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ghrp-scu-PA-32K突变体的构建、表达及纯化产物的部分性质研究

北京大学学报（自然科学版） 2000年第2期36卷 203-208页

作者：焦建伟徐长法北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871

在ｓｃｕＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变，在Ｎ端紧接Ｌｅｕ１之前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ），构建了ＧＨＲＰｓｃｕＰＡ３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载... 详细信息

在ｓｃｕＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变，在Ｎ端紧接Ｌｅｕ１之前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ），构建了ＧＨＲＰｓｃｕＰＡ３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭβｎｅｏ中，与ｐＣＭβｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞。筛选到的稳定表达株在无血清培养基的表达量为５８０ＩＵ／（１０６细胞·２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物，ＳＤＳＰＡＧＥ显示为单一蛋白条带，分子量为３３ｋＤ，质谱法测定分子量也为３３ｋＤ。经血纤维蛋白平板法测定比活为１５００００ＩＵ／ｍｇ蛋白。对血纤维蛋白的亲和性，突变体为ｓｃｕＰＡ３２Ｋ的４－５倍。

关键词： ghrp四肽定点突变溶栓药物 scu-PA-32K 突变体

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