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作者：郭丙涛华中科技大学

学位级别：硕士

目的探讨钙离子对ghs大鼠肾小管上皮细胞cbfal和osterix转录因子表达的影响及其是否存在类似血管异位钙化的相关调控机制。方法原代培养ghs大鼠肾小管上皮细胞,待其生长成片时转入培养板中,加入不同浓度的钙溶液共同孵育12、24和48小... 详细信息

目的探讨钙离子对ghs大鼠肾小管上皮细胞cbfal和osterix转录因子表达的影响及其是否存在类似血管异位钙化的相关调控机制。方法原代培养ghs大鼠肾小管上皮细胞,待其生长成片时转入培养板中,加入不同浓度的钙溶液共同孵育12、24和48小时。实验共分五组：阴性对照组(+PBS);钙I组(+0.5mmol/L Ca2+);钙II组(+1.0mmol/L Ca2+);钙III组(+1.5mmol/L Ca2+);钙IV组(+2.0mmol/L Ca2+)。各组均采用RT-PCR检测cbfal和osterix mRNA的表达,western blotting法测定其蛋白质表达。结果RT-PCR:钙离子处理ghs大鼠肾小管上皮细胞24h,钙I-IV组cbfal基因mRNA相对表达量分别是阴性对照组的1.25倍、1.58倍、1.92倍和1.82倍。钙II-IV组vs对照组(p0.05)。结论钙离子可刺激ghs大鼠肾小管上皮细胞cbfα1和osterix表达增高，提示其可能是启动并调控BMP2-Cbfα1-Osterix信号通路的刺激因素。ghs大鼠间质的异位钙化可能与血管异位钙化机制相似。

关键词： cbfα1 osterix CaSR 特发性高钙尿症 ghs大鼠

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沉默钙敏感受体对大鼠尿钙排泄影响及对紧密连接蛋白14的作用

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实用医学杂志 2020年第14期36卷 1882-1885,1891页

作者：崔庆鹏刘孝东范世成朱元全罗云罗钰辉云南省第三人民医院泌尿外科昆明650000 昆明医科大学第一附属医院泌尿外科昆明650032

目的了解沉默大鼠钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)基因后,肾脏组织紧密连接蛋白14(the tight junction protein claudin 14,CLDN14)的表达情况及24 h尿钙排泄量变化情况。方法 (1)建立遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠模型;(2)CaSR-miRNA干扰病毒分别干扰ghs组大鼠和正常尿钙对照组大鼠(NC)作为实验组,生理盐水干预作为对照组。(3)处死大鼠取双肾并测24 h尿钙;(4)RT-PCR和Western Blot技术检测大鼠肾上皮细胞CLDN14的mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)CaSR-miRNA干扰病毒后,与对照组大鼠相比,ghs大鼠组尿钙排泄量减少,差异有统计学意义(P 大鼠尿钙排泄量变化不明显,差异无统计学意义(P> 0.05)。(2)ghs组大鼠CLDN14 mRNA和蛋白表达量减少,差异有统计学意义(P 大鼠CLDN14 mRNA和蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)干扰病毒体内干扰ghs大鼠后尿钙排泄量下降,NC组大鼠无此现象。(2)CaSR可能通过调控CLDN14的表达来调节肾脏对Ca2+的重吸收。

关键词：钙敏感受体泌尿系结石特发性高钙尿症 ghs大鼠体内RNA干扰紧密连接

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大鼠肾脏钙敏感受体基因调控肾脏组织钙转运相关蛋白的表达及对尿钙排泄影响的研究

大鼠肾脏钙敏感受体基因调控肾脏组织钙转运相关蛋白的表达及对尿...

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作者：崔庆鹏昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]了解RNA体内干扰遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠肾脏钙敏感受体(CaSR)后,肾脏组织钙转运相关蛋白的表达及尿钙排泄的变化及其可能机制。[方法]1、通过反复选取尿钙排泄量最高的雄雌大鼠,相互交配繁殖下一代,6代后建立起遗传高钙尿... 详细信息

[目的]了解RNA体内干扰遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠肾脏钙敏感受体(CaSR)后,肾脏组织钙转运相关蛋白的表达及尿钙排泄的变化及其可能机制。[方法]1、通过反复选取尿钙排泄量最高的雄雌大鼠,相互交配繁殖下一代,6代后建立起遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠模型;2.20只雄性ghs大鼠和20只雄性正常尿钙对照组大鼠(Normal control rats,NC)大鼠随机分为5组,每组4只,第1-4组采用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰试验,第5组接受生理盐水干预作为对照组。采用外科手术方法将病毒载体从肾静脉导入肾脏内;2.3第1-4组大鼠分别于注射病毒后3天、7天、14天、21天处死,第5组大鼠于注射后21天处死,取出双肾;分别于上述5个时间点处死大鼠前应用全自动生化分析仪测定各组大鼠的2个24h尿钙(对照组每个时间点均测尿钙),计算24小时尿钙排泄量;3、应用大鼠的双肾标本,通过RT-PCR和Western-Blot技术检测大鼠肾上皮细胞钙转运相关蛋白(CLDN14、TRPV5、NHE3、AQP2、NKCC2)mRNA和蛋白表达水平。[结果]:1、成功构建了遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠模型。2、与对照组大鼠相比,ghs组大鼠用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后3-21天,24小时尿钙排泄量减少,差异具有统计学意义(P大鼠24小时尿钙排泄量较前稍有减少,但较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。3、用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,RT-PCR检测 CLDN14、TRPV5、NHE3、AQP2、NKCC2 的 mRNA 量。ghs 组大鼠:与对照组相比,CLDN14、NHE3的mRNA表达量在3-21天减少,差异均具有统计学意义(P大鼠:与对照组相比,上述5个基因的mRNA量均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。4、用CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,Western-Blot检测CLDN14、TRPV5、NHE3、AQP2、NKCC2蛋白的表达水平。ghs组大鼠:与对照组相比,CLDN14蛋白的表达水平在3-21天下调,NHE3蛋白的表达水平在3-14天下调,差异均有统计学意义(P大鼠:与对照组相比,上述5种蛋白的表达水平均无明显变化,差异不具有统计学意义(P>0.5)。[结论]1、通过反复选取尿钙排泄量最高的雄雌大鼠,相互交配繁殖下一代,6代后可以建立起遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠模型。2、通过CaSR-miRNA干扰病毒体内干扰遗传高钙尿结石形成(ghs)大鼠,干扰后24小时尿钙排泄量下降,正常大鼠尿钙对照组(NC)大鼠则未观察到此现象。3、通过CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,ghs组大鼠肾脏组织中CLDN14、NHE3基因mRNA表达量下降,TRPV5、AQP2、NKCC2的mRNA上升,NC组大鼠肾脏组织中上述各基因的表达水平无明显变化。4、通过CaSR-miRNA干扰病毒进行体内干扰后,ghs组大鼠肾脏组织中CLDN14、NHE3蛋白的表达水平下调,TRPV5、AQP2、NKCC2蛋白的表达水平上调,NC组大鼠肾脏组织中上述各蛋白的表达水平无明显变化。

关键词：钙敏感受体特发性高钙尿症体内RNA干扰 ghs大鼠钙转运相关蛋白

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