检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=GOS3"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

嗜热糖苷酶的改造及gos3对LS174T细胞的活性

嗜热糖苷酶的改造及GOS3对LS174T细胞的活性

引用

作者：衣丽吉林大学

学位级别：硕士

功能性低聚半乳糖(Galacto-Oligosaccharides,gos)是一种益生元,不能被人体利用,不会在小肠被消化,从而能够顺利到达结肠,被结肠中的微生物发酵,刺激结肠内有益菌群生长。gos也通过影响肠道上皮杯状细胞直接支持肠道屏障功能,gos通过刺... 详细信息

功能性低聚半乳糖(Galacto-Oligosaccharides,gos)是一种益生元,不能被人体利用,不会在小肠被消化,从而能够顺利到达结肠,被结肠中的微生物发酵,刺激结肠内有益菌群生长。gos也通过影响肠道上皮杯状细胞直接支持肠道屏障功能,gos通过刺激杯状细胞产生更多的黏液,并调节降低黏液层渗透性基因表达,增强肠道屏障功能,从而减少结直肠癌症(Colorectal Cancer,CRC)的发生。尽管gos的工业生产主要利用β-半乳糖苷酶,但该酶催化合成的gos都为多种聚合度(Degree of polymerization,DP)的混合物,很难纯化,而聚合度不同的gos益生功能也不同。课题组前期的研究表明,来自Thermotoga naphthophila RUK10的β-葡萄糖苷酶Tn0602,与β-半乳糖苷酶相比,催化转糖苷反应合成的gos只有β-(1,3)糖苷键和β-(1,4)糖苷键,且绝大部分为gos3,只有极少量gos4,更单一的DP与更少种类的糖苷键,可以降低产物纯化与分离的难度和成本。由于水解活性是糖苷酶的主要活性,因此,通过合理设计改造Tn0602以期获得更优异的突变体具有重要研究和应用价值。同时,探索单一DP的gos3对杯状细胞LS174T的影响也有助于其进一步的应用。分析β-葡萄糖苷酶与β-乳糖分子3D对接结果,N222位点位于活性位点E166的周围,可能会影响酶的活性位点与底物乳糖形成的氢键,影响酶与底物的亲和力;N222位点还与N246位点十分接近,也可能形成氢键影响酶蛋白与底物的结合方式。W383与F414位点在底物结合位点的周围,其氨基酸残基的改变可能会与周围残基相互影响,改变酶活性中心口袋的大小,以及酶与底物的亲和力等。本论文选择N222、W383和F414位点中已经验证过的有较好结果的突变体,相互组合进行叠加突变,成功获得了11个叠加突变体,使用Ni-NTA亲和层析对叠加突变表达的目的蛋白进行纯化,进行一系列关于酶水解活力和转糖苷活力的表征,希望能获得水解活力与转糖苷活力提高的突变体。结果表明,与Tn0602相比,叠加突变体W383F-N222A在p H 7.0的PB缓冲液中水解乳糖的活力提升了76%,其余突变体水解乳糖活力都有着不同程度的降低,其中突变体F414Y-N222A和F414Y-N222Q的水解活力约为Tn0602的71%和74%,其余突变体的水解活力则下降比较明显。相较于Tn0602,以乳糖为底物时的水解反应,部分突变体水解最适温度和最适p H会略微偏移,动力学常数表明突变体酶与底物的亲和力降低了。在转糖苷催化合成gos的反应中,F414Y-N222Q与F414Y-N222A比Tn0602表现更优异,gos3产率都有提高,其中,F414Y-N222A合成gos4的效率有所提高,其他叠加突变体的转糖苷活力都低于Tn0602。使用F414Y-N222A大批量合成gos3,纯化后作用于杯状细胞LS174T,与商用多DP的gos对比,初步分析了单一DP的gos3对细胞的影响。q PCR结果分析得出,在gos3浓度为8 mg/m L时,MUC2的表达量提升了2.3倍,TFF3的表达量更是提升至6.5倍,商用gos在浓度为12 mg/m L时,MUC2的表达量提升了1.6-1.7倍,TFF3的表达量被抑制,为对照组的73%。结果表明,gos3对黏液基因的调控效果明显优于商用gos,尤其是对TFF3基因的调控。可见,gos3比其他DP的gos具有更好的促进粘液基因表达的作用,从而提高肠道的屏障功能并降低炎症反应。本研究对Tn0602的双位点叠加突变为β-葡萄糖苷酶的改造提供了新的思路,初步确定gos3是gos主要功能成分,具有重要的研究和应用价值。

关键词： β-葡萄糖苷酶叠加突变 gos3 转糖基黏液基因2

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：