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gstθ在肿瘤中生物学功能的初步研究

GSTθ在肿瘤中生物学功能的初步研究

作者：乔惠萍苏州大学

学位级别：硕士

恶性肿瘤是严重危害人类健康的常见疾病之一。我国每年恶性肿瘤发病人数约160万。恶性肿瘤正在超过心脑血管疾病而成为致死原因的第一位。因此,恶性肿瘤的防治研究正成为全世界科学家关注的课题。在肿瘤发生、发展的过程中,代谢异常直... 详细信息

恶性肿瘤是严重危害人类健康的常见疾病之一。我国每年恶性肿瘤发病人数约160万。恶性肿瘤正在超过心脑血管疾病而成为致死原因的第一位。因此,恶性肿瘤的防治研究正成为全世界科学家关注的课题。在肿瘤发生、发展的过程中,代谢异常直接导致细胞的恶性生物学行为。恶性肿瘤代谢异常的主要原因是控制代谢的关键酶表达异常,导致酶活力增高或降低,而酶的异常又是基因调控和表达改变的结果。因此肿瘤相关基因及酶学研究对于了解肿瘤发生、发展有十分重要的意义,寻找酶学标志作为肿瘤临床诊断指标或药物治疗的目标靶均有很大的实践价值。现有很多的研究证明谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases, gst)是催化致癌物灭活反应的主要酶之一,并且可以作为癌前病变标志性的生物转化酶。本实验的目的是:了解增加gstθ表达水平对肿瘤细胞生长,细胞周期和放射敏感性的影响。我们选取两种肿瘤细胞:人类宫颈癌HeLa细胞和结肠癌HCT116细胞。通过脂质体Lipofectamine将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染到肿瘤细胞中,获得gstθ高表达的HeLa及HCT116细胞;采用RT-PCR和Western blot蛋白免疫印迹法分别检测gstθmRNA和蛋白的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的生长;MTT法检测细胞生长对血清浓度的依赖性;采用流式细胞仪分析细胞周期的变化;划痕实验观察gstθ对细胞侵袭性的作用;采用集落形成法观察gstθ对辐射敏感性的影响。实验结果总结如下:(1)人类宫颈癌HeLa细胞及HCT116细胞中gstθ基因缺失,检测不出其表达。(2)转染gstθ基因后两种细胞的生长均受到抑制,且HCT116细胞的抑制作用更明显。(3)gstθ高表达使HCT116细胞的生长对血清的依赖性增强,但这种作用在HeLa细胞中未观察到。(4)gstθ基因转染后HeLa细胞的侵袭性下降。(5)HeLa细胞及HCT116细胞辐射后细胞存活率在转染了gstθ基因后明显下降,这可能与流式细胞显示的G2/M期阻滞有关。(6)gstθ高水平表达降低了DNA损伤的修复蛋白XRCC4, DNA ligase IV和Ku70表达水平,从而增加了细胞的放射敏感性。这些实验结果表明:gstθ基因可以抑制两种肿瘤细胞的生长;有可能降低结肠癌细胞的恶性程度及降低宫颈癌的侵袭性;gstθ基因还可以增加宫颈癌细胞和结肠癌细胞的放射敏感性。以上结果均为国内首次发现。至于gstθ基因是通过怎样的方式、途径实现其对肿瘤细胞的作用,目前还在我们实验室研究中。本实验研究为将来gstθ基因作为肿瘤治疗的新靶点提供了新的理论依据和实验基础。

关键词： gstθ HeLa细胞 HCT116细胞细胞生长细胞周期放射敏感性

gstθ高表达抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增加放射敏感性

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中国医药指南 2008年第23期6卷 239-243页

作者：乔惠萍徐加英焦旸樊赛军苏州大学医学部放射医学与公共卫生学院 215123

目的了解增加gstθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长,细胞周期和放疗敏感性的影响。方法通过脂质体LipofectAMINE将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染获得高gstθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR和Western蛋白免疫印迹法检测分别检... 详细信息

目的了解增加gstθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长,细胞周期和放疗敏感性的影响。方法通过脂质体LipofectAMINE将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染获得高gstθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR和Western蛋白免疫印迹法检测分别检测gstθ mRNA和蛋白的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的生长;采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果gstθ高水平表达显著地延缓和降低HeLa细胞的生长,并导致G2/M期的阻滞。gstθ水平提高也增加了细胞对培养基中血清和生长因子的依赖性。另外,gstθ高水平的表达增加了HeLa细胞对电离辐射的敏感性。结论我们首次证实在HeLa细胞,gstθ高水平表达可以引起细胞周期阻滞,延缓和降低细胞生长和增加细胞的放射敏感性。这些实验结果将为gstθ作为一新的靶基因在宫颈癌治疗中的作用提供了实验基础和依据。

关键词： gstθ HeLa细胞细胞生长细胞周期放射敏感性

gstθ转染对宫颈癌HeLa细胞侵袭性的影响

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中外医疗 2011年第34期30卷 27-28,30页

作者：乔惠萍李启民陈鹏包头医学院第一附属医院放疗科内蒙古包头014010

目的了解增加gstθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染获得高gstθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR检测gstθmRNA的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的... 详细信息

目的了解增加gstθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染获得高gstθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR检测gstθmRNA的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的生长;采用划痕拍照方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 gstθ高水平表达显著地延缓和降低HeLa细胞的生长,并使HeLa细胞的侵袭能力下降。结论 gstθ高水平表达可以延缓和降低细胞生长并降低HeLa细胞的侵袭能力。

关键词： gstθ HeLa细胞细胞生长侵袭

gstθ高表达对肝癌7721细胞的生长及侵袭性的影响

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苏州大学学报（医学版） 2012年第1期32卷 23-25,88页

作者：乔惠萍李启民王英包头医学院第一附属医院放疗科内蒙古包头014010

目的探讨增加gstθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染获得高gstθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测gstθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细... 详细信息

目的探讨增加gstθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-gstθ真核质粒载体转染获得高gstθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测gstθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细胞的生长;采用Boyden小室方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 gstθ高水平表达对7721细胞的生长无明显影响,但使7721细胞的侵袭能力下降。结论本实验证实了在7721细胞中,gstθ高水平表达可以降低细胞的侵袭能力。

关键词： gstθ 7721细胞细胞生长侵袭