,驱动基因在幼苗下胚轴及子叶中表达,同时还有提高基因表达效率和扩大表达范围的功能,是AhFAD2-1基因表达调控必需元件;包含5'-UTR内含子的AhFAD2-1A/B启动子的调控序列功能受低温胁迫抑制。

关键词：花生 Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因(FAD2) 启动子内含子介导增强冷胁迫 gus报告基因

花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因启动子的克隆及功能分析

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作物学报 2016年第11期42卷 1629-1637页

作者：石磊苗利娟齐飞艳张忠信高伟孙子淇黄冰艳董文召汤丰收张新友河南省农业科学院经济作物研究所/农业部黄淮海油料作物重点实验室/河南省油料作物遗传改良重点实验室/花生遗传改良国家地方联合工程实验室河南郑州450002

Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RAC... 详细信息

Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RACE方法获得了该基因的5＇UTR序列,通过序列比对确定720 bp片段为Ah SAD启动子区域。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多个与光诱导和激素响应相关顺式序列元件。将Ah SAD启动子片段替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游gus基因表达,构建植物表达载体pBI-PAh SAD。通过农杆菌介导法转化拟南芥和在花生不同组织中瞬时表达,利用gus组织化学染色研究其表达特性。表明在拟南芥和花生受体中,AhSAD启动子主要调控下游基因在根、茎、叶片和子叶中表达,在花生的果针中也检测到gus活性;拟南芥的茎生叶只有叶脉中具有gus活性,而花生整个叶片中都具有gus活性。

关键词：花生 Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(SAD) 启动子基因组步移 gus报告基因

豌豆终止子rbc-T在转基因小麦研究中的应用

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作物学报 2017年第8期43卷 1254-1258页

作者：王小婷黄锁徐兆师李连城马有志陈明闵东红西北农林科技大学农学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100 中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部麦类生物学与作物遗传育种重点实验室北京100081

目前常用的转基因载体元件大多为真菌或细菌来源,引发对转基因食品安全性的担忧。本研究克隆了豌豆终止子rbc-T,并用其替换农杆菌终止子nos-T构建转化载体,利用基因枪法将携带Ubi启动子、gus基因和终止子rbc-T组成的最小表达框片段转化... 详细信息

目前常用的转基因载体元件大多为真菌或细菌来源,引发对转基因食品安全性的担忧。本研究克隆了豌豆终止子rbc-T,并用其替换农杆菌终止子nos-T构建转化载体,利用基因枪法将携带Ubi启动子、gus基因和终止子rbc-T组成的最小表达框片段转化普通小麦,同时以带有nos-T终止子的载体为对照,经过PCR检测筛选获得T2代稳定遗传的转基因小麦株系。gus组织化学染色及酶活定量分析结果表明,带有nos-T及rbc-T的转基因小麦中均能检测到gus基因不同程度的表达。因此认为,豌豆终止子rbc-T可以代替农杆菌终止子nos-T用于小麦的转基因研究。

关键词：胭脂碱合酶终止子(nos-T) 豌豆终止子(rbc-T) 转基因小麦 gus报告基因

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基于启动子捕获系统的水稻基因的分离

西北植物学报 2013年第7期33卷 1298-1303页

作者：王爱民高霞莉蔡秀玲江苏师范大学生命科学学院江苏徐州221116 中国科学院上海生命科学研究所植物生理生态研究所上海200032

为了分离水稻的基因及其启动子,该实验室构建了T-DNA(gus)结构的水稻启动子捕获系统,对其中编号为113#、T-DNA单拷贝插入、gus报告基因为组成型表达的阳性捕获系进行了进一步分析。潮霉素筛选结合gus组织化学染色获得了T-DNA插入的纯合... 详细信息

为了分离水稻的基因及其启动子,该实验室构建了T-DNA(gus)结构的水稻启动子捕获系统,对其中编号为113#、T-DNA单拷贝插入、gus报告基因为组成型表达的阳性捕获系进行了进一步分析。潮霉素筛选结合gus组织化学染色获得了T-DNA插入的纯合株(113#-22和113#-26);Inverse法分离得到T-DNA插入位点水稻基因组DNA旁邻序列,测序和BLAST结果表明,T-DNA反方向插在水稻基因组4号染色体预测基因的内含子中;扩增T-DNA插入位点上游2kb左右DNA片段,构建启动子分析质粒转化水稻‘中花11’胚性愈伤组织,获得转基因植株,gus组织化学染色模式与113#阳性株系一致。结果表明,该预测基因及其启动子是利用启动子捕获系统所捕获到的候选基因。

关键词：启动子捕获系统分离基因水稻 gus报告基因 T—DNA