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牦牛glut1、glut3和glut8基因的克隆及其在乳腺上皮细胞中的表达

农业生物技术学报 2017年第1期25卷 21-31页

作者：李月琴潘阳阳田奎丽赵天张译夫樊江峰崔燕余四九甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

乳腺中葡萄糖摄取主要依赖葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,glut),不同glut对葡萄糖摄取所起作用不同。为研究glut1、glut3和glut8参与牦牛(Bos grunniens)泌乳机能调节的分子机制,本研究采用胰酶消化法离体培养牦牛乳腺上皮细胞,... 详细信息

乳腺中葡萄糖摄取主要依赖葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,glut),不同glut对葡萄糖摄取所起作用不同。为研究glut1、glut3和glut8参与牦牛(Bos grunniens)泌乳机能调节的分子机制,本研究采用胰酶消化法离体培养牦牛乳腺上皮细胞,通过免疫细胞化学方法检测角蛋白18、β-酪蛋白和波形蛋白;从纯化的细胞中分别克隆牦牛glut1、glut3和glut8基因,并分析其相关生物学特性;采用q RT-PCR和Western blot分别从基因和蛋白水平分析三者在乳腺上皮细胞表达差异性,间接免疫荧光检测其在乳腺上皮细胞中的分布。结果显示,角蛋白18和β-酪蛋白在分离得到的细胞中表达,波形蛋白不表达,所分离的细胞为乳腺上皮细胞。成功克隆出包含完整编码区的牦牛glut1、glut3和glut8基因序列(Gen Bank登录号分别为:KU902419,KX094556和KX268646),其编码区核苷酸长度分别为1479、1 485和1 437 bp,分别编码492、494和478个氨基酸;三者在进化过程中均有较高的保守性,编码的蛋白具有相似理化性质,均具有12个跨膜螺旋区的疏水性膜蛋白。在乳腺上皮细胞中,glut1的表达量最高,glut8的表达量次之,glut3的表达量最低,且三者之间的表达差异极显著(Pglut1、glut3和glut8蛋白表达,且主要分布在细胞核。研究结果为了解牦牛glut生理学功能提供了重要信息,为进一步研究其调控牦牛泌乳机能的生物学作用提供了新的理论依据。

关键词：牦牛葡萄糖转运蛋白1(glut1) glut3 glut8 乳腺上皮细胞

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NR4As家族在肝脏糖代谢中的调控作用

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时珍国医国药 2012年第8期23卷 2034-2035页

作者：周峰华春李建梅南京晓庄学院.生物化工与环境工程学院江苏南京211171 南京大学生命科学学院江苏南京210093

目的2型糖尿病的临床治疗现状,肝脏糖代谢异常的分子机制以及NR4A家族在肝脏糖代谢中的调控机制。方法文献综述的方法。结果外源cAMP和胰岛素在NR4As和glut8表达中起重要作用;NR4As对glut8表达具有调节作用。结论 NR4A家族在肝脏糖代谢... 详细信息

目的2型糖尿病的临床治疗现状,肝脏糖代谢异常的分子机制以及NR4A家族在肝脏糖代谢中的调控机制。方法文献综述的方法。结果外源cAMP和胰岛素在NR4As和glut8表达中起重要作用;NR4As对glut8表达具有调节作用。结论 NR4A家族在肝脏糖代谢中的分子机制对于研究糖尿病具有重要意义。

关键词：肝脏糖代谢 NR4A glut8

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EGF和胰岛素对牦牛乳腺上皮细胞主要葡萄糖运载体表达的影响

EGF和胰岛素对牦牛乳腺上皮细胞主要葡萄糖运载体表达的影响

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作者：李月琴甘肃农业大学

学位级别：硕士

为了研究葡萄糖转运蛋白1(Glucose transporter1,glut1)、葡萄糖转运蛋白3(glut3)和葡萄糖转运蛋白8(glut8)参与牦牛泌乳机能调节的分子机制,以及EGF(表皮生长因子,Epidermal growth factor)和INS(胰岛素,Insulin)对葡萄糖代谢的调控。... 详细信息

为了研究葡萄糖转运蛋白1(Glucose transporter1,glut1)、葡萄糖转运蛋白3(glut3)和葡萄糖转运蛋白8(glut8)参与牦牛泌乳机能调节的分子机制,以及EGF(表皮生长因子,Epidermal growth factor)和INS(胰岛素,Insulin)对葡萄糖代谢的调控。本研究首先采用改良的联合酶消化组织块法体外培养了牦牛乳腺上皮细胞,从纯化的细胞中分别克隆牦牛glut1、glut3和glut8基因并分析其生物学特性;采用RT-qPCR和Western-blotting分别从基因和蛋白水平分析三者在乳腺上皮细胞表达差异性,间接免疫荧光检测其在乳腺上皮细胞中的分布;用RT-qPCR和Western-blotting方法检测了EGF和INS对glut1基因和蛋白表达的影响。取得了如下成果:(1)体外成功培养了牦牛乳腺上皮细胞,并确定了适合其冷冻保存的方法。(2)首次克隆出了牦牛glut1、glut3和glut8基因(GenBank登录号分别为:KU902419,KX094556和KX268646)。它们分别编码492、494和478个氨基酸,三者在进化过程中均有较高的保守性,编码的蛋白具有相似理化性质,均具有12个跨膜螺旋区的疏水性膜蛋白。(3)glut1、glut3和glut8在乳腺上皮细胞均有表达,glut1的表达量最高,glut8的表达量次之,glut3的表达量最低,且三者之间表达差异极显著(Pglut1的相对表达量最高,且与其它各组之间差异显著(Pglut1的相对表达量降低,且都低于对照组(EGF浓度为0 ng/m L)。表明当外源因子超过一定的浓度范围时,会抑制相关基因及蛋白的表达,同时也说明EGF促进glut1表达的最佳浓度为50 ng/m L。当INS浓度为500ng/m L时,glut1的相对表达量最高,且与其它各组之间差异显著(Pglut1的表达具有促进作用,且具有浓度依赖性。本研究发现EGF和INS均可在体外调控牦牛乳腺上皮细胞中glut1基因和蛋白的表达,提示其在一定程度上能通过调控glut1的表达参与葡萄糖代谢调节,为进一步研究glut1调控牦牛泌乳功能的生物学作用提供了新的理论依据。

关键词：牦牛乳腺上皮细胞 glut1 glut3 glut8 EGF INS

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