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gadd45a基因对细胞调控作用的研究进展

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内蒙古医学院学报 2010年第2期32卷 155-158页

作者：李鹏飞杨成旺苏秀兰内蒙古医学院附属医院临床医学研究中心内蒙古呼和浩特010050

细胞周期及生长的调控是细胞存活必不可少的,在细胞增殖及细胞周期控制有许多复杂的机制。gadd45a基因为生长阻滞和DNA损伤修复基因,是重要的抑癌基因,是p53、BRCI基因调控的下游基因,调控细胞周期阻滞,细胞纺锤体检查点调控,DNA修复和... 详细信息

细胞周期及生长的调控是细胞存活必不可少的,在细胞增殖及细胞周期控制有许多复杂的机制。gadd45a基因为生长阻滞和DNA损伤修复基因,是重要的抑癌基因,是p53、BRCI基因调控的下游基因,调控细胞周期阻滞,细胞纺锤体检查点调控,DNA修复和诱导细胞凋亡。在细胞对外界损伤反应调控网络中扮有重要角色,在维持基因组稳定性和抑制肿瘤发生发展的过程中发挥重要的作用。gadd45a作为控制癌细胞增殖代谢途径的重要组成部分,成为一个值得新兴的药物进一步研究靶点。

关键词： gadd45a基因细胞周期 G2/M期阻滞中心体异常

基于p53、gadd45a基因表达的可疑致癌性高通量筛选系统的建立及在食品相关化学污染物的初步应用

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基于p53、GADD45a基因表达的可疑致癌性高通量筛选系统的建立及在...

作者：李艳福建医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究拟分别构建以p53、gadd45a基因为靶基因的的两个可疑致癌性高通量筛选系统,并选取19种较为常见的食品相关化学污染物进行筛选,以期获得其可能的致癌性数据;对构建的两个可疑致癌性高通量筛选系统进行评价,以评估新筛选系统... 详细信息

目的:本研究拟分别构建以p53、gadd45a基因为靶基因的的两个可疑致癌性高通量筛选系统,并选取19种较为常见的食品相关化学污染物进行筛选,以期获得其可能的致癌性数据;对构建的两个可疑致癌性高通量筛选系统进行评价,以评估新筛选系统的筛选能力及应用于实际的可能性。方法:1、查阅文献及相关资料,选择了19种较为常见的食品相关化学污染物:黄曲霉毒素B1、丙烯酰胺、氯霉素、己烷雌酚、AHD、AMOZ、AOZ、SEM、结晶紫、隐性结晶紫、孔雀石绿、隐性孔雀石绿、氧氟沙星、奥比沙星、双氟沙星、司帕沙星、恩诺沙星、甲砜霉素、氟甲砜霉素,分别按照其对应的溶解性及实际生活中可能存在的需进行可疑致癌性筛选的浓度,并结合控制溶剂DMSO在细胞系统中含量(不应超过0.5%)配置其测试浓度。2、用MTT法筛选了19种食品相关化学污染物,分别模拟其在U-2 OS细胞系及HCT 116细胞系的急性毒性反应,获得其可能的急性毒性反应数据。3、将质粒p GL4.38[luc2P/p53 RE/Hygro]及质粒p GL4.75[h Rluc/TK]以瞬时转染的方法转染入U-2 OS细胞系。4、将质粒gadd45 WT-luc和质粒p GL4.75[h Rluc/TK]以瞬时转染的方法转染入HCT 116细胞系。5、用构建的p53-U-2 OS可疑致癌性高通量筛选系统筛选了通过MTT实验的17种食品相关化学污染物。6、用构建的gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统筛选了通过MTT实验的17种食品相关化学污染物。7、查询了文献中有记录的8种食品相关化学污染物的Ames实验结果并对其结果进行标准化;用Ames实验测试了9种文献中尚无相关记录的食品相关化学污染物。8、查询相关文献和资料获得17种食品相关化学污染物的动物致癌性实验资料。9、将Ames实验结果与动物致癌性实验结果相比,进行了本实验条件下的筛选能力比较。10、分别将p53-U-2 OS可疑致癌性高通量筛选系统、gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统与Ames实验结果相比,进行了本实验条件下的筛选能力比较;分别将p53-U-2 OS可疑致癌性高通量筛选系统、gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统与动物致癌性实验结果相比,进行了本实验条件下的筛选能力比较。结果:1、经MTT法测试,结晶紫(10μM)与孔雀石绿(10μM)在较低浓度对U-2OS细胞系的急性毒性仍较大,故不将其纳入后续实验;结晶紫(10μM)与孔雀石绿(100μM)在较低浓度对HCT 116细胞系的急性毒性仍较大,故不将其纳入后续实验;其余17种化学物均通过对于U-2 OS细胞系及HCT 116细胞系的MTT测试。2、构建了p53-U-2 OS瞬时转染可疑致癌性高通量筛选系统。3、构建了gadd45a-HCT 116瞬时转染可疑致癌性高通量筛选系统。4、p53-U-2 OS可疑致癌性高通量筛选系统的实验结果显示:17种食品相关化学污染物在不同浓度下(除AMOZ在1000μM浓度时)对系统中的p53基因均存在一定的诱导作用。5、gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统的实验结果显示:隐性结晶紫、隐性孔雀石绿、氧氟沙星、双氟沙星、司帕沙星、恩诺沙星、甲砜霉素、氟甲砜霉素、丙烯酰胺、黄曲霉毒素B1对系统中的gadd45a基因均存在一定的诱导作用。6、Ames实验结果显示:9种文献中尚无相关记录的食品相关化学污染物在本实验条件下表现为阴性。7、与动物致癌性实验结果相比,Ames实验的灵敏度和特异度分别为75%和76.9%,一致率为76.5%。8、与Ames实验相比,p53-U-2 OS、gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统的筛选能力与Ames实验的筛选能力较为相似,在特定界值下一致率可分别达到88.2%和75%,但在应用范围和检出阈上,两个新筛选系统均优于Ames筛选实验;与“金标准”动物致癌性实验结果相比,p53-U-2 OS系统与动物致癌性实验的一致率要优于Ames实验与动物致癌性实验的一致率(主要体现在较高界值点时);gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统则表现出较高的特异度(当其与Ames实验和动物致癌性实验相比的一致率达到相似水平时,其特异度可达到100%),区分可能非致癌物的能力较好。结论:p53-U-2 OS可疑致癌性高通量筛选系统较为灵敏,17种食品相关化学污染物均有诱导系统中p53基因表达上调的相关数据(除AMOZ在1000μM时);gadd45a-HCT 116可疑致癌性高通量筛选系统可筛选出10种食品相关化学污染物诱导系统中gadd45a基因表达的相关数据。但这两个系统的实验结果需结合其他筛选实验及动物致癌性实验结果综合判定。同为筛选系统,在本实验条件下p53-U-2 OS、gadd45a-HCT 116系统的总体筛选能力优于Ame

关键词： p53基因 gadd45a基因 p53-U-2 OS系统 gadd45a-HCT 116系统可疑致癌性高通量筛选食品相关化学污染物筛选能力比较

^(60)Coγ射线诱发人外周血gadd45a基因表达的变化研究

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中国辐射卫生 2011年第3期20卷 262-264页

作者：党旭红左雅慧段志凯郭万龙刘建功中国辐射防护研究院放射医学与环境医学研究所山西太原030006

目的探讨电离辐射诱导人外周血gadd45a基因的表达变化,为寻找急性照射条件下辐射损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法采集无急慢性疾病、不抽烟、年龄在26～29周岁的3名男性非放射性工作者外周血各10ml,分为10组,每组1ml。利用中国辐... 详细信息

目的探讨电离辐射诱导人外周血gadd45a基因的表达变化,为寻找急性照射条件下辐射损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法采集无急慢性疾病、不抽烟、年龄在26～29周岁的3名男性非放射性工作者外周血各10ml,分为10组,每组1ml。利用中国辐射防护研究院60Co照射装置对采集的血样分组照射,剂量率为0.313Gy/min。吸收剂量分别为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2和3 Gy,照射后的人外周血于37℃培养箱中静置2h后提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术对外周血gadd45a基因进行检测。结果实时荧光定量PCR检测结果表明各剂量组与对照组相比,其基因表达均有显著变化。0.05～0.6Gy剂量组与对照组相比基因表达下调,其中0.05～0.2Gy之间,随着照射剂量的增加,基因表达量逐渐降低;0.2～0.6Gy之间,随着照射剂量的增加基因表达量又逐渐增加。0.8Gy时,基因表达量增幅较大,高于对照组和1Gy剂量组。1～3Gy剂量组基因表达量均高于对照组,且随着剂量增大,表达量增加,具有明显剂量相关性。结论电离辐射可以诱导人外周血gadd45a基因的差异表达,1～3Gy之间具有明显剂量相关性。0.05～0.2Gy之间外周血淋巴细胞表现出辐射刺激效应。

关键词：电离辐射 ^60Coγ射线 gadd45a基因实时荧光定量PCR

^(137)Cs γ射线慢性照射诱导大鼠外周血gadd45a基因表达变化的研究

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中国辐射卫生 2011年第1期20卷 17-19页

作者：左雅慧党旭红段志凯刘建功郭万龙中国辐射防护研究院放射医学与环境医学研究所山西太原030006

目的探讨长期慢性照射条件下辐射诱导的大鼠外周血gadd45a基因的表达变化。方法将SD大鼠置于137Cs放射源下累积照射,吸收剂量分别为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、3、4和5Gy,照射完成组禁食2 h后腹主动脉采血,利用实时荧光定量... 详细信息

目的探讨长期慢性照射条件下辐射诱导的大鼠外周血gadd45a基因的表达变化。方法将SD大鼠置于137Cs放射源下累积照射,吸收剂量分别为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、3、4和5Gy,照射完成组禁食2 h后腹主动脉采血,利用实时荧光定量PCR检测外周血gadd45a基因的表达变化。结果各剂量组与对照组相比,其外周血gadd45a基因表达均有显著变化,整体上随照射剂量的增加,基因表达量具有一定的上升趋势。其中,0.05Gy剂量组与对照组相比表达增高。随着照射剂量的增加及照射时间的延长,gadd45a基因的相对表达量有所回落,当剂量达0.4Gy后该基因表达减至最低点。之后随照射剂量的增大,各剂量组与对照组相比具有不同程度的升高,4Gy照射组的gadd45a基因表达增强最显著。结论慢性累积照射可诱导大鼠外周血gadd45a基因表达发生改变,其总体表达趋势是增强的。

关键词：电离辐射137Cs gadd45a基因实时荧光定量PCR

电离辐射对人外周血细胞gadd45a和nm23-H1基因表达的影响

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电离辐射对人外周血细胞GADD45A和nm23-H1基因表达的影响

作者：张萍郑州大学

学位级别：硕士

核能和核技术的应用和扩展,给人类带来利益时,也带来危害。辐射危害评价的一个方面是辐射剂量估算。目前,染色体畸变法是进行剂量估算的首选方法,但这种方法也存在不能早期、高通量估算剂量的缺陷。因此,寻找能早期、快速、高通量的生... 详细信息

核能和核技术的应用和扩展,给人类带来利益时,也带来危害。辐射危害评价的一个方面是辐射剂量估算。目前,染色体畸变法是进行剂量估算的首选方法,但这种方法也存在不能早期、高通量估算剂量的缺陷。因此,寻找能早期、快速、高通量的生物剂量估算法成为放射生物学者研究的热点。 gadd45基因是生长抑制和DNA损伤诱导基因(Growth arrest and DNA damage inducible genes)家族的一员,细胞内、外多种因素在转录、翻译等多个层次对其进行调节。gadd45a是一种可以被电离辐射强烈诱导,产生反应性表达改变的基因。该基因照射后的基因表达变化作为生物剂量计成为辐射学领域近年来研究的热点。 nm23基因(non-metastatic 23 gene)是肿瘤细胞转移抑制基因。相关研究显示,辐射对nm23-H1基因表达变化有一定影响,但这些研究大都集中于对肿瘤细胞的研究。关于该基因表达变化在肿瘤细胞和健康人外周血细胞对辐射的响应是否一致,以及辐射对人外周血细胞nm23-H1基因表达变化影响的研究均未见报道。目的采用实时RT-PCR的方法,检测X射线离体照射人外周血细胞后,gadd45a和nm23-H1基因表达水平的变化,分析两基因表达在离体照射下的量效关系以及时程变化,从而为寻找新的、特异的辐射生物标志物和剂量估算体系提供方法和实验基础。材料与方法 1样本采集、照射及培养知情同意的情况下,采集4名健康人的外周血后,进行X射线照射,后分别加入1640培养液培养至0、6、12、24 h时收获细胞。 2白细胞分离及RNA的提取红细胞裂解液裂解红细胞,磷酸盐缓冲液洗涤,得到的白细胞用Trizol法提取RNA。 3 cDNA的合成用M-MLV逆转录酶进行反转录,合成cDNA,并将cDNA于-20℃保存,备用。 4 Real-Time RT-PCR检测gadd45a和nm23-H1基因的表达以18S rRNA为内参基因检测gadd45a和nm23-H1基因的相对表达量。分析gadd45a和nm23-H1基因表达变化与照射剂量的关系,并观察时程变化。 5统计学处理使用SPSS 12.0统计软件对所得结果进行多组样本资料的方差分析。检验水准α=0.05。结果1 gadd45a基因的量-效及时-效关系 X射线照射后,不同时间点各剂量组gadd45a表达水平有差异(F=10.497、8.753、31.874,Pgadd45a表达水平随剂量增加逐渐增高,拟合量-效关系曲线方程为：Y=10-0.878+0.118X-2,R2=0.605;24 h时在2～4 Gy剂量范围内,gadd45a表达水平随剂量增加亦增高。不同剂量X射线照射后gadd45a表达水平随时间推移不断增加(F=76.431、23.771、13.797、99.805、18.834,P基因的量-效及间-效关系 X射线照射后6 h,在1-3 Gy剂量范围内,nm23-H1表达水平随剂量增加增高(F=15.064,P0.05)。0、4和5 Gy照射后,nm23-H1表达水平随时间的推移有降低趋势(F=8.636、4.112、5.411,Pgadd45a和nm23-H1基因的表达,且在不同的剂量范围内,随剂量的增加两基因表达水平增加,有一定的剂量-效应关系。 2电离辐射诱导gadd45a基因表达改变的剂量-效应关系要优于nm23-H1基因。

关键词：实时RT-PCR 电离辐射基因表达变化 gadd45a基因 nm23-H1基因

眼镜蛇毒因子耗竭补体对大鼠Thy-1肾炎凋亡病变及其gadd45α基因表达的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第2期28卷 144-148,165页

作者：冯雪凤邱文高玲娟张艳王迎伟南京医科大学微生物与免疫学系江苏南京210029

目的:研究眼镜蛇毒因子(CVF)耗竭体内补体对Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)凋亡病变及其生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45α(gadd45α)基因表达的影响。方法:利用抗胸腺细胞抗血清(ATS)复制大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 N)模型。大鼠随机分为正... 详细信息

目的:研究眼镜蛇毒因子(CVF)耗竭体内补体对Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)凋亡病变及其生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45α(gadd45α)基因表达的影响。方法:利用抗胸腺细胞抗血清(ATS)复制大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 N)模型。大鼠随机分为正常对照组、Thy-1 N组和CVF+Thy-1 N组。取各组大鼠血清检测补体CH50活性。另取各组大鼠肾皮质,行电镜和TUNEL染色检查判断其肾组织细胞凋亡的病理变化;用RT-PCR和real-time PCR检测大鼠肾组织凋亡相关基因,即gadd45α mRNA丰度;用Western blotting检测gadd45α蛋白表达水平。结果:CVF+Thy-1 N组补体CH50活性明显下降,与Thy-1 N组和正常对照组相比差异明显(Pgadd45α mRNA 40min开始上调,3h达到峰值,而用CVF处理的Thy-1 N大鼠,gadd45α mRNA丰度则明显低于Thy-1N组(Pgadd45α蛋白水平3h时显著增多,而CVF+Thy-1 N gadd45α蛋白水平明显低于Thy-1 N组(Pgadd45α基因的表达。

关键词：眼睛蛇毒因子补体 Thy-1肾炎肾小球系膜细胞 gadd45a基因凋亡

中药复方“金复康”抑制肺癌细胞生长机制的研究

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世界科学技术-中医药现代化 2016年第10期18卷 1813-1818页

作者：陈健康亚妮沈挺挺赵小东付艳丽许玲上海交通大学生物医学工程学院/上海系统生物医学研究中心上海200240 上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的:本文主要探讨中药复方金复康萃取物对人非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:本文以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,应用CCK8试剂盒检测了金复康萃取物对细胞增殖活力... 详细信息

目的:本文主要探讨中药复方金复康萃取物对人非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:本文以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,应用CCK8试剂盒检测了金复康萃取物对细胞增殖活力的影响,流式细胞技术检测金复康对细胞凋亡诱导作用,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time q PCR,RT-q PCR)检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:金复康萃取物对A549细胞增殖有较显著抑制作用,并且存在剂量依赖效应。与对照组相比,金复康处理组细胞数量明显减少,伴随着大量细胞间距增大,失去原有形态,DAPI细胞核染色结果显示细胞核受到损伤。流式细胞检测实验显示金复康明显诱导A549细胞凋亡。RT-q PCR检测发现金复康上调凋亡相关基因转录表达水平。结论:金复康通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖,这一过程可能与其诱导凋亡相关基因FADD和gadd45a表达上调有关。

关键词：肺癌金复康细胞凋亡 FADD基因 gadd45a基因