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Rho gtp酶在ω-3多不饱和脂肪酸抑制人前列腺癌PC-3细胞转移中的作用

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癌症 2007年第12期26卷 1281-1286页

作者：易龙张乾勇糜漫天第三军医大学军事预防医学院营养与食品卫生学教研室重庆市营养与食品安全重点实验室重庆400038

背景与目的:近年来,多不饱和脂肪酸对肿瘤发生、发展影响的研究备受关注。本实验主要观察两种ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid,ω-3PUFA)二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic... 详细信息

背景与目的:近年来,多不饱和脂肪酸对肿瘤发生、发展影响的研究备受关注。本实验主要观察两种ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid,ω-3PUFA)二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对人前列腺癌细胞株PC-3转移的影响,并通过检测ω-3 PUFA对细胞内Rho gtp酶蛋白表达及细胞骨架重组影响,揭示Rho gtp酶在ω-3 PUFA抑制肿瘤转移中的作用。方法:MTT法观察ω-3 PUFA对PC-3细胞增殖能力的影响,体外粘附实验、侵袭实验和迁移实验观察ω-3 PUFA对肿瘤细胞转移的影响。Western blot法检测ω-3 PUFA对与细胞骨架重组相关的RhoA、Rac1、Rac2和Cdc42蛋白表达的影响。免疫荧光细胞化学法标记微丝和微管,激光共聚焦扫描显微镜观察ω-3 PUFA对细胞骨架重组的影响。结果:EPA及DHA均能抑制PC-3细胞增殖,增殖抑制率均随处理浓度增大和作用时间延长而增加。与对照组比较,60μmol/L的EPA或DHA处理后的PC-3细胞体外粘附性、侵袭性和迁移性均显著下降(Pgtp酶基因表达,抑制Rho gtp酶对细胞骨架重组的调控,导致细胞骨架结构改变,削弱肿瘤细胞的粘附性、侵袭性和迁移性,抑制PC-3细胞的转移。

关键词：肿瘤 PC-3细胞株转移 ω-3 PUFA Rho gtp酶细胞骨架

弓形虫与疟原虫入侵引起宿主细胞骨架重组相关gtp酶不同定位的观察

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中国人兽共患病学报 2012年第12期28卷 1155-1160页

作者：陈艾媛娜仁花彭鸿娟赵亚广东省广州市沙太南路1023号南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515 陕西省西安市长乐西路169号第四军医大学基础医学院病原生物学教研室西安710032

目的方法,结果,结论弓形虫与疟原虫均是顶复门(Phylum Apicomplexa),孢子纲(Class Sporozoea),真球虫目(Order Eucoccidiida)的细胞内寄生原虫,入侵宿主细胞后均寄生于纳虫泡内进行发育增殖。细胞内寄生原虫的入侵均需要宿主细胞的细胞... 详细信息

目的方法,结果,结论弓形虫与疟原虫均是顶复门(Phylum Apicomplexa),孢子纲(Class Sporozoea),真球虫目(Order Eucoccidiida)的细胞内寄生原虫,入侵宿主细胞后均寄生于纳虫泡内进行发育增殖。细胞内寄生原虫的入侵均需要宿主细胞的细胞骨架发生重组,Rhogtp酶是哺乳动物细胞(有核细胞及红细胞)调节细胞骨架重组的重要酶类。我们在研究中发现宿主细胞的RhoA及Rac1gtp酶在弓形虫速殖子侵染后被纳入了纳虫泡膜(Parasitophorous Vacuole Membrane,PVM)上并高丰度聚集,然而在疟原虫裂殖子侵染的红细胞内却没有发现这两种gtp酶在纳虫泡膜上聚集的现象。宿主细胞RhoA及Rac1gtp酶在弓形虫及疟原虫感染宿主细胞后的不同分布,显示这两种原虫感染引起宿主细胞骨架重组的途径是不同的。

关键词：弓形虫疟原虫细胞骨架重组 Rho gtp酶

p47 gtp酶在日本血吸虫感染中的应答特征

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中国病原生物学杂志 2013年第1期8卷 12-18页

作者：陈莹莹高雅楠陈琳侯敏王铖芸季旻珺吴观陵南京医科大学病原生物学系江苏南京210029

目的建立日本血吸虫感染小鼠模型,研究Igtp和IRG-47在日本血吸虫感染中的作用特点及参与免疫应答的能力。方法以Igtp基因敲除(Igtp KO)小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47KO)小鼠和野生型C57BL/6J小鼠(WT)为研究对象,建立日本血吸虫感染实验... 详细信息

目的建立日本血吸虫感染小鼠模型,研究Igtp和IRG-47在日本血吸虫感染中的作用特点及参与免疫应答的能力。方法以Igtp基因敲除(Igtp KO)小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47KO)小鼠和野生型C57BL/6J小鼠(WT)为研究对象,建立日本血吸虫感染实验模型。感染10周后计数成虫数和虫卵数,以HE染色观察肝脏的病理变化,以间接ELISA法检测血清中日本血吸虫特异性IgG抗体,以RTQ-PCR检测脾细胞中细胞因子和趋化因子的mR-NA表达水平。结果日本血吸虫感染10周后,Igtp KO小鼠与WT小鼠虫荷数和卵荷数差异无统计学意义(Pgtp KO和WT小鼠。IRG-47KO组小鼠肝脏单个虫卵肉芽肿面积显著小于Igtp KO组和WT组(Pgtp KO小鼠SWAP和SEA特异IgG2a水平高于IRG-47KO小鼠和WT小鼠(Pgtp KO小鼠脾细胞il12、il4mRNA表达高于WT小鼠(Pgtp KO小鼠和WT小鼠(P<0.05)。结论 IRG-47缺失对日本血吸虫感染有一定保护作用,IRG-47KO小鼠肝脏病理特征与其趋化因子的表达相一致。

关键词：血吸虫,日本 p47 gtp酶免疫应答特征

Rho gtp酶参与肿瘤调控的下游效应蛋白

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生命的化学 2006年第3期26卷 252-254页

作者：陈玉霞刁飞第二军医大学病理生理学教研室上海200433

小G蛋白Rho家族是一类能结合gtp的蛋白质,在哺乳动物细胞的信号转导系统中发挥着“分子开关”样的重要作用。Rho蛋白通过其下游效应蛋白介导发挥多种生物学效应,包括调控细胞骨架重组、黏附和运动等。近年来,Rho蛋白在肿瘤细胞的增殖、... 详细信息

小G蛋白Rho家族是一类能结合gtp的蛋白质,在哺乳动物细胞的信号转导系统中发挥着“分子开关”样的重要作用。Rho蛋白通过其下游效应蛋白介导发挥多种生物学效应,包括调控细胞骨架重组、黏附和运动等。近年来,Rho蛋白在肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡和转移的调控中的作用渐受重视。该文就介导Rhogtp酶调控肿瘤发生发展的几个下游蛋白作一介绍。

关键词： Rho gtp酶肿瘤效应蛋白

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Rho gtp酶在肿瘤发生发展中的作用

生命的化学 2009年第4期29卷 563-567页

作者：吴福国陈一戎兰州大学生命科学学院生物化学与分子生物学研究所兰州730000 济宁医学院生物化学与分子生物学教研室济宁272013

Rho gtp酶属于Ras超家族的成员,在细胞中具有控制细胞形态、调控细胞增殖、黏附、迁移和膜运输等许多重要作用。近几年的研究表明,许多肿瘤(如乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌等)组织中的Rho gtp酶表达异常,此外,Rho gtp酶与恶性肿瘤的生... 详细信息

Rho gtp酶属于Ras超家族的成员,在细胞中具有控制细胞形态、调控细胞增殖、黏附、迁移和膜运输等许多重要作用。近几年的研究表明,许多肿瘤(如乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌等)组织中的Rho gtp酶表达异常,此外,Rho gtp酶与恶性肿瘤的生长、转化、转移和凋亡也密切相关。对Rho gtp酶的研究不仅有利于深入了解肿瘤的发病机制,而且有利于开发抗肿瘤的靶向药物。

关键词： Rho gtp酶肿瘤 ras

组成活化型Rac1 gtp酶通过上调促血小板血成素受体的表达促进白血病细胞的静息

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第8期24卷 828-832页

作者：李欢王继英于沛陈树英邢海燕田征唐克晶王敏饶青中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究Rac1 gtp酶的活化对白血病细胞静息的影响,并探索其机制。方法:构建Rac1组成活化型慢病毒载体,以此感染急性髓系白血病KG-1a细胞,比较感染了组成活化型Rac1的KG-1a(Rac1-V12-KG-1a)细胞和感染空载体的KG-1a(pCDH-KG-1a)细胞在G... 详细信息

目的:研究Rac1 gtp酶的活化对白血病细胞静息的影响,并探索其机制。方法:构建Rac1组成活化型慢病毒载体,以此感染急性髓系白血病KG-1a细胞,比较感染了组成活化型Rac1的KG-1a(Rac1-V12-KG-1a)细胞和感染空载体的KG-1a(pCDH-KG-1a)细胞在G0期的比例差异。以Rac1特异性抑制剂NSC23766处理感染后KG-1a细胞,4 d后检测两组细胞G0期比例的变化。实时定量PCR检测两组细胞中与细胞周期和细胞静息相关分子的表达。流式细胞术检测小鼠Rac1gtp酶高度活化的AMLI-ETO9a白血病细胞模型中促血小板生成素受体(myeloproliferative leukemia MPL)-和MPL+细胞群在G0期的比例。结果:感染了组成活化型Rac1的Rac1-V12-KG-1a细胞的G0期细胞比例显著高于感染空载体的p CDH-KG-1a细胞的比例[(15.30±0.60)%vs(11.50±0.17)%,Pgtp酶的活化通过上调MPL等细胞外在调节因子的表达增加休眠期细胞的比例,从而促进白血病细胞维持静息状态。

关键词： Rac1 gtp酶白血病细胞静息促血小板生成素受体微环境

干扰素诱导的gtp酶及其在抗感染先天免疫系统中的作用

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生命的化学 2008年第5期28卷 613-616页

作者：张艳叶向群汕头大学医学院汕头515041

干扰素(interferon,IFN)介导脊椎动物对微生物天然免疫反应的重要免疫分子。一般认为其效应主要是通过诱导ISG(interferon-stimulated gene)转录、表达生成相应效应蛋白来实现。其中gtpase家族是IFN诱导的蛋白质中最丰富的成员之一。目... 详细信息

干扰素(interferon,IFN)介导脊椎动物对微生物天然免疫反应的重要免疫分子。一般认为其效应主要是通过诱导ISG(interferon-stimulated gene)转录、表达生成相应效应蛋白来实现。其中gtpase家族是IFN诱导的蛋白质中最丰富的成员之一。目前研究较多的几个gtp酶(gtpase)有Mx蛋白(myxovirus-resistant,抗黏液病毒蛋白)、p47gtpase(immunity-related gtpase,IRG)、GBP(guanine bindin gprotein)、VLIG(very large inducible gtpase)。不同的脊椎动物中,gtpase家族成员的基因分布、蛋白质结构和功能及其机制等存在较大的差异。

关键词： gtp酶 Mx p47 GBP VLIG

Rho gtp酶在姜黄素抑制人肺癌细胞增殖和转移中的作用

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中国现代应用药学 2013年第5期30卷 475-480页

作者：徐炜陈清勇浙江中医药大学第二临床医学院杭州310053 解放军第一一七医院呼吸内科杭州310004

目的探讨姜黄素对人肺癌细胞株(A549)增殖和转移的影响,并通过检测姜黄素对细胞内Rho gtp酶蛋白表达及细胞骨架重组的影响,揭示Rho gtp酶在姜黄素抑制肺癌转移中的作用。方法应用MTT法观察姜黄素对A549增殖能力的影响,体外侵袭实验和迁... 详细信息

目的探讨姜黄素对人肺癌细胞株(A549)增殖和转移的影响,并通过检测姜黄素对细胞内Rho gtp酶蛋白表达及细胞骨架重组的影响,揭示Rho gtp酶在姜黄素抑制肺癌转移中的作用。方法应用MTT法观察姜黄素对A549增殖能力的影响,体外侵袭实验和迁移实验观察姜黄素对肺癌细胞转移的影响。Western blot和半定量RT-PCR法分别检测姜黄素对与细胞骨架重组相关的RhoA,Rac1,Cdc42蛋白和mRNA表达的影响。免疫荧光细胞化学法标记微丝,激光共聚焦扫描显微镜观察姜黄素对细胞骨架重组的影响。结果姜黄素能抑制A549细胞增殖,增殖抑制率均随处理浓度增大和作用时间延长而增加。与对照组比较,2.5,5μmol.L1的姜黄素处理24 h后的A549细胞增殖抑制率较低,但体外侵袭和迁移能力均显著下降(Pgtp酶基因表达,调控肺癌细胞微丝骨架结构,进而抑制体外增殖和转移能力。

关键词：肺癌细胞株增殖转移姜黄素 Rho gtp酶微丝骨架

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保守gtp酶的分子伴侣活性研究

保守GTP酶的分子伴侣活性研究

作者：薛佳莹山东大学

学位级别：硕士

gtp酶在生物体内广泛存在,控制许多关键的生物过程,如信号转导,蛋白质合成及运输,细胞分化,能量代谢等,发挥重要的生物学功能。基因序列分析显示其中有11个gtp酶在所有细菌中高度保守,这些保守gtp酶的生物学功能与核糖体相关,帮助核糖... 详细信息

gtp酶在生物体内广泛存在,控制许多关键的生物过程,如信号转导,蛋白质合成及运输,细胞分化,能量代谢等,发挥重要的生物学功能。基因序列分析显示其中有11个gtp酶在所有细菌中高度保守,这些保守gtp酶的生物学功能与核糖体相关,帮助核糖体发挥功能。核糖体是细胞内蛋白质合成的工厂,新生肽链刚从核糖体上翻译出来时没有形成稳定的三级结构,很容易相互聚集在一起形成沉淀。细胞为了保障体内蛋白质的质量,有多种多样的分子伴侣发挥功能帮助肽链折叠。有文章报道保守gtp酶中EF-G, EF-Tu, IF2,有分子伴侣活性,可以帮助蛋白折叠,但是关于其它的保守gtp酶的研究还比较少。为此本文研究了除LepA以外保守gtp酶的分子伴侣活性。实验中通过分子克隆技术将8种E. coli的gtpase基因克隆到载体pET-28a和pET-22b中,测序正确的重组质粒转化到E.coli （BL21）进行蛋白诱导表达纯化。蛋白纯化过程中初步纯化采用Ni柱,阳离子交换柱（SP柱）,疏水柱,精细纯化采用分子筛,脱盐柱。除EngA外,成功纯化到7种蛋白。纯化到的蛋白通过柠檬酸合成酶变复性实验,α-葡萄糖苷酶变复性实验检测分子伴侣活性。从实验结果来看,所有大肠杆菌的保守gtp酶都可以促进变性柠檬酸合成酶的复性,只是帮助复性的程度有所不同,有高有低。α-葡萄糖苷酶的变复性实验结果中,除Ffh外其余六种gtp酶均可以帮助变性的α-葡萄糖苷酶复性,而Ffh蛋白加入α-葡萄糖苷酶复性效率低,主要原因是在复性缓冲液中两个蛋白所带电性相反,导致聚集使酶失活。从实验结果分析大肠杆菌中保守的gtp酶都可以一定程度上起到分子伴侣的作用,由于它们非常古老而保守,在专门的分子伴侣进化出来前,细胞内可能依靠这些蛋白质来帮助新生肽链折叠并维持蛋白稳定性。从柠檬酸合成酶和α-葡萄糖苷酶变复性实验的结果分析显示,ObgE蛋白的分子伴侣活性比较高,为此进行了进一步研究。首先通过动态光散射检测了ObgE蛋白的均一度,发现ObgE蛋白的均一度很好。动态光散通过测量溶液中分子粒径大小来反映溶液中蛋白样品的均一度。结果显示,蛋白溶液中99.4% Mass的散射光均来自R为3.33 nm的颗粒物质。进一步实验采用牛碳酸苷酶变复性实验来验证ObgE蛋白的分子伴侣活性。实验结果显示ObgE蛋白对变性的牛碳酸苷酶的复性有明显的促进作用,可以提高变性的牛碳酸苷酶的复性效率。以上实验结果为保守gtp酶蛋白的研究应用奠定基础。

关键词： gtp酶分子伴侣基因克隆蛋白纯化