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阿法替尼与MEK抑制剂联合应用于细胞株NCI-H522、A549、UM-SCC-74B、JHU-O28的探索

阿法替尼与MEK抑制剂联合应用于细胞株NCI-H522、A549、UM-SCC-74...

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作者：林小峰广西医科大学

学位级别：硕士

第一部分阿法替尼与MEK抑制剂gsk1120212联合应用于腺癌细胞株NCI-H522和A549【目的】探索阿法替尼与MEK抑制剂gsk1120212联合应用对肺腺癌细胞相关蛋白表达、细胞增殖和凋亡的作用。【材料和方法】1.细胞功能实验,于普通培养皿培养NCI-... 详细信息

第一部分阿法替尼与MEK抑制剂gsk1120212联合应用于腺癌细胞株NCI-H522和A549【目的】探索阿法替尼与MEK抑制剂gsk1120212联合应用对肺腺癌细胞相关蛋白表达、细胞增殖和凋亡的作用。【材料和方法】1.细胞功能实验,于普通培养皿培养NCI-H522和A549细胞株,分别分为三组:单药阿法替尼组、单药gsk1120212组和联合用药组,每组内又接受4种不同的处理。单药阿法替尼组细胞分别用0(即对照组),2.5,5.0,10μMol/L终浓度的阿法替尼处理,单药gsk1120212组细胞分别用0,1.0,2.0,4.0μMol/L终浓度的gsk1120212处理,联合用药组分别用DMSO,5.0μMol/L阿法替尼,2.0μMol/L gsk1120212,5.0μMol/L阿法替尼+2.0μMol/L gsk1120212处理。培养24小时后收集细胞获取蛋白,western blot技术检测p-EGFR、p-AKT、p-S6、p-ERK1/2等蛋白的表达情况。2.细胞增殖实验,用96孔板培养细胞,分3种处理,2组单药处理按0,0.125,0.25,0.5,1.0,2.0μMol/L终浓度进行药物处理,联合用药组采用1:1联合用药处理,每个浓度均设计3个微孔;培养72小时后SRB法测定细胞增殖情况。3.细胞凋亡实验,药物处理同功能实验联合用药组,培养72小时,流式细胞术检测细胞凋亡情况。【结果】1.阿法替尼单独应用可抑制NSCLC NCI-H522、A549细胞株PI3K/AKT/mTOR下游蛋白p-EGFR、p-AKT、p-S6的表达,同时会诱导RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2表达增加。***1120212单独应用可抑制NCI-H522、A549细胞株RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2的表达,同时会诱导PI3K/AKT/mTOR下游蛋白表达增加p-AKT表达增加。3.阿法替尼与gsk1120212联合应用可以起到双通路互补抑制作用,p-AKT、p-S6、p-ERK1/2表达明显被抑制,gsk1120212能增强阿法替尼部分抑制效果。4.阿法替尼与gsk1120212联合应用可以更明显地抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。【结论】阿法替尼联合gsk1120212应用起到PI3K/AKT/mTOR、RAS/MEK/ERK双通路抑制的效果,能更好地抑制NCI-H522、A549细胞的生长、增殖,促进细胞凋亡。第二部分阿法替尼与MEK抑制剂PD0325901联合应用于鳞癌细胞株UM-SCC-74B和JHU-O28【目的】探索阿法替尼与MEK抑制剂PD0325901联合应用对鳞癌细胞相关蛋白表达、细胞增殖和凋亡的作用。【材料和方法】1.细胞功能实验,于普通培养皿培养UM-SCC-74B和JHU-O28细胞株,分别分为三组:单药阿法替尼组、单药PD0325901组和联合用药组,每组内又接受4种不同的处理。单药阿法替尼组细胞分别用0(即对照组),2.5,5.0,10μMol/L终浓度的阿法替尼处理,单药PD0325901组细胞分别用0,1.0,2.0,4.0μMol/L终浓度的PD0325901处理,联合用药组分别用DMSO,5.0μMol/L阿法替尼,2.0μMol/L PD0325901,5.0μMol/L阿法替尼+2.0μMol/L PD0325901处理。培养24小时后收集细胞获取蛋白,western blot技术检测p-EGFR、p-AKT、p-S6、p-ERK1/2等蛋白的表达情况。2.细胞增殖实验,用96孔板培养细胞,分3种处理,2组单药处理按0,0.125,0.25,0.5,1.0,2.0μMol/L终浓度进行药物处理,联合用药组采用1:1联合用药处理,每个浓度均设计3个微孔;培养72小时后SRB法测定细胞增殖情况。3.细胞凋亡实验,药物处理同功能实验联合用药组,培养72小时,流式细胞术检测细胞凋亡情况。【结果】1.阿法替尼单独应用可抑制HNSCC UM-SCC-74B和O28细胞株PI3K/AKT/m TOR下游蛋白p-EGFR、p-AKT、p-S6的表达,同时会诱导RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2表达增加。***0325901单独应用可抑制UM-SCC-74B和JHU-O28细胞株RAS/MEK/ERK通路关键蛋白p-ERK1/2的表达,同时会诱导PI3K/AKT/m TOR下游蛋白表达增加p-AKT表达增加。3.阿法替尼与PD0325901联合应用可以起到双通路互补抑制作用,p-AKT、p-S6、p-ERK1/2表达明显被抑制,PD0325901能增强阿法替尼部分抑制效果。4.阿法替尼与PD0325901联合应用可以更明显地抑制细胞增殖、促进细胞凋

关键词：阿法替尼 gsk1120212 联合腺癌细胞增殖凋亡阿法替尼 PD0325901 联合鳞癌细胞增殖凋亡

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