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肝癌HepG2细胞gcf基因低表达细胞系的建立及其辐射效应的研究

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肝癌HepG2细胞GCF基因低表达细胞系的建立及其辐射效应的研究

作者：常小云河北医科大学

学位级别：硕士

目的：原发性肝癌(Primary hepatic carcinoma，PHC)是世界上常见的恶性肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中居世界第五位，死亡率居第三位，且我国是肝癌的高发地区之一，肝癌严重威胁着我国人民的健康及生命。肝癌的治疗，主要有手术、化学... 详细信息

目的：原发性肝癌(Primary hepatic carcinoma，PHC)是世界上常见的恶性肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中居世界第五位，死亡率居第三位，且我国是肝癌的高发地区之一，肝癌严重威胁着我国人民的健康及生命。肝癌的治疗，主要有手术、化学治疗、射频消融治疗、介入治疗、放疗等。肝切除和肝移植是肝癌最有效的治疗方法。与其他恶性肿瘤相比，肝癌术后复发率较高，且肝移植不能普及，肝癌的手术治疗受到限制。近年来随着三维适型放疗技术的发展，放射治疗已经成为治疗肝癌的重要手段。放疗联合化疗及中医中药治疗疗效更好，它仅次于手术切除，特别是在无法切除的肝癌治疗中发挥着越来越重要的作用。由于放疗对于肿瘤周围的正常组织存在损伤，因此，我们试图通过增加肝癌细胞对放射治疗的敏感性来提高放疗疗效、减少放疗的副作用，改善肝癌患者的预后。一些研究证实辐射可引起多种肿瘤细胞IER5基因表达增加，IER5基因在辐射诱导细胞凋亡中发挥一定作用。转录因子是一群能与基因5′端上游特定序列专一性结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的一类蛋白质分子。gcf(GC binding factor)就是一个转录因子，由一个长度为3kb的mRNA编码，广泛存在于人体组织细胞中，在基因表达调控中发挥着重要作用。gcf通过与一些编码表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)的基因的启动子相结合[1]，在体内及体外抑制EGF及EGFR启动子，从而抑制EGF及EGFR基因的转录。本课题组的前期研究显示：在辐射诱导IER5基因表达增高的启动子区域内可能存在与辐射有关的调控元件(TGGCGC、GGCCGT、GCGCACA、CGCGG)，以及其各自可能的转录因子(gcf、NFI、TTRnvertedepeat/gcf、gcf)[2]。核糖核酸干扰(RNA Interference，RNAi)是指由与靶基因同源的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)介导的细胞内mRNA的特异性降解，以致于下调或抑制靶基因的表达，从而产生相应功能表型的缺失。RNA干扰技术，是功能基因分析的重要方法，其中最主要的方法是应用化学合成的小分子RNA(Small interfering RNA，siRNA)进行干扰。细胞从第一次分裂结束开始到第二次分裂结束为止所经历的全过程，称为细胞周期，其包括细胞间期和分裂期。其中细胞间期又分为DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)及DNA合成后期(G2期);细胞分裂期(M期)，又分为前期、中期、后期及末期。细胞周期按G1期→S期→G2期→M期的顺序进行，其中有两个关键的“检定点”： G1/S及G2/M。细胞周期阻滞(cell cycle arrest)是指细胞周期未能通过检定点，进入细胞周期的下一阶段。鉴于目前国内外尚未见有关gcf与IER5关系、IER5转录因子、辐射与gcf的关系的相关研究报道。本课题选择离体培养肝癌HepG2细胞为研究对象，采用RNA干扰技术，转染HepG2细胞，建立gcf基因低表达细胞模型，研究抑制gcf基因表达对HepG2细胞增殖、细胞周期及辐射效应的影响，以及抑制gcf基因表达对HepG2细胞IER5蛋白表达的影响。方法：①采用脂质体2000稳定转染shRNA技术，抑制HepG2细胞gcf基因表达，构建gcf基因低表达HepG2细胞系(gcf-shRNA-HepG2细胞系)，采用RT-PCR及免疫印迹法检测gcf基因低表达HepG2细胞系的抑制效率。②分别应用0Gy、2Gy和4GyCo γ射线照射gcf-shRNA-HepG2细胞和对照组细胞(转染与目的基因序列无同源性的HepG2细胞，NC-shRNA-HepG2细胞)，采用细胞计数方法了解细胞生长情况;分别应用0Gy、2GyCo γ射线照射gcf-shRNA-HepG2细胞和NC-shRNA-HepG2细胞，采用流式细胞术检测细胞周期。③分别应用0Gy、2Gy和4GyCo γ射线照射gcf-shRNA-HepG2细胞和NC-shRNA-HepG2细胞，采用免疫印迹法检测IER5蛋白表达水平。结果：1本研究成功构建了gcf基因低表达HepG2细胞系，命名为gcf-shRNA-HepG2细胞系。 2抑制gcf基因表达，HepG2细胞生长增快，辐射抑制HepG2细胞生长的作用减弱。 ①未照射情况下(0Gy)，与NC-shRNA-HepG2细胞相比，gcf-shRNA-HepG2细胞生长增快(P＜0.05)，说明抑制gcf基因表达，能促进HepG2细胞生长，gcf基因有抑制HepG2细胞生长的作用。②2Gy、4GyCo γ射线照射后，NC-shRNA-HepG2及gcf-shRNA-HepG2生长均减慢(P＜0.05)，但是同一辐射剂量下，

关键词： gcf IER5 凋亡放射肝癌

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gcf和一致性测试

国外电子测量技术 2005年第5期24卷 43-46页

作者：蒋大勃安立公司

通过一致性测试,可以检查3GWCDMA手机是否按照3GPP的标准来研发,从而保证了手机在商用之前的协议,射频等性能。由运营商和手机供应商发起成立的机构gcf组织在一致性测试中发挥着重要的作用。安立公司的协议和射频一致性测试系统为业界... 详细信息

通过一致性测试,可以检查3GWCDMA手机是否按照3GPP的标准来研发,从而保证了手机在商用之前的协议,射频等性能。由运营商和手机供应商发起成立的机构gcf组织在一致性测试中发挥着重要的作用。安立公司的协议和射频一致性测试系统为业界提供了领先的解决方案。

关键词： gcf WCDMA手机一致性测试系统 3GPP 解决方案安立公司供应商运营商协议射频商用

gcf低表达宫颈癌HeLa细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的初步探究

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医学研究杂志 2015年第4期44卷 37-41页

作者：史海敏丁库克周平坤陈丹郭冬梅赵春丽张新辽宁省肿瘤医院妇一科沈阳110042 中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全研究所北京100883 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所放射毒理与辐射危害评价研究室北京100850

目的构建gcf低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的gcf低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到gcf-shRNA-H... 详细信息

目的构建gcf低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的gcf低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到gcf-shRNA-He La单克隆细胞系。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法探究不同剂量照射后的细胞增殖情况,在不同照射剂量下用蛋白印迹法检测gcf-shRNA-He La及对照细胞中IER5蛋白的表达情况。结果成功构建稳定表达的gcf-shRNA-He La单克隆细胞系,显微镜下观察gcf-shRNA-He La细胞比正常He La细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多。蛋白印迹法及实时定量PCR验证了gcf-shRNA-He La的蛋白表达及mRNA转录水平均低于对照组(Pgcf-shRNA-He La细胞比control对照细胞增殖缓慢(P=0.014)。不同剂量照射情况下蛋白印迹法检测He La细胞、control-shRNA-He La与gcf-shRNA-He La细胞IER5蛋白表达情况,结果同一辐照剂量下gcf沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高,4Gy照射的gcf-shRNA-HeLa的IER5表达量最高(Pgcf的He La细胞系,初步探讨gcf作为IER5基因抑制性转录因子的作用。结合临床基因靶向治疗,可寻求可以降低gcf表达的方式,通过上调IER5表达这一双效途径来加速宫颈癌细胞凋亡。

关键词： gcf IER5 HeLa细胞细胞增殖

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从gcf看法国集团酒的营销策略

中外葡萄与葡萄酒 2014年第1期 65-67页

作者：张俊庆

成立于1979年的法国大酒窖公司（以下简称gcf）至今仍是法国第一大葡萄酒出口商，与历史稍长自己一些的同乡卡斯特（CASTEL）相比，不管是叫好的品牌知名度，还是叫座的市场占有率，目前为止gcf在中国市场似乎都乏善可陈。然而在本文开... 详细信息

成立于1979年的法国大酒窖公司（以下简称gcf）至今仍是法国第一大葡萄酒出口商，与历史稍长自己一些的同乡卡斯特（CASTEL）相比，不管是叫好的品牌知名度，还是叫座的市场占有率，目前为止gcf在中国市场似乎都乏善可陈。然而在本文开始前，我们有必要先还原一个真实完整的法国gcf，让我们来认识一下这个“法国坏孩子”通过怎样的“恶作剧”重新定义了葡萄酒市场。

关键词：葡萄酒市场 gcf 法国营销策略品牌知名度市场占有率中国市场酒窖

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携手gcf，卡斯特中国团队浮出水面

新食品 2009年第12期 62-63页

作者：肖竞《新食品》记者

法国gcf与上海卡斯特的合作，似乎意味着中国市场又—个巨型进口葡萄酒航母即将启航，这艘航母上有着品牌运营平台上海卡斯特，有出口排名法国第一、生产位于法国第二的战略合作伙伴gcf集团，更有实力派的渠道运营商和分销商。

关键词：中国市场 gcf 战略合作伙伴水面进口葡萄酒品牌运营法国分销商

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手机gcf一致性测试

国外电子测量技术 2008年第12期27卷 51-54页

作者：狄德海夏新移动通讯有限公司厦门361022 厦门大学管理学院厦门361005

gcf(global certification forum)一致性测试十分必要。gcf一致性测试包括射频、音频、协议、SIM、杂散五大类测试项。本文全面综述这五类测试的具体内容以及测试过程中所使用的测试系统,并介绍国际和国内从事gcf一致性测试的认证实验室... 详细信息

gcf(global certification forum)一致性测试十分必要。gcf一致性测试包括射频、音频、协议、SIM、杂散五大类测试项。本文全面综述这五类测试的具体内容以及测试过程中所使用的测试系统,并介绍国际和国内从事gcf一致性测试的认证实验室,便于手机研发人员对gcf一致性测试有个全面的了解,清楚知道如何准备gcf一致性测试,以及在测试过程中如何进行调试。

关键词： gcf 手机测试一致性测试

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gcf对WCDMA终端认证介绍

移动通信 2005年第6期29卷 66-69页

作者：倪胜上海宇梦通信科技有限公司

1一致性测试及gcf的引入一致性测试为无线通讯的成功做出了极大贡献--拥有无线网络设计和规划的工程师都清楚,不符合标准的手机将给网络带来很多问题,有些甚至是灾难性后果,如手机的非规范响应有可能使基站软件运行死机,从而使整个系统... 详细信息

1一致性测试及gcf的引入一致性测试为无线通讯的成功做出了极大贡献--拥有无线网络设计和规划的工程师都清楚,不符合标准的手机将给网络带来很多问题,有些甚至是灾难性后果,如手机的非规范响应有可能使基站软件运行死机,从而使整个系统瘫痪.这种情况尤其是在建网初期尤其突出.而引入一致性测试能有效的保证网络和终端的兼容性.

关键词： WCDMA 终端 gcf 一致性测试认证灾难性后果网络设计无线通讯软件运行系统瘫痪工程师兼容性手机基站

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石福利：恒亿盛世牵手gcf打造新品牌

新食品 2016年第12期 100-101页

作者：陈小蓉

记者在本届成都糖酒会上获悉，北京恒亿盛世已与法国大酒窖（简称gcf）牵手合作，在中国市场共同推出路易兄弟和路易之花两大葡萄酒品牌，意欲在中国重新打造新的进口葡萄酒品牌。gcf是欧洲及法国最大的葡萄酒和烈酒的生产商和贸易商，... 详细信息

记者在本届成都糖酒会上获悉，北京恒亿盛世已与法国大酒窖（简称gcf）牵手合作，在中国市场共同推出路易兄弟和路易之花两大葡萄酒品牌，意欲在中国重新打造新的进口葡萄酒品牌。gcf是欧洲及法国最大的葡萄酒和烈酒的生产商和贸易商，旗下拥有二十多个酒庄，产品销往全球163个国家和地区，是目前中国市场最大的法国酒出口商。

关键词： gcf 品牌进口葡萄酒福利中国市场糖酒会贸易商生产商