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滋阴养血安神方对PCPA诱导的失眠小鼠GABA能系统通路递质含量及受体表达的影响

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中华中医药学刊 2019年第8期37卷 1925-1928页

作者：孙延娜乔铁张立德刘树权辽宁中医药大学辽宁沈阳110847 沈阳市第二中医医院辽宁沈阳110101

目的:探讨滋阴养血安神方对睡眠剥夺小鼠GABA能系统氨基酸递质含量、受体表达及GAD67酶蛋白表达的影响。方法:利用腹腔注射氯苯丙氨酸(PCPA)制造睡眠剥夺模型,分6组,空白对照组、模型组、滋阴养血安神方低剂量组(73 g/kg)、滋阴养血安... 详细信息

目的:探讨滋阴养血安神方对睡眠剥夺小鼠GABA能系统氨基酸递质含量、受体表达及GAD67酶蛋白表达的影响。方法:利用腹腔注射氯苯丙氨酸(PCPA)制造睡眠剥夺模型,分6组,空白对照组、模型组、滋阴养血安神方低剂量组(73 g/kg)、滋阴养血安神方中剂量组(146 g/kg)、滋阴养血安神方高剂量组(292 g/kg)、地西泮组(2 mg·kg^-1·d^-1),造模并给药7 d后,检测小鼠下丘脑GABA受体gabaarα1蛋白表达及mRNA表达,检测下丘脑组织中关键酶GAD67蛋白含量。结果:滋阴养血安神方可提高gabaarα1、GAD67蛋白表达及gabaarα1mRNA表达(Pgabaarα1、GAD67蛋白表达及gabaarα1mRNA表达影响PCPA诱导的失眠小鼠睡眠。

关键词：滋阴养血安神方氯苯丙氨酸(PCPA) GABA gabaarα1 GAD67

γ-羟基丁酸对神经细胞缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸及其A受体的关系

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中风与神经疾病杂志 2005年第5期22卷 416-418页

作者：赵庆杰刘玉梅宋冬晶郜旭苏志强哈尔滨医科大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省医院黑龙江哈尔滨150036 吉林大学中日联谊医院吉林长春130023

目的探讨γ-羟基丁酸(GHBA)对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸(GABA)和GABA受体A型α1亚型(gabaarα1)阳性神经元表达的关系。方法采用原代培养新生大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤模型,分为缺氧前GHBA干预组、缺氧后GHB... 详细信息

目的探讨γ-羟基丁酸(GHBA)对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸(GABA)和GABA受体A型α1亚型(gabaarα1)阳性神经元表达的关系。方法采用原代培养新生大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤模型,分为缺氧前GHBA干预组、缺氧后GHBA干预组和未干预组．于复氧24h后,观察细胞存活数、GABA和gabaarα1阳性神经元的表达。结果(1)GHBA干预各组皮层神经元细胞存活数、GABA和gabaarα1阳性细胞数均高于相应未干预组(Pgabaarα1阳性细胞表达数均高于相对应缺氧后干预组(Pgabaarα1阳性神经元的表达水平对缺氧复氧皮层神经元发挥保护作用。

关键词： GHBA 皮层神经元缺氧复氧损伤 GABA gabaarα1

左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑氨基酸类神经递质受体表达的影响

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中药药理与临床 2007年第3期23卷 6-8页

作者：康湘萍金国琴龚张斌戴薇薇上海中医药大学基础医学院生化教研室上海201203

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑NMDAR1、gabaarα1蛋白表达的影响。方法:以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,老年左归丸组和老年右归丸组从20月龄起分别服用左归丸和右归丸药液,另设老年对照组、青年对照组(5月龄)。采... 详细信息

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠下丘脑NMDAR1、gabaarα1蛋白表达的影响。方法:以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,老年左归丸组和老年右归丸组从20月龄起分别服用左归丸和右归丸药液,另设老年对照组、青年对照组(5月龄)。采用Western-blot法检测各组大鼠下丘脑NMDAR1、gabaarα1蛋白表达变化。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠下丘脑NMDAR1、gabaarα1表达均明显降低,左归丸和右归丸均能显著提高下丘脑NMDAR1、gabaarα1蛋白表达水平。结论:左归丸和右归丸能通过调整下丘脑氨基酸类神经递质受体表达,改善中枢神经系统功能。

关键词：左归丸右归丸 HPA轴 MDAR1 gabaarα1

瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑GABA含量及受体表达的影响

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瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑GABA含量及受体表达的影响

作者：陈梦婷重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:观察脂肪细胞激素瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑GABA含量以及受体表达的影响,并探讨其可能机制。方法:采用随机数字分布法将雄性C57BL/6小鼠分成3组:对照组(Con组)、睡眠剥夺组(SD组)、瘦素补充组(L-SD组)。对照组设置水环境不剥夺睡眠... 详细信息

目的:观察脂肪细胞激素瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑GABA含量以及受体表达的影响,并探讨其可能机制。方法:采用随机数字分布法将雄性C57BL/6小鼠分成3组:对照组(Con组)、睡眠剥夺组(SD组)、瘦素补充组(L-SD组)。对照组设置水环境不剥夺睡眠;睡眠剥夺组利用“改良多平台水环境法”建立小鼠睡眠剥夺模型;瘦素补充组(L-SD组)在剥夺同时予以瘦素1.3mg/(kg·d)腹腔给药。睡眠剥夺7天后,观察小鼠一般情况,测量体重并采集下丘脑组织和血浆标本,检测各组小鼠血浆瘦素水平,下丘脑GABA、GLU的含量,以及下丘脑组织中GABA关键合成酶GAD67蛋白和GABA受体gabaarα1蛋白含量的表达水平。结果:利用“多平台水环境法”成功建立睡眠剥夺模型,睡眠剥夺组小鼠体重与对照组相比,睡眠剥夺小鼠体重明显减轻(P1),皮毛失去光滑,对光线和声音特别敏感,表现轻微躁狂,攻击性强;睡眠剥夺组血浆瘦素水平明显降低(P1)下丘脑GABA水平较对照组降低,Glu水平升高(P1,Pgabaarα1蛋白的表达(Pgabaarα1蛋白表达,这可能是瘦素影响睡眠的重要机制。

关键词：瘦素睡眠剥夺 γ-氨基丁酸(GABA) gabaarα1 GAD67

基于巨刺理论探讨针刺改善大脑中动脉栓塞大鼠运动功能的作用及机制研究

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基于巨刺理论探讨针刺改善大脑中动脉栓塞大鼠运动功能的作用及机...

作者：王丹天津中医药大学

学位级别：硕士

目的:基于巨刺理论观察针刺在改善大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠肢体运动功能中的作用,并初步探讨其效应机制。方法:1、通过使用不同线栓(自制石蜡线栓、硅胶线栓)和不同麻醉剂(水合氯醛、异氟烷)进行MCAO模型制备,观察模型成功率和7天... 详细信息

目的:基于巨刺理论观察针刺在改善大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠肢体运动功能中的作用,并初步探讨其效应机制。方法:1、通过使用不同线栓(自制石蜡线栓、硅胶线栓)和不同麻醉剂(水合氯醛、异氟烷)进行MCAO模型制备,观察模型成功率和7天内存活率以选择更合适的模型制备条件。2、确立合适模型制备条件的基础上选取合谷、内关、足三里、阳陵泉四个穴位对MCAO模型大鼠进行健侧、患侧及双侧穴位电针治疗。在模型制备前、模型制备24h和针刺7天后对大鼠进行行为学评分,并对模型大鼠进行TTC染色和脑含水量测定以观察其疗效。3、利用Western Blot技术检测双侧皮层gabaarα1蛋白和GAP-43蛋白的表达量变化,并对模型大鼠健侧皮层进行高通量基因测序分析,初步探究健侧针刺改善缺血性卒中后运动功能潜在机制。结果:1、硅胶线栓组大鼠与自制石蜡线栓组比较,模型成功率更高,7d存活率更高(P0.05),但异氟烷组7d存活率更高(P0.05),具有可比性。针刺7天后假手术组评分无变化,其余四组评分均下降但仍高于假手术组(P0.05)。TTC染色显示除假手术组外其余四组大鼠均有白色脑梗区域,模型制备24h组脑梗死体积最大,针刺7天后,四组大鼠脑梗死体积均减小,健侧针刺组、患侧针刺组、双侧针刺组与模型组相比脑梗死灶体积更小(P0.05)。大鼠模型制备24h时脑含水量最高,针刺7天后,脑含水量相对下降,模型组、健侧针刺组、患侧针刺组、双侧针刺组与模型制备后24h、假手术组比有统计学差异(Pgabaarα1蛋白表达量变化:针刺干预7天后,与假手术组相比,其余各组均有下降趋势,而只有健侧针刺组、患侧针刺组下降趋势有统计学差异(P0.05);健侧皮层中gabaarα1蛋白表达量,与假手术组相比,其余四组均呈下降趋势,但均无统计学差异(P>0.05)。患侧皮层中GAP-43蛋白表达量变化:针刺干预7天后,模型组与假手术组比趋势明显下降,有统计学差异(P0.05);健侧皮层GAP-43蛋白表达量,模型组与假手术组比较呈下降趋势,但无统计学差异(P>0.05);针刺各组与模型组比较,表达量呈现上升趋势,但无统计学差异(P>0.05)。4、健侧皮层高通量测序分析结果表明:健侧针刺组与模型组比较筛选出11个表达显著变化差异基因,GO功能富集主要在细胞成分变化及发展过程方面,KEGG富集通路主要为PI3K-Akt通路;患侧针刺组与模型组比较筛选出13个表达显著变化差异基因,GO功能富集主要在细胞内外变化方面,KEGG富集通路主要为代谢途径通路。结论:1、与自制石蜡线栓(基于本实验室条件所制)相比,购置的规格统一的硅胶线栓更适合用于MCAO模式的制备。与水合氯醛麻醉剂相比,异氟烷麻醉剂更适合用于MCAO模型的制备。2、健侧针刺、患侧针刺、双侧针刺均可有效改善MCAO模型大鼠运功功能和减小脑梗死面积及脑水肿程度。3、健侧针刺、患侧针刺针刺干预7d后MCAO模型大鼠患肢运动功能的改善可能与患侧皮层中GAP-43蛋白表达量的升高有关。4、针刺干预7d后MCAO模型大鼠患肢运动功能的改善可能与健侧皮层PI3K-Akt信号通路有关。

关键词： MCAO模型巨刺法健侧脑运动功能梗死体积 gabaarα1 GAP-43

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成年大鼠视皮层17区突触可塑性的探讨

成年大鼠视皮层17区突触可塑性的探讨

作者：代春华青岛大学

学位级别：硕士

目的：研究单眼形觉剥夺后反缝对成年期弱视大鼠视皮层17区突触可塑性的影响。探讨成年期视皮层突触可塑性的机制。方法：将Wistar大鼠分为正常组、弱视组和反缝组。分别饲养至相应时间点时取左侧大脑视皮层17区。应用免疫组织化学法检... 详细信息

目的：研究单眼形觉剥夺后反缝对成年期弱视大鼠视皮层17区突触可塑性的影响。探讨成年期视皮层突触可塑性的机制。方法：将Wistar大鼠分为正常组、弱视组和反缝组。分别饲养至相应时间点时取左侧大脑视皮层17区。应用免疫组织化学法检测突触后gabaar a 1和GluR2亚基的表达水平。透射电子显微镜对视皮层17区第Ⅳ层连续摄取3,000倍照片,局部定位放大后进行突触计数。随机摄取30,000倍照片,使用Image Proplus 6.0分析软件对突触间隙宽度、突触后致密物厚度、突触界面曲率进行测量。所有实验数据采用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理。结果：(1)免疫组织化学结果：P11w时,弱视组和反缝组大鼠视皮层17区gabaaral的表达较正常组明显减少(P＜0.001),弱视组较反缝组也明显减少(P＜0.001)。P13w时,弱视组较反缝组及正常组明显减少(P＜0.001),而反缝组与正常组比较无明显差别(P＝0.496),两个时间点弱视组GluR2的表达较反缝组和正常组均明显增强(P1),反缝组较正常组均明显较少(P＜0.001)。(2)突触超微形态结构变化：P11w与P13w时,3组大鼠视皮层突触数量的差异均有统计学意义,弱视组突触数量较反缝组和正常组明显减少,反缝组较正常组也减少(P＜0.01)。弱视组与反缝组及正常组比较,P11w和P13w时都是突触间隙明显增宽,突触后致密物明显增厚,突触界面曲率明显变小(P＜0.01)。反缝组与正常组比较,P11w时,突触间隙增宽,突触后致密物增厚,突触界面曲率变小(P13w时,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：视觉系统的可塑性不仅存在于视觉发育的关键期以内,在关键期之后仍然存在。反缝干预能从结构和功能两方面来使成年大鼠视皮层的可塑性得以改善和恢复。

关键词：弱视视皮层突触可塑性 gabaarα1 GluR2

中链三酰甘油对脑力疲劳大鼠抗氧化和认知能力的影响

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中链三酰甘油对脑力疲劳大鼠抗氧化和认知能力的影响

作者：马双双第二军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景人体的活动大体上分为体力和脑力劳动2种,都是在中枢神经系统(由脑和脊髓组成)的统一协调下完成的。现代社会中,虽然大多数人的体力劳动强度有所减轻,但脑力劳动强度却明显加重,再加上生活节奏加快和社会竞争等压力的增大... 详细信息

一、研究背景人体的活动大体上分为体力和脑力劳动2种,都是在中枢神经系统(由脑和脊髓组成)的统一协调下完成的。现代社会中,虽然大多数人的体力劳动强度有所减轻,但脑力劳动强度却明显加重,再加上生活节奏加快和社会竞争等压力的增大,最终导致脑力疲劳的人群不断扩大,脑力疲劳程度也不断加重。因此,脑力疲劳以及由此发展而来的慢性疲劳综合征,已经严重威胁着普通人群的身心健康。同时,新形势下武警部队执勤、处突、反恐任务增强,部队训练任务日趋繁重,训练项目增多,强度也不断加大,由军事训练引发的运动性疲劳和精神性疲劳在基层部队时常可见。因此,研究脑力疲劳发生机制及其预防策略具有重要的现实意义。目前国内外对疲劳的研究主要在对天然动植物、天然动植物提取物,还有氨基酸、维生素、辅酶Q咖啡因等,仅有数篇关于对中链脂肪酸能提高运动能力的报道。中链脂肪酸(MCFA)是由6～12个碳原子构成的,是自然界中含量比较少的脂肪酸,来源于棕榈油、椰子油、乳类及其制品等,主要有辛酸(C8H16O2)和癸酸(C10H20O2)。MCFA在食物中以三酰甘油的形式存在,即中链三酰甘油(MCT)。中链三酰甘油消化吸收及利用途径特殊,能够被机体迅速的吸收利用,快速提供能量。查阅文献可知,中链三酰甘油能够降低血清三酰甘油和低密度脂蛋白;改善糖尿病人的胰岛素抵抗;减少体脂肪积累,预防肥胖;提高免疫功能,防止细菌感染等。也有人体实验证明,运动员食用中链脂肪酸,可以提高其运动能力。本实验采用动物实验方法,通过在对大鼠饲料中添加中链三酰甘油并对大鼠进行睡眠剥夺来造成脑力疲劳模型,观察研究中链三酰甘油对大鼠各项血脂生理指标、抗氧化能力和学习认知能力的影响,并推测其作用机制,为中链三酰甘油是否具有缓解或加重脑力疲劳作用提供实验依据和理论支持。二、研究内容 (一)目的 1、观察评价中链三酰甘油对脑力疲劳是否具有缓解或加重作用;2、推测中链三酰甘油对脑力疲劳作用的机制;3、为中链三酰甘油与脑力疲劳间关系提供科学依据。 (二)方法 1、实验动物和分组健康雄性Sprague-Dawley大鼠35只,体重(150-160)g,由第二军医大学实验动物中心购买。在实验开始前,先行适应性喂养1周。1w后,将35只大鼠进行迷宫测试,淘汰迟钝者,留下30只,随机分成5组,每组6只。分组情况如下：空白正常睡眠组(NC组)、空白睡眠剥夺组(SD组)、低剂量MCT组(LD组)、中剂量MCT组(MD组)和高剂量MCT组(HD组)。 2、实验方法用MCT粉剂订制特定的饲料,用含低、中、高剂量MCT的饲料分别喂养LD组、MD组和HD组的大鼠,NC组和SD组大鼠则用不含MCT的原配方饲料喂养。每只大鼠每天限定饲料15g,饮水不限量。持续喂养4w,每天观察饲料食用情况,每周称量大鼠体重。每周对各组大鼠进行3次Y电迷宫训练,每只每次训练20次。4w后,大鼠禁食12h,麻醉并眼眶取血,血清在4℃3000r/min离心20min。正常饲养3天后,对大鼠进行连续72h睡眠剥夺。睡眠剥夺后,进行电迷宫测试,观察各组大鼠的记忆认知能力;迷宫测试后,立即将大鼠麻醉,采集组织样本。 3、样本采集迷宫测试后,立即将大鼠麻醉,迅速断头,快速在冰袋上分离脑干、海马,在冰冷的生理盐水中冲净血渍,放入冻存管后投入液氮罐中暂时保存。取大鼠肝脏组织,同样冲净血渍后放入冻存管投入液氮罐中保存。所有组织取完时,将液氮中冻存管转移至-75℃冰箱中保存待测。 4、指标测定 (1)血生化指标检测用日立全自动生化仪测定总三酰甘油(total triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesferol, HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholestorol, LDL-C)含量。 (2)肝脏抗氧化指标检测按试剂盒操作方法检测GSH-Px、SOD活性和MDA含量。 (3)脑干神经递质检测按3-CAT试剂盒说明测定去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、肾上腺素(adrenalin, AD)和多巴胺(dopamine, DA)的含量;按5-羟色胺试剂盒说明检测5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量。 (4)海马部分基因表达采用实时荧光定量PCR技术,检测NMDA受体亚单位NR1/NR2AmRNA以及GABA受体gabaarα1mRNA的表达水平。 5、数据处理所有数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS18.0统计软件进行方差分析,P1、MCT可以延缓大鼠体重增长(P1),升高HDL/L

关键词：中链三酰甘油睡眠剥夺单胺类神经递质抗氧化能力 NMDA NR1/NR2A gabaarα1 认知能力

鞘内注射氧化槐定碱的镇痛作用及对中枢GABAA受体的影响

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鞘内注射氧化槐定碱的镇痛作用及对中枢GABAA受体的影响

作者：杨光宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的观察鞘内注射(intrathecal injection, ith)氧化槐定碱(oxysophoridine, OSR)的镇痛作用,分析γ-氨基丁酸受体(γ-aminobutyric acid receptor, GABA受体)激动剂和拮抗剂对其镇痛作用的影响,探讨OSR对中枢GABARα1受体基因和蛋白表达变化的影响并分析OSR镇痛作用的分子机制。方法1.行为药理学方法①采用小鼠温浴致痛法以热甩尾潜伏期为指标观察ith和iv OSR的镇痛作用;②采用GABA受体激动剂和拮抗剂观察其对OSR在小鼠温浴热甩尾反应中痛阈变化的影响,分析GABA受体在OSR镇痛中的作用。 2.实时定量RT-PCR方法检测OSR对福尔马林致痛小鼠脊髓背角和脑GABARα1受体mRNA表达的影响,分析OSR镇痛作用与GABARα1基因表达量的关系。 *** blot方法检测OSR对福尔马林致痛小鼠脊髓背角和脑GABARα1蛋白含量的影响,分析脊髓背角和脑GABARα1蛋白表达量对OSR镇痛作用的影响。 4.免疫组织化学方法(SABC法)测定OSR对小鼠脊髓背角GABARα1免疫阳性细胞数目的影响,分析OSR镇痛作用与脊髓背角GABARα1免疫阳性细胞变化的关系。结果1.鞘内注射OSR的镇痛作用OSR(12.5, 6.25 mg/kg, ith)能明显延长小鼠温浴热甩尾在10、20、30、45、60 min的潜伏期(P1),最大痛阈提高率可达68.45%。 2. GABAA受体激动剂和拮抗剂对OSR镇痛作用的影响GABA (1.6 mg/kg, icv)和蝇蕈醇(muscimol, MUS, 0.1μg/mouse, icv)可明显提高阈下镇痛剂量OSR (3.13 mg/kg, ith)在小鼠温浴热甩尾反应中的痛阈(P1);印防及毒素(picrotoxin, PTX, 2 mg/kg, ip)及荷包牡丹碱(bicuculine, BIC, 0.2μg/mouse, ip)均可显著对抗OSR(6.25 mg/kg, ith)的镇痛作用(P1);提示GABAA受体参与了OSR的镇痛作用。 3. OSR对小鼠脊髓背角GABARα1免疫阳性细胞数目的影响OSR(12.5 mg/kg, ith)可使小鼠脊髓背角GABARα1免疫阳性细胞表达显著增多(P1),平均灰度值显著降低(P1);提示OSR的镇痛作用与调节脊髓背角GABARα1免疫阳性细胞表达有关。 4. OSR对福尔马林致痛小鼠脊髓背角和脑GABARα1 mRNA及蛋白表达的影响OSR(12.5 mg/kg, ith)可明显增加福尔马林致痛小鼠脊髓背角和脑GABARα1 mRNA和蛋白的表达(P1);OSR(500 mg/kg, iv)也可引起类似改变,提示脊髓背角和脑GABARα1的基因和蛋白表达变化是参与OSR镇痛作用的分子机制。结论OSR具有明显镇痛作用,GABAA受体参与了OSR的镇痛机制。OSR镇痛作用的分子机制与脊髓背角和脑GABARα1受体上调有关。

关键词：氧化槐定碱镇痛鞘内注射 GABA gabaarα1

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胡椒碱对癫痫模型鼠海马氨基酸受体的影响

中国热带医学 2014年第6期14卷 743-745页

作者：杨业勋宜昌市中心人民医院三峡坝区分院湖北宜昌443133

目的探讨胡椒碱对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸受体ξ1(N-methyl-D-aspartate recepterξ1,NMDAξ1)和γ-氨基丁酸受体αl(γ-aminobutyricacid-A reeepter,gabaarαl)的影响。方法24只成年SD大鼠随机分为对照组、模型组和胡椒碱组,每组8... 详细信息

目的探讨胡椒碱对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸受体ξ1(N-methyl-D-aspartate recepterξ1,NMDAξ1)和γ-氨基丁酸受体αl(γ-aminobutyricacid-A reeepter,gabaarαl)的影响。方法24只成年SD大鼠随机分为对照组、模型组和胡椒碱组,每组8只。模型组和胡椒碱组大鼠腹腔注射戊四氮60mg/kg,诱导癫痫发作。胡椒碱组于注射戊四氮之前1h经腹腔注射胡椒碱60mg,并观察1h。然后处死大鼠取脑,应用SP法检测大鼠海马NMDAξ1和gabaarαl的变化。结果胡椒碱组海马NMDAξ1阳性细胞数较模型组减少,平均光密度值降低(P1),但较正常对照组增多(Pgabaarαl阳性细胞数较模型组增多,平均光密度值增强(P1),但较正常对照组降低(P1的表达,促进gabaarαl的表达,在癫痫发作中发挥保护作用。

关键词：癫痫胡椒碱戊四氮 NMDAξ1 gabaarα1