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宿主蛋白gm130在CVB3病毒性胰腺炎中的分子作用机制研究

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宿主蛋白GM130在CVB3病毒性胰腺炎中的分子作用机制研究

作者：徐秋芳南昌大学

学位级别：硕士

目的:研究宿主蛋白gm130(Golgi matrix protein 130)在B3型柯萨奇病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)致BALB/c成年小鼠胰腺炎中的分子作用机制,为CVB3致病机制及抗病毒药物的研究奠定基础。方法:1. 106 PFU CVB3经腹腔注射感染BALB/c成年小鼠... 详细信息

目的:研究宿主蛋白gm130(Golgi matrix protein 130)在B3型柯萨奇病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)致BALB/c成年小鼠胰腺炎中的分子作用机制,为CVB3致病机制及抗病毒药物的研究奠定基础。方法:1. 106 PFU CVB3经腹腔注射感染BALB/c成年小鼠,采用脏器指数测定和组织病理学方法(苏木精-伊红染色),于病毒感染后0天、3天、6天和9天检测胰腺和心肌组织的病理变化;2.收集病毒感染0天、3天、6天和9天的BALB/c小鼠胰腺和心脏组织蛋白,采用Western Blotting检测病毒感染后BALB/c成年小鼠胰腺和心脏中gm130和VP1蛋白的表达变化,以分析CVB3在不同组织中的增殖情况以及其对宿主蛋白gm130的影响;3.以正常BALB/c成年小鼠和新生小鼠为研究对象,运用Western Blotting和组织免疫荧光分析gm130在BALB/c小鼠胰腺和心脏中的分布情况;4.取病毒感染0天、3天、6天和9天的BALB/c成年小鼠胰腺组织,制作石蜡和冰冻切片,运用组织免疫化学和组织免疫荧光检测病毒感染后胰腺组织中gm130的形态变化情况,以分析CVB3对动物细胞高尔基体的影响;5.用MOI=5的CVB3感染Hela细胞后,运用细胞内免疫共沉淀技术和激光共聚焦定位分析检测病毒蛋白VP1、细胞蛋白gm130以及GRASP65(Golgi Reassembly Stacking Protein 65)的相互作用,分析病毒蛋白VP1和宿主蛋白gm130相互作用对细胞高尔基体的影响。结果:1.脏器指数和HE染色结果综合显示:自病毒感染后,胰腺组织中炎症细胞浸润逐渐增多,胰腺腺泡结构被破坏,引起了严重的胰腺炎;而心肌组织中只见有少量的炎症细胞浸润,心肌结构未见明显异常,病损较轻;2. Western Blotting结果显示CVB3感染BALB/c成年小鼠后,病毒在胰腺组织中大量增殖,而宿主蛋白gm130的表达下调;3. Western Blotting和组织免疫荧光结果显示正常BALB/c小鼠中gm130的表达有差异:成年小鼠的胰腺和新生小鼠的心脏中gm130高表达,而成年小鼠的心脏和新生小鼠的胰腺中未检测到gm130;4.动物实验结果显示正常胰腺组织中gm130呈环状,紧密而连续地分布于核周,自病毒感染后,环状结构被破坏,随着感染时间的延长,gm130渐渐弥散、消失;5.免疫共沉淀和激光共聚焦定位分析证实CVB3结构蛋白VP1和细胞蛋白gm130之间有直接相互作用,而且VP1-gm130的相互作用干扰了Hela细胞中gm130与GRASP65的相互作用,进而破坏了高尔基带的结构。结论:1.宿主蛋白gm130是一个组织依赖性和年龄依赖性的CVB3病毒靶蛋白;2. CVB3病毒蛋白VP1和宿主细胞蛋白gm130的直接相互作用导致gm130-GRASP65复合体的破坏,并影响gm130与GRASP65的表达和空间分布,进而引起高尔基带的断裂,最终损伤高尔基体功能。这可能是CVB3引起BALB/c成年小鼠病毒性胰腺炎的机制之一。

关键词： CVB3 高尔基体 gm130 VP1 胰腺炎

顺式高尔基体蛋白gm130影响小鼠卵母细胞纺锤体组装

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生殖医学杂志 2013年第7期22卷 517-522页

作者：张春晖钱卫平孙洪梅孟繁华北京大学深圳医院生殖医学科广东深圳518000

目的确定顺式高尔基体蛋白gm130对小鼠卵母细胞纺锤体组装的影响。方法免疫荧光法检测gm130在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位,并用免疫印迹法半定量检测其表达水平;接着用微管解聚药物诺考达唑处理小鼠MI卵母细胞,明确gm130与微... 详细信息

目的确定顺式高尔基体蛋白gm130对小鼠卵母细胞纺锤体组装的影响。方法免疫荧光法检测gm130在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位,并用免疫印迹法半定量检测其表达水平;接着用微管解聚药物诺考达唑处理小鼠MI卵母细胞,明确gm130与微管动力的关系。免疫印迹检测注射gm130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)后卵母细胞中gm130的表达水平,免疫荧光法检测纺锤体的形态变化及中心体相关蛋白γ-tubulin和Plk1的定位。结果 M130在卵母细胞减数分裂成熟的不同阶段有不同的特异性定位,主要集中分布在生发泡周围、纺锤体的两极和中体及分散于胞浆。gm130在MI和MII期与中心体相关蛋白p-MEK1/2共定位并与纺锤体的组装密切相关。免疫印迹试验表明gm130在卵母细胞发育的各个时期均有表达。降调gm130的表达后,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为拉长的纺锤体;第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高,并影响γ-tubulin和Plk1的正确定位。结论 gm130可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装。

关键词： gm130 小鼠卵母细胞减数分裂纺锤体

gm130通过调控snail表达调节胃癌上皮间质化过程

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内蒙古医学杂志 2018年第4期50卷 393-396,515页

作者：丁玉莲巴彦淖尔市医院药剂科内蒙古临河015000

目的胃癌是最常见的消化道肿瘤之一。尽管手术和放化疗发展迅速,但胃癌的潜在作用机制仍知之甚少,相关的基因及分子治疗值得继续探索。近些年,越来越多的研究显示上皮细胞间质化(EMT)是胃癌侵袭转移的一个重要环节,其作用机制尚不清楚。... 详细信息

目的胃癌是最常见的消化道肿瘤之一。尽管手术和放化疗发展迅速,但胃癌的潜在作用机制仍知之甚少,相关的基因及分子治疗值得继续探索。近些年,越来越多的研究显示上皮细胞间质化(EMT)是胃癌侵袭转移的一个重要环节,其作用机制尚不清楚。gm130是顺式高尔基体的基质蛋白,在细胞周期和蛋白质的运输、分泌过程中扮演着重要的角色。方法免疫组化检测gm130在胃癌组织中的表达情况,在胃癌细胞中采用siRNA技术沉默其表达,观察生物学功能的变化。结果在本研究中,我们发现gm130的表达与胃癌的肿瘤分化和TNM分期有关。gm130的高表达预示着较差的预后。运用RNA干扰技术敲低gm130表达后,我们发现上皮标志物E-cadherin表达增加,间质标记物N-cadherin和vimentin表达减少,肿瘤的发生发展被抑制。减少(N-cadherin和波形蛋白)表达锡安在胃癌细胞,抑制细胞入侵和肿瘤的形成。此外,我们还发现gm130通过上调EMT的关键分子Snail(SNAI1)参与胃癌EMT及侵袭转移的过程。结论本研究显示gm130可能是胃癌治疗中的一个新的靶点。

关键词： gm130 胃癌 EMT 侵袭转移

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gm130在小鼠肺发育过程中的功能研究

GM130在小鼠肺发育过程中的功能研究

第二届全国发育生物学大会

作者：庞潜潜刘春宜鲍时来分子发育生物学国家重点实验室中国科学院遗传与发育生物学研究所

高尔基体是一个高度极性的细胞器,对蛋白质进行加工、分类、包装并运输至指定目的地。gm130是高尔基体顺式面基质蛋白,维持高尔基体的结构和功能,已有广泛的研究。但是,gm130的生理功能现在还不清楚,它通过对高尔基体的影响在个体发育... 详细信息

高尔基体是一个高度极性的细胞器,对蛋白质进行加工、分类、包装并运输至指定目的地。gm130是高尔基体顺式面基质蛋白,维持高尔基体的结构和功能,已有广泛的研究。但是,gm130的生理功能现在还不清楚,它通过对高尔基体的影响在个体发育过程中的作用正是我们迫切需要研究的肺作为与外界直接接触的器官,gm130维持高尔基体的正常功能尤为重要。我们实验室利用cre-loxp系统获得gm130敲除的小鼠模型。gm130敲除之后,小鼠不同细胞的变化不尽相同:肺气管上皮Clara细胞的高尔基体极性发生变化,进而导致细胞极性的变化;Ⅱ型肺泡上皮细胞的高尔基体带状结构减少,泡化明显,SP-A和SP-C的分泌显著降低,肺泡张大。这些变化共同导致了小鼠在gm130敲除之后肺的功能障碍,具体的机制还在进一步研究中。

关键词： gm130 高尔基体极性肺泡张大 SP-A SP-C

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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高尔基体基质蛋白gm130的研究现状

亚太传统医药 2018年第9期14卷 190-193页

作者：汪雪飞邵金辉湖北文理学院医学院形态学部湖北襄阳441053

gm130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装。当gm130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡。gm130参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移,还参与细胞自... 详细信息

gm130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装。当gm130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡。gm130参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移,还参与细胞自噬与凋亡。gm130与肿瘤的发生有关,它的减少显著降低CVB3病毒的复制。gm130失活可以引起雄性模型小鼠的不育。可见,它是一种显著影响动物多种生命活动的重要蛋白。

关键词： gm130 高尔基体有丝分裂肿瘤

Danhong injection A modulator for Golgi structural stability after cerebral ischemiareperfusion injury

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Neural Regeneration Research 2013年第25期8卷 2343-2349页

作者： Yan Wang Zhiping Hu Wei Lu Department of Neurology Second Xiangya HospitalCentral South University

The cerebral ischemia-reperfusion model was established using the suture occlusion method, and rats were intraperitoneally given 8 mL/kg Danhong injection once a day prior to model establishment Rat brain tissues were harvested at 6, 24, 48, 72 hours after reperfusion. Immunohistochemical staining showed that transforming growth factor-J31 expression increased, while Golgi matrix protein gm130 expression decreased after cerebral ischemia-reperfusion. Danhong injection was shown to significantly up-regulate the expression of transforming growth factor-131 and gm130, and expres- sion levels peaked at 7 days after reperfusion. At 7 days after cerebral ischemia-reperfusion, Golgi morphology was damaged in untreated rats, while Golgi morphology breakage was not observed after intervention with Danhong injection. These experimental findings indicate that Danhong injec- tion can up-regulate the expression of transforming growth factor-131 and gm130, and maintain Golgi stability, thus playing a neuroprotective role in rats after cerebral ischemia-reperfusion.

关键词： neural regeneration traditional Chinese medicine Danhong injection cerebral ischemia-reperfu-sion transforming growth factor-131 gm130 Goigi matrix protein brain injury neuroprotection grants-supported paper neuroregeneration

IFT20相关蛋白与肺腺癌患者预后的关联性研究

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IFT20相关蛋白与肺腺癌患者预后的关联性研究

作者：李连凤武汉科技大学

学位级别：硕士

目的:分析IFT20相关蛋白(intraflagellar transport 20,IFT20、cis-golgi protein gm130、Sonic Hedgehog,SHh和receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2,ROR2蛋白)在肺腺癌患者癌组织及癌旁组织中的表达情况及其与患者临床病理特征及预后情况的关系,为早期诊断肺腺癌及评估其预后情况提供新的可能靶点。材料与方法:本研究随机选取了华中科技大学同济医学院附属同济医院2010年3月至2015年9月入院后行肺癌切除术的235例肺腺癌患者并随访至2018年6月。收集患者的基本信息、临床病理特征资料及术中切除的肺癌组织和癌旁组织。采用组织芯片和免疫组化技术检测分析IFT20相关蛋白在癌组织和癌旁组织中的表达情况,采用Image J软件对组织芯片进行IOD/Area和阳性细胞率评分,五名经专业培训的人员在不知患者临床资料的情况下根据染色的深浅对蛋白进行染色强度评分,其中未着色为0分;淡黄色为1分;棕黄色为2分;棕褐色为3分。符合正态分布的连续性变量采用独立样本的t检验或方差分析,不符合正态分布的连续性变量采用独立样本的Wilcoxon或Kruskal-Wallis秩和检验,分类变量采用卡方检验或Fisher确切概率法。Pearson相关或Spearman秩和相关分析IFT20相关蛋白之间的关系;多元Logistics回归分析IFT20相关蛋白的表达与肺腺癌临床病理特征之间的关系;多元Cox比例风险回归模型分析IFT20相关蛋白的表达与肺腺癌患者预后情况之间的关系。采用SPSS 26.0软件进行统计学分析,P3cm、肿瘤发生淋巴结或远处转移,以及肿瘤发展为II～Ⅳ期是影响肺腺癌患者预后的危险因素,其HR及95%CI分别为2.22(1.31,3.76),1.75(1.24,2.45),2.37(1.41,3.98),1.47(1.04,2.08),2.18(1.51,3.16)和2.23(1.45,3.42),而接受化疗/放疗是肺腺癌患者预后的保护因素,其HR及95%CI为0.58(0.43,0.80)。(2)肺腺癌患者癌组织中IFT20和SHh蛋白的表达明显高于癌旁组织;gm130和ROR2蛋白的染色强度评分显著高于癌旁组织(Pgm130、SHh和ROR2蛋白之间的关系在癌组织和癌旁组织中均呈显著正相关(Pgm130和SHh蛋白的表达分别与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤细胞低分化类型和肿瘤大小等临床病理特征之间呈显著负相关,蛋白表达每增加一个单位,会降低肿瘤发展为III～Ⅳ期、发生淋巴结转移、肿瘤细胞转化为低分化类型和肿瘤发展为较大体积(>7cm)的风险,其OR及95%CI分别为0.65(0.44,0.96),0.63(0.40,0.99),0.71(0.53,0.94),0.97(0.94,0.99),0.64(0.41,0.98),0.97(0.95,0.99)和0.58(0.36,0.94)。而ROR2蛋白的表达与肿瘤大小呈显著正相关,阳性细胞率每增加一个百分点,肿瘤发展为较大体积(>7cm)的风险增加8%,其OR及95%CI为1.08(1.01,1.16)。(4)SHh蛋白的表达对肺腺癌患者的预后具有保护作用,其HR及95%CI为0.60(0.46,0.80)。在肿瘤细胞为中高分化类型、肿瘤>7cm和发生远处转移的人群中,gm130和SHh蛋白的表达对于肺腺癌患者的预后具有保护作用(P3cm、肿瘤发生淋巴结转移或远处转移、肿瘤发展为II～Ⅳ期是影响肺腺癌患者预后的危险因素,而接受化疗/放疗是肺腺癌患者预后的保护因素。(2)IFT20、gm130和SHh蛋白的表达与肺腺癌临床病理特征之间呈显著负相关,蛋白表达水平越高,会降低肿瘤细胞向低分化类型转化和向癌症晚期发展的风险,有利于肺腺癌患者的预后。而ROR2蛋白的表达与肿瘤大小呈显著正相关,蛋白表达越高,肿瘤向较大体积发展的风险越高。

关键词：肺腺癌 IFT20 gm130 SHh ROR2 临床病理特征生存情况

外源性精胺抑制高尔基体应激减轻高糖诱导的心肌损伤

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中国应用生理学杂志 2019年第5期35卷 385-389页

作者：范玉琪王跃虹邵毅英邵小婷扈敬徐长庆魏璨哈尔滨医科大学病理生理学教研室

目的:观察糖尿病心肌病(DCM)是否有高尔基体应激(GAS)参与及外源性精胺心肌保护作用是否与调控GAS有关。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control),糖尿病组(T1D,STZ 60 mg/kg一次性腹腔注射)和精胺组(T1D+Sp,精胺5 mg/(kg·d)... 详细信息

目的:观察糖尿病心肌病(DCM)是否有高尔基体应激(GAS)参与及外源性精胺心肌保护作用是否与调控GAS有关。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control),糖尿病组(T1D,STZ 60 mg/kg一次性腹腔注射)和精胺组(T1D+Sp,精胺5 mg/(kg·d)腹腔注射),饲养12周。H9C2系大鼠心肌细胞随机分为正常对照组(Control,10%的FBS-DMEM培养)、高糖组(HG,10%FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖)和精胺组(HG+Sp,10%FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖+5μmol/L精胺)。ELISA检测大鼠血清心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT);Western blot测定高尔基体蛋白GOLPH3,gm130以及Cleaved Caspase3蛋白表达;免疫荧光检测GOLPH3细胞定位。结果:动物模型中,与正常组相比,糖尿病组大鼠血糖,血清心肌酶CK-MB和cTnT显著升高明显升高;体重,射血分数(EF)显著降低;心肌超微结构损伤明显(肌丝断裂,润盘消失等);同时GOLPH3和Cleaved Caspase3表达上调,gm130表达下调。细胞模型与大体结果一致,免疫荧光显示高尔基体出现应激性碎片化。外源性精胺处理可显著干预上述改变。结论:给予外源性精胺对糖尿病,诱导的心肌损伤具有干预作用,其机制与减轻高尔基体应激有关。

关键词：精胺大鼠糖尿病心肌病高尔基体应激 GOLPH3 gm130

丁苯酞对SD大鼠脑出血后血脑屏障的影响及其机制

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中南大学学报（医学版） 2019年第12期44卷 1321-1329页

作者：邱珂邓淑文刘慧游红雷强卢伟中南大学湘雅二医院神经内科长沙410011 中南大学湘雅二医院胸外科长沙410011

目的:探讨SD大鼠脑出血后高尔基体和血脑屏障的变化及丁苯酞的干预作用和机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组及丁苯酞组。造模48 h后测量各组的伊文思蓝含量,采用蛋白质印迹法及real-time PCR检测Cdc42,gm130,ZO-... 详细信息

目的:探讨SD大鼠脑出血后高尔基体和血脑屏障的变化及丁苯酞的干预作用和机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组及丁苯酞组。造模48 h后测量各组的伊文思蓝含量,采用蛋白质印迹法及real-time PCR检测Cdc42,gm130,ZO-1和Occludin蛋白灰度比值及mRNA相对表达量,免疫荧光观察Cdc42和gm130是否存在共定位及脑出血后丁苯酞干预的荧光强度,免疫组织化学观察ZO-1和Occludin在血肿周围内皮细胞上的分布。结果:脑出血组的神经功能评分及伊文思蓝含量明显高于假手术组(Pgm130及Cdc42蛋白灰度比值及mRNA相对表达量较假手术组降低(Pgm130 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学发现脑出血组中Occludin和ZO-1在血肿周围的表达较假手术组降低(Pgm130可能无关。

关键词：脑出血丁苯酞 gm130 Cdc42 血脑屏障紧密连接蛋白