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LncRNA H19/miR-203a/PTEN轴在小鼠gc-1细胞缺血再灌注损伤中的作用及影响机制

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中华男科学杂志 2020年第6期26卷 499-504页

作者：卓栋宁金卓张经纬陈杨程立巴正皖南医学院弋矶山医院泌尿外科安徽芜湖241000 武汉大学人民医院泌尿外科湖北武汉430061

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19在小鼠体外gc-1细胞的表达,以及其通过调控微小RNA(miRNA)-203a/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)轴对gc-1细胞凋亡和增殖的影响。方法:建立gc-1细胞体外缺氧复氧模型,qRT-PCR检测gc-1细胞不同复氧损... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19在小鼠体外gc-1细胞的表达,以及其通过调控微小RNA(miRNA)-203a/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)轴对gc-1细胞凋亡和增殖的影响。方法:建立gc-1细胞体外缺氧复氧模型,qRT-PCR检测gc-1细胞不同复氧损伤时间点lncRNA H19的表达变化;MTT法、流式细胞术测定沉默lncRNA H19对gc-1细胞增殖和凋亡的影响;Western印迹检测沉默lncRNA H19对gc-1细胞凋亡相关蛋白Bax和caspase-3表达的影响;qRT-PCR和Western印迹分别测定沉默lncRNA H19后gc-1细胞miR-203a和PTEN的表达变化。结果:随着复氧损伤时间的增加,gc-1细胞lncRNA H19表达明显增加,在缺氧3 h/复氧12 h达到峰值,与此同时miR-203a表达明显降低。此外,沉默lncRNA H19增强了gc-1细胞的增殖能力并降低了其凋亡水平,增加了miR-203a表达水平并降低了PTEN表达水平,结果显著。结论:LncRNA H19在体外gc-1细胞中高表达,其可能通过调控miR-203a/PTEN信号途径改变gc-1细胞增殖及凋亡的能力。

关键词：睾丸缺血再灌注损伤 gc-1细胞 lncRNA H19 miR-203a PTEN

棕榈酸诱导小鼠精原细胞株gc-1细胞凋亡的作用机制

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中国药理学通报 2023年第11期39卷 2109-2114页

作者：邓何赵海霞周本文常言语陈思敏杨焱娜付国庆张长城三峡大学国家中医药管理局中药药理科研三级实验室湖北宜昌443002 三峡大学基础医学院湖北宜昌443002 三峡大学健康医学院湖北宜昌443002

目的从内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)角度探讨棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导小鼠精原细胞株gc-1细胞凋亡的机制。方法将gc-1细胞分为正常组(Control)、溶剂对照组(Vehicle)和不同浓度PA处理组(100、150、200、250μmol·L^(-1))。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Caspaes-3活性检测试剂盒检测凋亡蛋白caspase-3的活性;Western blot检测凋亡相关蛋白和ERS相关蛋白表达水平。结果PA处理gc-1细胞48 h后,细胞增殖活力显著下降,细胞凋亡率上升,凋亡蛋白caspase-3活性增高,结果均具有浓度依赖性;PA可明显增加gc-1细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3的表达水平,明显降低抑凋亡蛋白BCL2的表达水平,同时上调ERS相关蛋白GRP78、CHOP、p-IRE1、XBP1的表达水平,但对p-PERK、PERK、p-eIF2α、eIF2α、ATF4以及ATF6的表达无显著影响。结论PA诱导小鼠gc-1细胞凋亡可能与激活IRE1通路有关。

关键词：棕榈酸 gc-1细胞内质网应激凋亡内质网未折叠蛋白质反应

ANKRD49通过上调Bcl-xL的表达抑制UV诱导gc-1细胞的凋亡

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中国生物工程杂志 2017年第4期37卷 40-47页

作者：白欣艳温丽敏王玉晶王海龙解军郭睿山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001 山西医科大学寄生虫学教研室太原030001

目的:利用稳定过表达Ankyrin repeat domain 49(ANKRD49)的gc-1(小鼠精原细胞)细胞模型,探讨ANKRD49过表达对gc-1细胞凋亡的影响。方法:40J/m^2紫外线(UV)刺激gc-1细胞2 min诱导凋亡,分别利用流式细胞术、Hoechst33258染色和免疫印迹技... 详细信息

目的:利用稳定过表达Ankyrin repeat domain 49(ANKRD49)的gc-1(小鼠精原细胞)细胞模型,探讨ANKRD49过表达对gc-1细胞凋亡的影响。方法:40J/m^2紫外线(UV)刺激gc-1细胞2 min诱导凋亡,分别利用流式细胞术、Hoechst33258染色和免疫印迹技术检测过表达ANKRD49对gc-1细胞线粒体膜电位、核浓缩情况和凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Cleaved-Caspase-3、Bcl-xL和Bax的表达变化,以反映ANKRD49对gc-1细胞凋亡的影响。结果:流式细胞术检测结果表明稳定过表达ANKRD49的gc-1细胞线粒体膜电位下降率和细胞凋亡率均明显低于空载体组和裸细胞组(P细胞的凋亡百分比明显低于其它组(Pgc-1细胞凋亡,其作用可能是直接或间接通过促进Bcl-xL的表达而实现的。

关键词： ANKRD49 gc-1细胞细胞凋亡 Bcl-xL

养精胶囊对gc-1细胞增殖、凋亡及caspase-3表达的影响

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北京中医药大学学报 2014年第7期37卷 500-504,I0004页

作者：王志强金保方崔毓桂张新东孙大林南京中医药大学男科学研究所江苏210023 南京医科大学第一附属医院生殖医学中心

目的探讨养精胶囊改善生精功能进而治疗男性不育症可能的作用机制。方法在gc-1细胞中加入养精胶囊提取液,分为空白组和低、中、高剂量组,在作用24、48、72 h后采用MTT法检测各组的吸光值;作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋... 详细信息

目的探讨养精胶囊改善生精功能进而治疗男性不育症可能的作用机制。方法在gc-1细胞中加入养精胶囊提取液,分为空白组和低、中、高剂量组,在作用24、48、72 h后采用MTT法检测各组的吸光值;作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测凋亡相关基因caspase-3的表达。结果在作用24、48、72 h后,养精胶囊提取液低、中、高剂量组细胞增殖明显加快,其吸光度与同期空白组相比有统计学意义(Pgc-1细胞48 h后,S期细胞比例逐渐增加,与空白组相比有统计学意义(P细胞凋亡率明显降低,与空白组相比有统计学意义(Pgc-1细胞增殖、抑制细胞的凋亡,降低caspase-3的表达水平的作用,且呈剂量依赖性。

关键词：养精胶囊 gc-1细胞增殖凋亡 caspase-3 小鼠

GPR30介导双酚A促进小鼠gc-1细胞增殖

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中国男科学杂志 2012年第4期26卷 3-8页

作者：陈远彬黄卫人秦达念汕头大学医学院汕头515000 北京大学深圳医院男性生殖与遗传广东省重点实验室

目的研究环境雌激素双酚A（bisphenol A，BPA）通过G蛋白偶联受体30（Gprotein-coupled receptor 30，GPR30）对小鼠精原细胞系gc-1细胞的影响及发生机制。方法（1）对gc-1细胞分组（分为对照组，BPA＋ICI，BPA＋ICI＋GPR30 siRNA，BPA... 详细信息

目的研究环境雌激素双酚A（bisphenol A，BPA）通过G蛋白偶联受体30（Gprotein-coupled receptor 30，GPR30）对小鼠精原细胞系gc-1细胞的影响及发生机制。方法（1）对gc-1细胞分组（分为对照组，BPA＋ICI，BPA＋ICI＋GPR30 siRNA，BPA＋ICI＋AG1478，BPA＋ICI＋PD98059，G-1六个组）进行处理，培养0h，24h，48h，72h，96h后采用MTT比色法检测细胞活力。（2）分别用Gpr30 siRNA沉默Gpr30基因，AG1478阻断EGFR（epidermal growth factor receptor），PD98059阻断ERK（extracellular signal-regulated kinases），然后BPA处理gc-1细胞，5min后Western blot检测ERK-1／-2磷酸化水平和Real-time PCR检测转录因子c-Fos变化程度，48h后检测周期蛋白基因Cyclin D1表达情况。结果与对照组相比，BPA处理组促进gc-1细胞增殖，c-Fos和Cyclin D1基因表达上升（P〈0．05）。细胞在上述三个水平阻断处理后，BPA不引起相应表达差异。结论在小鼠gc-1细胞，BPA诱导GPR30转活EGFR，通过激活MAPK／ERK—c—Fos信号调节，上调周期蛋白基因Cyclin D1表达，促进细胞增殖。

关键词：双酚A 受体 G-蛋白偶联 gc-1细胞 MAP激酶信号系统

红景天苷对缺氧小鼠gc-1细胞氧化应激损伤的保护作用机制研究

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红景天苷对缺氧小鼠GC-1细胞氧化应激损伤的保护作用机制研究

作者：宋诚甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:以小鼠精原细胞系gc-1细胞为研究对象,通过构建体外gc-1细胞氧化应激损伤模型,探讨红景天苷（Salidroside,SAL）对缺氧gc-1细胞的保护作用及发生机制。方法:1.通过模拟低氧条件处理gc-1细胞,观察缺氧对gc-1细胞的影响,采用CCK-8法... 详细信息

目的:以小鼠精原细胞系gc-1细胞为研究对象,通过构建体外gc-1细胞氧化应激损伤模型,探讨红景天苷（Salidroside,SAL）对缺氧gc-1细胞的保护作用及发生机制。方法:1.通过模拟低氧条件处理gc-1细胞,观察缺氧对gc-1细胞的影响,采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法筛选最佳造模时间;2.观察在模拟缺氧条件下gc-1细胞中线粒体信号通路的表达情况。设置对照组、实验组,检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、总抗氧化能力（total anti-oxidant capacity,T-AOC）、超氧化物歧化酶（super oxide dismutase,SOD）在缺氧gc-1细胞中的变化,以及线粒体膜电位、线粒体染色、线粒体ATP（adenosine triphosphate）含量和检测半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3（Cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、细胞色素C（Cytochrome C,Cyt-C）基因转录水平,以此探讨缺氧对gc-1细胞线粒体信号通路的影响;3.在模拟缺氧条件下采用不同浓度SAL（1、5、10、15、20μM）处理gc-1细胞,采用CCK-8法筛选出红景天苷低剂量组、中剂量组、高剂量组三个药物浓度。设置对照组、模型组、红景天苷实验组（SAL1μM组、SAL5μM组、SAL10μM组）,ROS、MDA、LDH、T-AOC、SOD的变化评价氧化应激水平,线粒体膜电位、线粒体染色、线粒体ATP评价线粒体功能,检测Caspase-3、Cyt-C、Bcl-2、Bax蛋白表达水平,免疫荧光法检测Cleaved-Caspase-3表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。统计分析:实验结果采用SPSS 25.0软件进行统计分析,Graphpad Prism 9进行作图,符合正态分布的计量资料以均数±标准差(（?）±S)表示,多组间比较采用One-Way-Anova分析,事后检验采用LSD检验,两组比较采用t检验,相关性分析采用斯皮尔曼（spearman）双变量相关分析。以Pgc-1细胞凋亡数量逐渐增加,这与Hoechst33342染色结果一致。缺氧24 h（hour,h）细胞活力无明显变化（P>0.05）,缺氧30 h细胞活力下降（Pgc-1细胞活力进一步下降（P细胞活力下降（Pgc-1细胞活力呈负相关（r=-0.857,P细胞内线粒体分布发生改变以及数量减少、ATP含量降低（Pgc-1细胞的影响:与对照组相比,模型组细胞活力下降（P细胞膜电位水平下降,线粒体数量发生变化,荧光强度减弱（P0.05）,Cleaved-Caspase-3、Cyt-C、Bax表达水平升高（P细胞凋亡率升高（P细胞活力升高（P0.05）,SAL5μM组、SAL10μM组ROS水平下降（P0.05）,SAL1μM组、SAL10μM组T-AOC水平变化差异无统计学意义（P>0.05）,SAL5μM组T-AOC水平升高（P0.05）,SAL5μM组、SAL10μM组线粒体膜电位有明显变化,线粒体数量增多、分布均匀荧光强度增加（P<0.05）,三组ATP

关键词：红景天苷缺氧 gc-1细胞氧化应激线粒体信号通路凋亡

淫羊藿苷对博来霉素诱导的gc-1细胞DNA损伤的保护作用

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中国细胞生物学学报 2022年第7期44卷 1319-1329页

作者：赵雪怡赵海霞杨圆杨思琪袁丁张长城三峡大学医学院宜昌443002

该文旨在探究淫羊藿苷(icariin,ICA)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠gc-1精原细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。将gc-1细胞分为正常对照组、BLM处理组(10μg/mL)、BLM+不同浓度(0.5、1、2和4μmol/L)ICA组。用不同浓度ICA预保护... 详细信息

该文旨在探究淫羊藿苷(icariin,ICA)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠gc-1精原细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。将gc-1细胞分为正常对照组、BLM处理组(10μg/mL)、BLM+不同浓度(0.5、1、2和4μmol/L)ICA组。用不同浓度ICA预保护gc-1细胞12 h后加入BLM继续处理6 h,收集细胞,Western blot法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、DNA损伤修复相关通路蛋白(pATM、p-Chk1、p-P53和P21)、碱基切除修复(base excision repair,BER)相关通路蛋白(OGG1、APE1和XRCC1)的表达水平;免疫荧光技术检测γ-H2AX、8-OHdG表达与定位。结果表明,与正常对照组相比,BLM处理组中γ-H2AX、p-ATM、p-Chk1、p-P53、P21、OGG1、APE1和XRCC1的蛋白表达水平均显著上升,而ICA可浓度依赖性地下调BLM诱导的γ-H2AX、p-ATM、p-Chk1、p-P53、P21、OGG1、APE1和XRCC1蛋白表达水平。免疫荧光结果显示,与正常对照组相比,BLM处理组中γ-H2AX阳性细胞数量和8-OHdG表达量呈上升的趋势,而不同浓度ICA均可下调上述BLM诱导的γ-H2AX和8-OHdG表达水平。综上所述,ICA能够改善BLM诱导的gc-1细胞DNA损伤,并下调ATM/Chk1通路和BER信号通路活性。

关键词：淫羊藿苷 ATM/Chk1 碱基切除修复博来霉素 gc-1细胞 DNA损伤

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缺氧条件下gc-1细胞凋亡的作用机制研究

生命科学研究 2023年第6期27卷 544-550,564页

作者：宋诚王纪田石拴霞何毅刚程耀萍王甜王玲中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院生殖中心中国甘肃兰州730050 甘肃中医药大学第一临床医学院中国甘肃兰州730000 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室中国甘肃兰州730050 中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院中国甘肃兰州730050

以小鼠精原细胞系gc-1细胞为研究对象,探讨缺氧条件下gc-1细胞凋亡潜在的分子机制。首先,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同缺氧时间处理下的细胞活力,以确定细胞缺氧损伤的时间;然后,通过化学荧光法检测gc-1细胞中活性氧(react... 详细信息

以小鼠精原细胞系gc-1细胞为研究对象,探讨缺氧条件下gc-1细胞凋亡潜在的分子机制。首先,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同缺氧时间处理下的细胞活力,以确定细胞缺氧损伤的时间;然后,通过化学荧光法检测gc-1细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,采用JC-1法检测线粒体的膜电位,采用比色法检测ATP的含量,采用线粒体荧光探针法检测线粒体的数量与分布,并采用透射电镜观察细胞的超微结构;最后,利用实时荧光定量PCR检测线粒体信号通路相关基因胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平。结果显示,缺氧36 h后,细胞活力为(60.36±5.40)%,符合后续实验需求;在缺氧条件下,gc-1细胞中的ROS含量显著增加,ATP含量显著下降,线粒体膜电位下降、数量减少,同时细胞中促凋亡相关基因的表达水平上调,抗凋亡因子Bcl-2的基因表达水平下调。实验结果初步表明,缺氧可导致gc-1细胞线粒体功能障碍,ROS/线粒体信号通路是缺氧导致gc-1细胞凋亡可能的分子机制。

关键词：缺氧 gc-1细胞氧化应激(OS) 活性氧(ROS) 线粒体通路

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MiR-29a靶向调控瞬时受体电位通道家族4在睾丸缺血再灌注损伤中对gc-1细胞增殖及凋亡的影响及作用机制

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国际泌尿系统杂志 2021年第1期41卷 124-128页

作者：宁金卓程帆余伟民饶婷阮远袁润武汉大学人民医院泌尿外科 430060

目的研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对gc-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法建立睾丸gc-1细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平;分别采用MT... 详细信息

目的研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对gc-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法建立睾丸gc-1细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平;分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对gc-1细胞增殖和凋亡能力的变化;荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系,Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平。结果miR-29a随着复氧损伤时间的增加,其表达显著降低,而TRPV4的表达明显增加;过表达miR-29a能显著促进gc-1细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡水平。沉默miR-29a可使gc-1细胞的增殖能力明显减弱,凋亡水平增加;荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因。过表达miR-29a能明显抑制gc-1细胞的TRPV4表达,而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达。结论MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变gc-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展。

关键词：睾丸再灌注损伤瞬时受体电位通道 gc-1细胞 Mir-29a