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gkn1/2为核心的分子网络在EBV相关胃癌中的作用

GKN1/2为核心的分子网络在EBV相关胃癌中的作用

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作者：林洁琼福建医科大学

学位级别：硕士

目的:Epstein-Barr virus(EBV)感染与胃癌(Gastric Cancer,GC)密切相关,流行病学调查表明EB病毒相关胃癌(Epstein-Barr virus associated gastric carcinoma,EBVa GC)发病率占所有胃癌病例的10%,然而其发病机制不清。先前的研究结果有力提示:EBV可能通过调控gkn1/2为核心的分子网络促进EBVa GC发生发展。本研究拟在前期研究的基础上,应用胃癌病例探讨gkn1/2,TFF1/2基因的表达水平与EBV感染及病理特征的相关性,明确以gkn1/2为核心的分子网络在EBVa GC中的作用,为治疗、控制和预防EBVa GC提供行之有效的方法和切合实际的理论依据。方法:1、收集福建省肿瘤医院2012年1月至2015年4月诊断明确的胃癌根治标本存档蜡块105对,每例胃癌病例均选取癌旁正常胃粘膜组织和胃癌组织两个位点制作成组织芯片(Tissue Microarray,TMA)。利用该组织芯片进行EB病毒原位杂交染色筛选出EBVa GC病例和非EBVa GC病例共105对。2、对105对胃癌病例组织芯片进行免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色,定位检测gkn1、gkn2、TFF1及TFF2四个基因的蛋白表达,分析gkn1、gkn2、TFF1及TFF2在GC组织和癌旁组织中表达的差异性,及其与EB病毒感染的相关性。3、应用实时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)方法检测104对新鲜GC组织和癌旁组织gkn1、gkn2、TFF1及TFF2基因的m RNA表达水平,以105例中的样本099作为标准品。4、采用SPSS17.0统计分析gkn1 m RNA表达与gkn2、TFF1、TFF2表达的相关性。5、采用焦磷酸测序的方法,研究样本中gkn1基因CPG岛的甲基化状态,分析其DNA甲基化程度,并探讨gkn1 DNA甲基化与GC发生发展的相关性。结果:1、EBV感染与临床病理特征的关系应用EB病毒原位杂交染色方法检测出EBVa GC病例,其中EBVa GC病例42例,非EBVa GC病例63例。分析EBV感染与105例胃癌病例临床病理特征之间的关系,结果显示,EBV感染与Lauren’s分型及年龄密切相关(P=0.01,χ2=6.63;P=0.05,χ2=3.84)。2、gkn1基因在胃癌中的表达及临床意义应用RT-q PCR检测结果显示在胃癌组织和相应癌旁组织中gkn1m RNA的相对表达量(RQ=2-△△CT)分别为0.59±1.829和2.37±1.044,二者的差异具有统计学意义(P1);分析结果显示gkn1m RNA表达与胃癌的发生部位、肿物大小、EB病毒感染及DNA甲基化程度密切相关。免疫组化染色显示gkn1蛋白主要定位于癌旁粘膜组织上皮细胞胞浆中,在胃癌组织中,gkn1表达的阳性率为3.80%(4/105),而相对应的癌旁胃粘膜组织中gkn1的阳性率为100%(105/105),二者之间的表达差异具有统计学意义(χ2=192.593,P1)。另外,gkn1在正常胃粘膜、肠化胃粘膜、慢性胃溃疡、胃原位腺癌及浸润性腺癌一系列胃粘膜病变中表达逐渐由阳性转为阴性表达。且gkn1蛋白的表达未显示出与EB病毒感染相关性。3、gkn2在在胃癌中的表达及其临床意义应用RT-q PCR检测结果显示在胃癌组织和相应癌旁组织中gkn2m RNA的相对表达水平分别为0.45±1.607和1.83±0.901,二者的差异具有统计学意义(P1);分析结果显示gkn2m RNA表达与胃癌的发生部位、肿物大小密切相关。免疫组化染色显示gkn2蛋白主要定位于癌旁胃粘膜组织上皮细胞胞浆中,在胃癌组织中gkn2表达的阳性率为12.4%(13/105),而癌旁胃粘膜组织中gkn2的阳性率高达100%(105/105),二者之间的表达差异具有统计学意义(χ2=161.78,P1),而gkn2蛋白的表达与EB病毒感染未见有明显相关性。4、TFF1在在胃癌中的表达及其临床意义应用RT-q PCR检测结果显示在胃癌组织和相应癌旁组织中TFF1m RNA的相对表达水平分别为0.72±1.433和1.47±1.314,二者的差异具有统计学意义(P1),分析结果显示TFF1m RNA表达与胃癌的肿物大小及EB病毒感染密切相关。免疫组化染色显示TFF1蛋白主要定位于癌旁胃粘膜组织上皮细胞胞浆中,在胃癌组织中,TFF1表达的阳性率为20%(21/105),而所对应的癌旁胃粘膜组织中TFF1表达的阳性率高达90.5%(95/105),二者的差异具有统计学意义(χ2=106.73,P1),同时,分析结果显示,TFF1的表达与EB病

关键词： gkn1/2 EB病毒相关胃癌分子网络基因表达

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