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阿司匹林联合吉西他滨对胆囊癌gbc-sd细胞增殖及凋亡的影响

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中华实用诊断与治疗杂志 2022年第9期36卷 889-893页

作者：李仁锋罗凯张旭东郑州大学第一附属医院肝胆胰外科河南郑州450052

目的观察应用不同剂量阿司匹林、吉西他滨处理后胆囊癌gbc-sd细胞增殖与凋亡情况,探讨阿司匹林对gbc-sd细胞吉西他滨化疗敏感性的影响及可能机制。方法取对数生长期gbc-sd细胞,分别应用浓度为0、0.2、1.0、5.0、10.0μmol/L吉西他滨处... 详细信息

目的观察应用不同剂量阿司匹林、吉西他滨处理后胆囊癌gbc-sd细胞增殖与凋亡情况,探讨阿司匹林对gbc-sd细胞吉西他滨化疗敏感性的影响及可能机制。方法取对数生长期gbc-sd细胞,分别应用浓度为0、0.2、1.0、5.0、10.0μmol/L吉西他滨处理24、48、72 h,应用0、0.5、1.0、4.0 mmol/L阿司匹林处理24、48 h,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率。结合前期预实验结果,采用1.0μmol/L吉西他滨、0.5 mmol/L阿司匹林进行后续实验。取对数生长期gbc-sd细胞分为阴性对照组、吉西他滨组、阿司匹林组、联合组。待细胞贴壁后,阴性对照组加入DMSO溶液1μL;阿司匹林组加入0.5 mmol/L阿司匹林1μL;吉西他滨组加入1.0μmol/L吉西他滨0.4μL;联合组先加入0.5 mmol/L阿司匹林1μL,1 h后加入1.0μmol/L吉西他滨0.4μL。药物处理48 h, 4组采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测p-PI3K、PI3K蛋白相对表达量。结果吉西他滨处理24、48、72 h, 0.2、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度的细胞生长抑制率依次增高(P细胞生长抑制率依次增高(P细胞生长抑制率[(29.7±2.9)%、(26.9±2.5)%、(59.3±5.4)%]、细胞凋亡率[(15.3±2.1)%、(12.9±3.1)%、(36.1±8.6)%]均高于阴性对照组[0、(4.5±1.1)%](P0.05);4组PI3K蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论吉西他滨、阿司匹林均可抑制胆囊癌gbc-sd细胞生长、促进gbc-sd细胞凋亡,二者联合具有协同效应,其机制可能与阿司匹林抑制PI3K通路相关。

关键词：胆囊癌 gbc-sd细胞吉西他滨阿司匹林 PI3K 凋亡增殖

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人胆囊癌gbc-sd细胞凋亡

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医学研究杂志 2013年第3期42卷 111-114页

作者：丁笑笑罗文达张佳洪叶冯长伟温州医学院附属浙江省台州医院临海317000

目的研究冬凌草甲素诱导人胆囊癌gbc-sd细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTS法检测冬凌草甲素对gbc-sd细胞的生长抑制作用;瑞氏染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、caspase-3活性变化;Western blot... 详细信息

目的研究冬凌草甲素诱导人胆囊癌gbc-sd细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTS法检测冬凌草甲素对gbc-sd细胞的生长抑制作用;瑞氏染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、caspase-3活性变化;Western blot检测caspase-9活化情况。结果冬凌草甲素能显著抑制gbc-sd细胞增殖,呈时间剂量依赖性(P细胞形态学观察可见冬凌草甲素可诱导细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示28μmol/L药物处理gbc-sd细胞24h后,细胞凋亡率为51.28%±2.65%。随着药物浓度增加,gbc-sd细胞线粒体膜电位逐渐下降而caspase-3活性逐渐增强,56μmol/L组caspase-3活性是对照组的11倍。Western blot分析结果显示caspase-9酶原被激活,且活化条带随药物浓度的增加而增强。结论冬凌草甲素可能通过细胞线粒体膜电位下降激活caspase-3并最终诱导gbc-sd细胞凋亡。

关键词：冬凌草甲素 gbc-sd细胞细胞凋亡线粒体 caspase-3

Cx43基因修饰对人胆囊癌gbc-sd细胞增殖和迁移能力的影响

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中国实验诊断学 2015年第11期19卷 1826-1829页

作者：任立刚天津津南区咸水沽医院外科天津300350

胆囊癌恶性程度较高,其早期症状无明显特异性,发病率又呈现逐年升高的趋势[1,2]。肿瘤的增殖、迁移均存在着基因水平的调控参与,从而提示了一种新的控制肿瘤的方法[3]。Cx43是一种重要的缝隙连接蛋白,表达与多种细胞中,Cx43具有功能多样... 详细信息

胆囊癌恶性程度较高,其早期症状无明显特异性,发病率又呈现逐年升高的趋势[1,2]。肿瘤的增殖、迁移均存在着基因水平的调控参与,从而提示了一种新的控制肿瘤的方法[3]。Cx43是一种重要的缝隙连接蛋白,表达与多种细胞中,Cx43具有功能多样化,在细胞间传递信息和能量,调控细胞的生长、增殖分化及内环境的稳定,因此推断如果阻断肿瘤细胞中Cx43的表达能有效抑制肿瘤[4]。

关键词：胆囊癌 Cx43 gbc-sd细胞基因修饰细胞生长转染方法功能多样化细胞增殖重组质粒人胆

茶多酚诱导人胆囊癌细胞gbc-sd凋亡过程中细胞内游离钙离子浓度及线粒体膜电位的变化

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 449-452,457页

作者：连超群张静陈振东夏俊蚌埠医学院检验系安徽蚌埠233030 蚌埠医学院生物科学系安徽蚌埠233030 蚌埠医学院 2010级研究生安徽蚌埠233030

目的探讨茶多酚(Tea polyphenols,TP)诱导人胆囊癌细胞gbc-sd凋亡过程中细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i及线粒体膜电位(△Ψm)的变化。方法采用MTT法检测TP对gbc-sd细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜(laser sc... 详细信息

目的探讨茶多酚(Tea polyphenols,TP)诱导人胆囊癌细胞gbc-sd凋亡过程中细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i及线粒体膜电位(△Ψm)的变化。方法采用MTT法检测TP对gbc-sd细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning cofocal microscopy,LSCM)观察TP对gbc-sd细胞凋亡的影响;Fluo-3 AM和Rhodamine123染色标记,LSCM观察TP对gbc-sd细胞内[Ca2+]i及△Ψm的影响。结果 TP可明显抑制gbc-sd细胞增殖,并诱导细胞凋亡,且呈时间和剂量依赖性;TP能使gbc-sd细胞内[Ca2+]i增加,△Ψm降低,且呈剂量和时间效应关系。结论 TP对gbc-sd细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与其上调细胞内[Ca2+]i、降低△Ψm有关。

关键词：茶多酚胆囊癌 gbc-sd细胞钙离子浓度线粒体膜电位

人胆囊癌细胞系gbc-sd p53基因突变的研究

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山东大学学报（医学版） 2005年第1期43卷 66-68,71页

作者：乌新林王占民马道新冯立民吴小鹏山东大学齐鲁医院普外科山东济南250012 山东大学齐鲁医院血液学研究室山东济南250012

目的:从蛋白质和分子水平研究人胆囊癌细胞系gbc-sdp53基因状况。方法:对体外培养的gbc-sd细胞,应用免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;用PCR技术扩增gbc-sd细胞p53基因4～9外显子,对所得产物进行直接测序分析。结果:gbc-sd... 详细信息

目的:从蛋白质和分子水平研究人胆囊癌细胞系gbc-sdp53基因状况。方法:对体外培养的gbc-sd细胞,应用免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;用PCR技术扩增gbc-sd细胞p53基因4～9外显子,对所得产物进行直接测序分析。结果:gbc-sd细胞P53蛋白过表达;PCR产物第5外显子126位密码子有TAC→AAC的碱基颠换,因而使其编码的氨基酸从酪氨酸→天冬酰胺,产生错义突变。结论:人胆囊癌细胞系gbc-sd表达突变型P53蛋白,点突变是其p53基因功能失活的主要原因。

关键词：胆囊肿瘤 gbc-sd细胞基因,p53 点突变

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌sd细胞生物学行为的影响实验研究

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陕西医学杂志 2024年第3期53卷 322-326,330页

作者：王京京李全福张立广邵青龙保定市第二医院肝胆外科河北保定071000

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌sd(gbc-sd)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人gbc-sd细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理gbc-sd细胞,然后... 详细信息

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌sd(gbc-sd)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人gbc-sd细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理gbc-sd细胞,然后检测细胞存活率。将gbc-sd细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养gbc-sd细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养gbc-sd细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养gbc-sd细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养gbc-sd细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组gbc-sd细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,gbc-sd细胞存活率逐渐降低(均P细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均Pgbc-sd细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均Pgbc-sd细胞增殖、迁移和侵袭,促进gbc-sd细胞凋亡。

关键词：胆囊癌紫檀芪微小RNA-340-5p 髓细胞白血病-1 gbc-sd细胞生物学行为

VEGF反义寡核苷酸对人胆囊癌细胞VEGF、Flt-1及KDR mRNA和蛋白水平表达的影响

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中华医学杂志 2007年第47期87卷 3329-3334页

作者：方河清李海军刘颖斌王许安马孝明孔颖陈燕陈德琴翁伟宏张志平 KR Devkota 王建伟李江涛曹利平彭淑牖浙江大学医学院附属第二医院外科杭州310009 新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆外科

目的体外研究 Oligofectamine 介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1及 KDR 在 mRNA 和蛋白水平的表达及生长增殖和凋亡的影响。方法运用 Oligofectamine 介导的 VEGF ASODN 和 SODN 转染人... 详细信息

目的体外研究 Oligofectamine 介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1及 KDR 在 mRNA 和蛋白水平的表达及生长增殖和凋亡的影响。方法运用 Oligofectamine 介导的 VEGF ASODN 和 SODN 转染人胆囊癌细胞 gbc-sd,半定量 RT-PCR 检测各组细胞 VEGF、Flt-1及 KDR mRNA 转染前后不同时间的表达变化、ELISA 测定转染后各组细胞培养上清液 VEGF 蛋白浓度。结果 ASODN 组及 ASODN+Oligofectamine 组都能显著抑制 VEGF、Flt-1及 KDRmRNA 的表达,且 VEGF ASODN+Oligofectamine 的抑制作用比 ASODN 更强(P>0.05)。ELISA 测定结果显示 ASODN 组及 ASODN+Oligofectamine 组均抑制 VEGF 蛋白的分泌(P0.05)。结论 VEGFASODN 能抑制人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1和 KDR 在 mRNA 水平的表达和 VEGF 蛋白的表达,从而促进 gbc-sd 细胞的凋亡;Oligofectamine 能明显增强 VEGF ASODN 的抑制效果。

关键词：寡核苷酸,反义内皮生长因子 gbc-sd细胞 Oligifeetamine

丙酮酸激酶同工酶M2在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响

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郑州大学学报（医学版） 2019年第2期54卷 245-249页

作者：陈建安陈思玉刘丽文陈晓龙朱威威余炎何玉婷孙冉冉任志刚李娟崔光莹余祖江郑州大学第一附属医院感染科郑州450052

目的:探讨丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响。方法:利用免疫组化法检测胆囊癌和癌旁正常组织中PKM2蛋白的表达。采用siRNA转染试剂将PKM2 siRNA和阴性对照SiRNA转染入胆囊癌gbc-sd细胞和... 详细信息

目的:探讨丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响。方法:利用免疫组化法检测胆囊癌和癌旁正常组织中PKM2蛋白的表达。采用siRNA转染试剂将PKM2 siRNA和阴性对照SiRNA转染入胆囊癌gbc-sd细胞和NOZ细胞中,使用细胞免疫荧光和Western blot法检测两种胆囊癌细胞中PKM2蛋白的表达,应用MTT和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭能力,使用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测细胞糖代谢能力。结果:PKM2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P gbc-sd和NOZ细胞的细胞质区域。转染PKM2 siRNA后,胆囊癌gbc-sd和NOZ细胞中PKM2的表达水平降低,细胞增殖、侵袭能力均降低(P 细胞外乳酸生成量和ATP消耗量均明显减少(P 细胞中高表达,其与胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力关系密切,有望成为一个新的治疗胆囊癌的靶点。

关键词： PKM2 糖酵解胆囊癌 gbc-sd细胞 NOZ细胞

miRNA干扰HPA表达对胆囊癌细胞生物学行为影响的体外研究

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miRNA干扰HPA表达对胆囊癌细胞生物学行为影响的体外研究

作者：李三红蚌埠医学院

学位级别：硕士

胆囊癌恶性程度高，预后极差，手术切除率低，主要原因是出现症状时多已属晚期，已发生侵润和转移。乙酰肝素酶(heparanase, HPA)是一种内源性β-D-葡萄糖醛酸酶，是哺乳动物细胞内唯一具有降解位于细胞表面、细胞外基质及基底膜的硫酸... 详细信息

胆囊癌恶性程度高，预后极差，手术切除率低，主要原因是出现症状时多已属晚期，已发生侵润和转移。乙酰肝素酶(heparanase, HPA)是一种内源性β-D-葡萄糖醛酸酶，是哺乳动物细胞内唯一具有降解位于细胞表面、细胞外基质及基底膜的硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）的多糖侧链-硫酸乙酰肝素链（HS）功能的酶。能特异性的水解HS的结构，削弱细胞间质的屏障功能，促进肿瘤细胞侵入基质和血管壁，与肿瘤的侵袭、转移密切相关。近年来研究发现越来越多的癌症组织中有HPA的表达上调，其表达与肿瘤的局部侵犯和远处转移呈正相关，与术后的生存率呈负相关，提示HPA作为预后标志物的可能。若能干扰HPA在肿瘤中的表达，有望抑制肿瘤的侵袭与转移。本研究采用miRNA干扰抑制人胆囊癌gbc-sd细胞中HPA靶基因的表达，采用脂质体介导的转染方法，将HPA导入体外培养的人胆囊癌gbc-sd细胞，研究miRNA干扰HPA的表达对靶细胞的影响，以揭示HPA在人胆囊癌细胞侵袭、转移机制中的作用，探讨HPA作为预防和治疗胆囊癌侵袭、转移的新靶点可能，而RNA干扰技术可能会成为肿瘤治疗的一个新途径，为进一步开展临床应用研究奠定基础。第一部分HPA在人胆囊癌gbc-sd细胞中表达的研究研究目的：检测人胆囊癌gbc-sd细胞中HPA mRNA、HPA蛋白表达情况。研究方法：取对数生长期的人胆囊癌gbc-sd细胞，通过RT-PCR法、Western blot和细胞免疫组化法检测gbc-sd细胞中HPA mRNA、HPA蛋白表达水平。研究结果： RT-PCR检测显示HPA mRNA片段大小为585bp，β-actin为218bp，与理论值相符，HPA mRNA表达强度为1.00±0.04。Western blot显示HPA蛋白分子量大小为65KDa，β-actin为43KDa，与理论值相符。HPA蛋白表达强度为研究结论：HPA在人胆囊癌gbc-sd细胞中是高表达的。第二部分miRNA干扰HPA对gbc-sd细胞HPA mRNA表达及HPA蛋白表达的影响研究目的:构建人HPA基因的特异性干扰表达载体miRNA，筛选有效干扰质粒。研究方法:根据Gene ID：10855提供的基因序列，利用invitrogen公司的在线RNAi设计工具，设计针对HPA基因的不同位点的4个特异性miRNA干扰序列;将选择的序列和相应的基因组数据库进行BLAST序列比对，确信所选择的序列与其他的基因不具有同源性;以鼠miR-155为骨架构建4个针对HPA基因的特异性miRNA载体，并进行DNA测序验证。用Lipofectamine2000介导分别将质粒pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR–HPA-1、-2、-3、-4转染入人胆囊癌gbc-sd细胞株，实验另设阴性对照组（转染pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-neg）及空白对照组（未转染组），瞬转48小时后通过倒置荧光显微镜下观察绿色荧光确定转染效率，分别采用RT-PCR和Western blot蛋白印迹法检测HPA mRNA及蛋白表达变化情况，筛选出干扰效率最强的一个质粒载体。研究结果：DNA测序分析证实，pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR–HPA-1(HPA1)、pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-HPA-2(HPA2)、pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR–HPA-3(HPA3)、pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-HPA-4(HPA4)中的插入片段序列均与设计的miRNA oligo序列一致，4个针对HPA基因的miRNA载体均构建成功。RT-PCR检测细胞转染48h后空白对照组、阴性对照组、HPA1、HPA2、HPA3、HPA4组，HPA mRNA相对表达量分别为0.96±0.08、0.90±0.07、0.30±0.04、0.24±0.05、1.06±0.06、0.36±0.09。Western blot检测细胞转染48h后空白对照组、阴性对照组、HPA1、HPA2、HPA3、HPA4组，HPA蛋白相对表达量分别为0.79±0.03， 0.76±0.02，0.39±0.01，0.34±0.02，0.80±0.03，0.42±0.01。可见质粒HPA2组沉默人胆囊癌gbc-sd细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好。选取HPA2组质粒作为沉默效果最佳的质粒载体，进行后续实验。研究结论：认为pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR载体构建有效，HPA2组质粒作为沉默效果最佳的质粒载体，进行后续实验。第三部分miRNA干扰HPA表达对胆囊癌细胞生物学行为的影响研究目的：探讨miRNA干扰沉默HPA基因表达对人胆囊癌gbc-sd细胞生物学行为的影响。研究方法：采用激光共聚焦显微镜和Giemsa染

关键词：胆囊癌 gbc-sd细胞 HPA miRNA RNAi 基因沉默 miRNA干扰乙酰肝素酶增殖凋亡肿瘤侵袭