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世界华人消化杂志 2007年第12期15卷 1417-1420页

作者：徐世平吴本俨王孟薇高利利伍银桥蒋立新王卫华尤纬缔解放军总医院南楼消化科北京市100853 北京本元正阳基因技术有限公司北京市100176

目的:构建一个表达胃癌相关基因gcrg213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制gcrg213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因gcrg213特异性小干扰RNA片段gcrg213-RNAi-2的IMG800-gcrg213i-2质粒用Bam... 详细信息

目的:构建一个表达胃癌相关基因gcrg213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制gcrg213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因gcrg213特异性小干扰RNA片段gcrg213-RNAi-2的IMG800-gcrg213i-2质粒用Bam H I+Bg/Ⅱ双酶切,回收410 bp左右目的片段,将pSNAV2.0质粒用BamH I单酶切后同目的片段连接,经酶切和测序鉴定后,用新建质粒脂质体转染BHK-21细胞,G418筛选后大规模培养,再用辅助病毒HSV1-rc/△UL2感染,获取病毒.结果:成功构建包含U6启动子和胃癌相关基因gcrg213特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为5×10^(12)vector genome/L高滴度腺相关病毒.结论:载体的构建为进一步研究gcrg213的体内功能打下了基础,也将为更多的基因干预和基因的功能研究提供有效的工具.

关键词：胃癌 gcrg213基因腺相关病毒 siRNA 基因转染

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胃癌相关基因gcrg213的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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军医进修学院学报 2004年第4期25卷 258-260页

作者：伍银桥王刚石王孟薇吴本俨尤纬缔王卫华解放军总医院南楼消化科北京100853

目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因gcrg2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的gcrg2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合... 详细信息

目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因gcrg2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的gcrg2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。结果 :高效表达出相对分子量约2 9.4ku的重组融合蛋白。薄层凝胶扫描显示 ,其表达量占菌体总蛋白质的 2 8.7%。结论 :在大肠杆菌中成功表达了Thioredoxin gcrg2 13融合蛋白 ,为后续功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。

关键词：胃癌 gcrg213基因基因克隆大肠杆菌基因表达

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A gene encoding an apurinic/apyrimidinic endonuclease-like protein is up-regulated in human gastric cancer

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World Journal of Gastroenterology 2003年第6期9卷 1196-1201页

作者： Gang-ShiWang Meng-WeiWang Ben-YanWu Xiao-BingLiu Wei-You Xin-YanYang DepartmentofGerontalGastroenterology GeneralHospitalofChinesePLABeijing100853China DepartmentofPathology GeneralHospitalofChinesePLABeijing100853China

AIM: To identify the gene that may predispose to human gastric cancer and to analyze its expression in gastric cancer and non-tumorous gastric ***: Cancer, para-tumor, and non-tumor gastric tissues were studied for gene expression profile using fluorescent differential display reverse transcription polymerase chain reaction (DDRT-PCR). The differentially expressed bands of interest were analyzed by cloning,Northern blotting, and sequencing. The sequencing results were compared with the GenBank database for homologyand conserved domain analysis. In situ hybridization with DIG-labeled cRNA probes was used to detect the expression of gene in paraffin embedded gastric adenocarcinoma and non-cancerous ***: A gene expressed higher in tumor and para-tumor tissues than in their non-tumor counterparts of all 7 tested gastric adenocarcinoma patients was identified by means of DDRT-PCR analysis, it was named gcrg213(gastric cancer related gene 213). Northern blot confirmed the differential expression. gcrg213(GenBank No. AY053451) consisted of 1094 base pairs with an open reading frame (ORF) which encoded 142 amino acids. The deduced amino acid sequence contained a putative conserved domain, apurinic/apyrimidinic endonuclease (APE). In situ hybridization analysis showed that C-CRG213was expressed higher in gastric cancer tissues than in their corresponding non-tumor ones. Precancerous leisions of gastric adenocarcinoma showed a high gcrg213 expression, too. No difference of the expression pattems was found between the early and advanced gastric ***: A gene named gcrg213 was identified in human gastric adenocarcinoma. It encoded an APE-like protein which was probably a new member of the APE ***213 was over-expressed not only in gastric cancer,but also in its precancerous leisions. The role of gcrg213 expression in carcinogenesis needs further study.

关键词：胃癌 gcrg213基因基因表达磷酸内切酶肿瘤发生学

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