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20(S)-ginsenoside Rh1 alleviates T2DM induced liver injury via the Akt/FOXO1 pathway

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Chinese Journal of Natural Medicines 2022年第9期20卷 669-678页

作者： SU Wen-Ya FAN Mei-Ling LI Ying HU Jun-Nan CAI En-Bo ZHU Hong-Yan SONg Ming-Jie LI Wei College of Chinese Medicinal Materials Jilin Agricultural UniversityChangchun 130118China Maternity Diagnosis&Treatment Center the Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese MedicineChangchun 130021China National&Local Joint Engineering Research Center for ginseng Breeding and Development Changchun 130118China

Diabetes-associated liver injury becomes a dominant hepatopathy,leading to hepatic failure *** current study was designed to evaluate the ameliorative effects of ginsenoside Rh1(g-Rh1)on liver injury induced by T2DM.A T2DM model was established using C57BL/6 mice through feeding with HFD followed by injection with streptozotocin at 100 mg·kg^(−1).Then the mice were continuously administered with g-Rh1(5 and 10 mg·kg^(−1)),to explore the protective effects of g-Rh1 against liver *** showed that g-Rh1 exerted significant effects on maintaining the levels of FBg and insulin,and ameliorated the increased levels of Tg,TC and LDL-C induced by ***,apoptosis in liver tissue was relieved by g-Rh1,according to histological ***,in diabetic mice,it was observed that not only the increased secretion of g6pase and PEPCK in the gluconeogenesis pathway,but also inflammatory factors including NF-κB and NLRP3 were suppressed by g-Rh1 ***,the underlying mechanisms by which g-Rh1 exhibited ameliorative effects was associated with its capacity to inhibit the activation of the Akt/FoxO1 signaling pathway induced by *** together,our preliminary study demonstrated the potential mechnism of g-Rh1 in protecting the liver against T2DM-induced damage.

关键词： g-Rh1 Liver injury gluconeogenesis PEPCK g6pase Akt/FOXO1 Inflammation

地塞米松对肝癌微循环及能量代谢影响机制的研究

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药物生物技术 2024年第1期31卷 53-58页

作者：许英刘英杨晓霞山东大学第二医院药学部药品供应科静配中心山东济南250033

探讨地塞米松对肝癌微循环血管生成及能量代谢的影响。通过绿色荧光蛋白gFP标记肝癌Hepg2细胞,原位移植法建立原位肝模型,荧光成像系统观察地塞米松对裸鼠肿瘤负荷情况;建立金黄地鼠颊囊肝癌模型,微循环活体观测显微镜记录给药周期内模... 详细信息

探讨地塞米松对肝癌微循环血管生成及能量代谢的影响。通过绿色荧光蛋白gFP标记肝癌Hepg2细胞,原位移植法建立原位肝模型,荧光成像系统观察地塞米松对裸鼠肿瘤负荷情况;建立金黄地鼠颊囊肝癌模型,微循环活体观测显微镜记录给药周期内模型鼠微循环生长状态及肿瘤生长情况;免疫印迹试验检测小鼠肝癌H22细胞不同给药浓度下糖异生关链酶PEPCK、g6pase蛋白的表达情况;建立小鼠肝癌移植瘤模型,WB法检测PEPCK、g6pase表达情况,双抗酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEgF)表达情况。结果显示:1.裸鼠原位肝癌模型对照组小鼠体重增长了27.3%,肝癌面积增长了6.7倍;而地塞米松给药组小鼠体重只增长了0.3%,肝癌面积仅增长了4.7倍。2.金黄地鼠颊囊肝癌模型新生瘤体明显,血管明显比正常组多;地塞米松治疗组血管增长缓慢,7 d仅增长4.2%,其肿瘤体积也明显变小。3.不同浓度地塞米松处理肝癌H22细胞后,PEPCK、g6pase的表达量随给药浓度增加逐渐升高。4.地塞米松小鼠肝癌移植瘤,PEPCK、g6pase随给药浓度的增加表达量逐渐升高,蛋白表达量超过正常组的50%;与对照组相比,实验组VEgF的表达量明显降低,与给药浓度成反比。地塞米松对肝癌的生长具有显著的抑制功能,推测其调控机理可能是,一方面通过促进肝癌细胞内的糖异生过程,抑制其能量代谢;另一方面通过抑制血管内皮生长因子的表达,减少血管生成和能量供应;两条调控通路均能达到抑制肿瘤生长的目的。

关键词：地塞米松糖异生血管生成肿瘤抑制肝癌 PEPCK g6pase

黄芪-葛根药对通过PI3K/Akt/FoxO1通路调控糖异生作用治疗糖尿病大鼠作用机制

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中华中医药学刊 2022年第8期40卷 32-38,I0014页

作者：魏爽李冀付强韩东卫郝峰黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040 江西中医药大学江西南昌330000

目的观察黄芪-葛根(芪葛)药对对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1)通路及磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)、限速酶葡萄糖6-磷酸酶(g6pase)蛋白表达的影响以探讨其治疗T2DM作用机... 详细信息

目的观察黄芪-葛根(芪葛)药对对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1)通路及磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)、限速酶葡萄糖6-磷酸酶(g6pase)蛋白表达的影响以探讨其治疗T2DM作用机制。方法采用高脂饲料联合一次性小剂量尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)方法建立T2DM大鼠模型;成模后除正常组10只外,设芪葛低、中、高剂量组,阳性药组及模型组5组,将成模大鼠随机平均分入。各组大鼠连续药物干预4周后,麻醉,取材后对大鼠血清FBg、FINS、肝功、血脂及糖原水平进行检测;苏木素-伊红法染色观察肝脏组织病理形态学改变;蛋白免疫印迹法检测肝脏组织PI3K/Akt/FoxO1信号通路中相关蛋白及g6pase、PEPCK蛋白水平。结果相比于模型组,芪葛高、中剂量组FBg及FINS水平均降低,糖原水平显著升高(Pg)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及低密度脂蛋白(LDL-C)均显著降低(P0.05);芪葛高、低剂量组TC水平降低(P0.05)。HE染色结果发现,与模型组相比,各给药组大鼠肝脏组织体积及色泽均有明显改善,虽仍有不同程度的肝组织结构紊乱、肝细胞脂肪变性、肝细胞肿胀、胞浆内可存在大小、数量均不等的脂滴空泡,但显著优于模型组大鼠肝脏组织状态。与模型组相比,芪葛高剂量组FoxO1、g6pase及PEPCK蛋白表达降低,Akt、PI3K、p-Akt、p-PI3K表达升高(Pg6pase、PEPCK的表达,抑制糖异生作用,调节糖脂代谢,修复肝损伤,从而发挥治疗T2DM作用的。

关键词： 2型糖尿病 PI3K/Akt/FoxO1通路黄芪-葛根药对糖异生 PEPCK g6pase

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基于组成型雄甾烷受体（CAR）降糖通路的中药来源激动剂及其作用机制研究

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基于组成型雄甾烷受体（CAR）降糖通路的中药来源激动剂及其作用...

作者：黄敏敏浙江大学

学位级别：硕士

目前,对于糖脂代谢紊乱治疗还没有良好的靶点。寻找有降血糖、降血脂双重作用的治疗靶点,能帮助开发疗效好且副作用低的糖脂代谢紊乱治疗药物。已有研究报道组成型雄甾烷受体(CAR)能同时调节糖脂代谢,可能成为糖脂代谢紊乱继发疾病新的... 详细信息

目前,对于糖脂代谢紊乱治疗还没有良好的靶点。寻找有降血糖、降血脂双重作用的治疗靶点,能帮助开发疗效好且副作用低的糖脂代谢紊乱治疗药物。已有研究报道组成型雄甾烷受体(CAR)能同时调节糖脂代谢,可能成为糖脂代谢紊乱继发疾病新的有效治疗靶点,是目前研究的热点,但其机制尚不明确。一直以来,人们试图从中药及天然产物中寻找能同时降糖降脂的药物。的确也发现了一些具有该作用的中药或天然产物,如肉桂、黄连素、马齿苋、千里光等。然而,大部分的研究往往只注重于药效研究层面,并没有对其作用机制进行深入研究,这极大地限制了这些药物的进一步开发。因此,在中草药中筛选能通过核受体CAR介导调节糖脂代谢的活性成分,并深入探究其相关机制具有重要意义。本课题首先应用基于hCAR3的CYP2B6报告基因体外筛选体系,筛选获得能够激活hCAR的中药提取物和中药活性成分吴茱萸次碱和吴茱萸碱。进一步利用real-time RCR和染色质免疫共沉淀(ChIP)技术验证吴茱萸次碱和吴茱萸碱对hCAR都具有显著的激活作用。而后从这两种生物碱与hCAR的相关性入手,探究其降糖降脂功效,并深入阐明其相关机制,为其深入开发提供理论依据。1.报告基因模型筛选中草药中hCAR的激动剂选取14种具降糖或降脂作用的中草药进行粗提取得到醇提物和水提物,MTT实验测定各提取物在Hepg2细胞上的毒性,为后续实验提供合适的浓度选择。采用实验室构建的hCAR3/hPXR介导的CYP2B6/CYP3A4报告基因模型,以hCAR和hPXR的经典激动剂CITCO和利福平为阳性对照,初步筛选得到能够激活hCAR或hPXR的中草药提取物。其中大部分的提取物都能激活hPXR,且醇提物的激活效应普遍大于水提物。仅卫矛、罗布麻、木蝴蝶的醇提物和茵陈、柴胡的水提物对hCAR有较弱的激活作用。其次,利用hCAR3介导的CYP2B6报告基因模型考察了这5种中草药的部分主要活性成分及其他中药的活性成分对hCAR的激活作用。结果显示,芦丁、雷公藤碱、芹菜素、柴胡皂苷A、黄豆苷元、冬凌草素、岩白菜素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱,这9种中药活性成分可能对hCAR有潜在的激活效应。为了更进一步研究药物浓度对激活效应的影响,本文考察了不同浓度的中药活性成分对hCAR的激活效应。结果显示这些中药活性成分对hCAR的激活效应呈现一定的浓度依赖性。2.确证中药活性成分对hCAR的激活作用为确证中药活性成分与hCAR激活的相关性,首先采用real-time PCR在LS174T细胞模型上检测给药后CYP2B6的mRNA水平变化。结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱对CYP2B6的基因诱导倍数显著高于阳性对照CITCO及其他几种中药活性成分,表明具有很强的诱导作用,与报告基因试验结果一致。并且课题组在Hepg2细胞模型上进行real-time PCR 和 western blotting实验,结果显示吴茱萸碱和吴茱萸次碱在mRNA和蛋白水平均能明显诱导CYP2B6的表达;且给予hCAR的经典抑制剂能抑制其对CYP2B6的诱导。此外,在mCAR介导的报告基因模型中初步判断吴茱萸次碱也是小鼠CAR的激动剂,而吴茱萸碱则不是。最后,利用染色质免疫共沉淀技术,给予吴茱萸碱和吴茱萸次碱处理后,CAR与CYP2B6启动子区域特定位点的结合有明显的增强,这说明了吴茱萸碱和吴茱萸次碱能激活hCAR从而上调CYP2B6的表达。3.吴茱萸次碱、吴茱萸碱降糖作用与hCAR相关性及其相关机制研究已有文献报道,吴茱萸次碱具有显著的降血糖、血脂和胰岛素的作用,但是相关机制研究却鲜有报道。本课题主要从降糖方面进行深入研究,探究吴茱萸次碱和吴茱萸碱的降糖作用是否通过CAR介导,并探讨相关机制。首先本文构建了CAR调控糖代谢途径中相关转录因子的表达质粒pcDNA3.1 (+)-FOXO1、pcDNA3.1 (+)-PgClα、pcDNA3.1(+)-HNF4a,以及启动子区域含IRS和DRl位点的糖异生关键酶基因的报告质粒pgL3-hPCK-Luc、pgL3-g6pase-Luc。通过将报告基因质粒和hCAR3、FOXO1、PgClα、HNF4 α的表达质粒分别瞬时共转染Hepg2细胞,成功建立了hCAR3-FOXO1/hCAR3-PgClα-HNF4α介导的PEPCK/g6pase的报告基因模型,并进行了验证。利用该报告基因模型探究了CAR与FOXO1、PgClα和HNF4a对PEPCK/g6pase启动子的影响,结果表明Hepg2细胞经吴茱萸次碱和吴茱萸碱处理后,在转染FOXO1或PgClα、HNF4α表达质粒后能抑制PEPCK和g6pase启动子活性,并且在共转染hCAR3表达质粒后,抑制作用更为显著。基因水平利用real-time PCR检测了经吴茱萸次碱和吴茱萸碱处理后]EPCK

关键词： CAR 中药活性成分激活作用转录因子 PEPCK g6pase

Neuregulin 4调控小鼠肝糖异生的机制研究

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Neuregulin 4调控小鼠肝糖异生的机制研究

作者：张琳琳上海交通大学

学位级别：硕士

研究目的异常增加的肝糖异生是2型糖尿病发生发展过程中重要的病理生理改变之一,然而其调控机制尚未完全阐明。本研究拟探讨神经调节蛋白4(Neuregulin 4,Nrg4)对小鼠肝糖异生的调控机制。方法1.对c AMP处理的小鼠肝原代细胞进行基因芯... 详细信息

研究目的异常增加的肝糖异生是2型糖尿病发生发展过程中重要的病理生理改变之一,然而其调控机制尚未完全阐明。本研究拟探讨神经调节蛋白4(Neuregulin 4,Nrg4)对小鼠肝糖异生的调控机制。方法1.对c AMP处理的小鼠肝原代细胞进行基因芯片检测,分析差异表达基因的特点。2.小鼠肝原代细胞转染Nrg4过表达或干扰腺病毒,观察糖异生水平和糖异生关键酶基因表达的变化。3.检测不同营养状况下的C57BL/6小鼠以及肥胖模型ob/ob小鼠、糖尿病模型db/db小鼠和goto-Kakisaki(gK)大鼠肝脏Nrg4的表达水平。4.C57BL/6及db/db小鼠尾静脉注射Nrg4干扰腺病毒后7天,进行丙酮酸耐量试验,并检测肝脏Nrg4及糖异生关键酶基因的表达水平。主要结果1.基因芯片结果显示,c AMP处理小鼠肝原代细胞后Nrg4的表达显著上升,同时伴随糖异生关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(g6pase)表达的升高。2.小鼠肝原代细胞中Nrg4的干扰或过表达可以下调或上调PEPCK和g6pase的表达及糖异生水平。3.饥饿可诱导C57BL/6小鼠肝脏Nrg4表达的上升,同时在肥胖模型ob/ob小鼠、糖尿病模型db/db小鼠以及gK大鼠肝脏中,Nrg4的表达水平显著升高。4.尾静脉注射Nrg4干扰腺病毒后,C57BL/6小鼠及db/db小鼠肝脏Nrg4表达下降,肝糖异生降低,同时伴随PEPCK、g6pase及PgC-1α的表达下调。结论Nrg4对小鼠肝糖异生的调控具有重要作用,可能会成为2型糖尿病的治疗靶点。

关键词：神经调节蛋白4 糖异生 PEPCK g6pase 2型糖尿病

氧化苦参碱对抗2型糖尿病大鼠肝糖异生的作用及机制研究

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氧化苦参碱对抗2型糖尿病大鼠肝糖异生的作用及机制研究

作者：朱昱娴湖南师范大学

学位级别：硕士

背景:2型糖尿病是临床常见的慢性代谢性疾病,主要表现为高血糖和胰岛素抵抗。肝糖异生作为胰岛素抵抗的结果,是高血糖的重要原因,抑制肝糖异生是2型糖尿病(T2DM)治疗的重要手段。AKT信号通路在胰岛素抵抗中作用关键,是2型糖尿病的重要... 详细信息

背景:2型糖尿病是临床常见的慢性代谢性疾病,主要表现为高血糖和胰岛素抵抗。肝糖异生作为胰岛素抵抗的结果,是高血糖的重要原因,抑制肝糖异生是2型糖尿病(T2DM)治疗的重要手段。AKT信号通路在胰岛素抵抗中作用关键,是2型糖尿病的重要标志。PEPCK和g6pase是肝糖异生中的关键限速酶。AKT/PEPCK/g6pase轴在肝糖异生中作用关键,有望成为2型糖尿病治疗和药物研发的靶点。以AKT/PEPCK/g6pase轴为靶点,从传统中药中筛选具有对抗肝糖异生的药物或是促进药物研发的重要手段。氧化苦参碱广泛用于肥胖相关疾病的辅助用药,是潜在的治疗肝糖异生的药物。然而氧化苦参碱是否具有对抗糖异生的作用及机制如何,目前鲜有研究报道,有待进一步研究。目的:本研究旨在探讨AKT/PEPCK/g6pase轴在肝糖异生中的作用及探讨氧化苦参碱对抗肝糖异生的作用及具体机制,为2型糖尿病的治疗提供新的治疗靶点和救治药物。方法:动物实验:利用高脂饮食联合链脲佐菌素诱导构建2型糖尿病大鼠以模拟2型糖尿病的发生。实验分为对照组、T2DM模型组、氧化苦参碱低剂量干预组(10mg/kg体重)、氧化苦参碱高剂量干预组(20mg/kg体重)、二甲双胍干预组(250mg/kg体重)。通过检测大鼠的空腹血糖、糖耐量、胰岛素敏感性、体重、肝脏重量、肝指数及肝组织结构变化以评估糖尿病的发生情况及氧化苦参碱的保护作用;Real-time PCR和Western-blotting检测AKT的磷酸化水平、PEPCK和g6pase的m RNA和蛋白表达水平,分析上述分子在2型糖尿病中的表达变化及氧化苦参碱对其的表达调控。细胞实验:高浓度葡萄糖(55m M)处理Hepg2细胞模拟2型糖尿病的发生。实验分为对照组、高糖处理组(55m M)、氧化苦参碱低剂量干预组(10M)、氧化苦参碱高剂量干预组(10M)、氧化苦参碱联合AKT抑制剂(MK-2206)干预组及二甲双胍干预组(10M)。通过检测Hepg2细胞的葡萄糖生成及2-NDBg的摄取以评估Hepg2细胞糖异生情况及氧化苦参碱的保护作用;Real-time PCR和Western-blotting检测AKT的磷酸化水平、PEPCK和g6pase的m RNA和蛋白表达水平,分析上述分子的表达变化及氧化苦参碱对其的表达调控。结果:(1)与对照组6.1m M的空腹血糖相比,2型糖尿病大鼠的空腹血糖高达16.9m M,而氧化苦参碱能够呈剂量性的降低2型糖尿病大鼠的空腹血糖。(2)与对照组相比,2型糖尿病大鼠的糖耐量明显下降,K值显著降低(Pg6pase的表达水平显著上调(Pg6pase的表达(Pg2细胞对2-NBDg的摄取明显减少(Pg2细胞对2-NBDg的摄取,减少葡萄糖的生成(P6)与对照组相比,高糖处理的Hepg2细胞中AKT的磷酸化显著下降(Pg6pase的表达水平显著上调(Pg6pase的表达(Pg2细胞相比,氧化苦参碱干预可以明显增加细胞中AKT的磷酸化、降低PEPCK和g6pase的表达水平,而AKT抑制剂MK-2206可以明显抑制氧化苦参碱的作用。结论:AKT/PEPCK/g6pase在2型糖尿病肝糖异生中具有十分关键的作用;氧化苦参碱抑制肝糖异生的作用涉及PEPCK和g6pase的表达调控,其作用机制依赖于AKT磷酸化调节。

关键词： 2型糖尿病肝糖异生 AKT PEPCK g6pase 氧化苦参碱

山奈酚衍生物体外调节糖脂代谢作用及机制研究

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山奈酚衍生物体外调节糖脂代谢作用及机制研究

作者：姜悦天津医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验室前期研究发现新型委陵菜黄酮衍生物Fla-CN具有显著地抗肥胖和抗糖尿病的作用。课题组以Fla-CN为先导化合物衍生合成了一系列黄酮衍生物,本文采用胰岛素抵抗肝Hepg2细胞模型,对Fla-CN衍生物中的山奈酚系列化合物,进行抗糖... 详细信息

目的:本实验室前期研究发现新型委陵菜黄酮衍生物Fla-CN具有显著地抗肥胖和抗糖尿病的作用。课题组以Fla-CN为先导化合物衍生合成了一系列黄酮衍生物,本文采用胰岛素抵抗肝Hepg2细胞模型,对Fla-CN衍生物中的山奈酚系列化合物,进行抗糖尿病活性筛选,从中筛选出具有促进胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗、改善胰岛素抵抗作用的候选化合物。进一步以分化成熟的3T3-L1脂肪细胞和人肝Hepg2细胞为研究对象,考察候选化合物体外调节糖、脂代谢的作用,并初步探讨其分子作用机制,为后续合成和发现新药提供实验依据。方法:1.采用高糖高胰岛素诱导Hepg2细胞,建立胰岛素抵抗Hepg2细胞模型,给予不同浓度的山奈酚衍生物,上清液经葡萄糖检测试剂盒测定葡萄糖消耗量,考察各衍生物对胰岛素抵抗Hepg2细胞葡萄糖消耗的影响;2.以Hepg2细胞为研究对象,给予不同浓度的山奈酚衍生物干预后,采用硫酸-蒽酮比色法检测各组细胞内糖原含量,乳酸测试盒检测糖酵解途径终产物乳酸含量,荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDg)检测Hepg2细胞葡萄糖摄取的情况,葡萄糖检测试剂盒分析糖异生过程中葡萄糖生成量,考察各衍生物对Hepg2细胞糖原合成、糖酵解、糖摄取和糖异生的影响;3.以分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,给予不同浓度的山奈酚衍生物干预,以试剂盒检测细胞内甘油三酯,细胞外甘油以及游离脂肪酸的含量,考察各衍生物对脂代谢的影响;4.采用Western blot检测山奈酚衍生物对Hepg2细胞和分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化水平的影响,检测山奈酚衍生物对Hepg2细胞中糖异生关键酶葡萄糖6磷酸激酶(g6pase)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)表达水平的影响。结果:1.利用胰岛素抵抗Hepg2细胞模型进行山奈酚衍生物活性筛选,结果表明各山奈酚衍生物均可不同程度地促进葡萄糖消耗,进而改善胰岛素抵抗,衍生物C69,C11,C14,C21,C26,C27,C34,C3739,C4146具有较强的促进胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗的作用,其中C7,C14,C26,C27,C41,C42,C43,C45改善胰岛素抵抗的活性最强,EC值在0.5.0nM之间。***-CN、C7、C42、C45与Hepg2细胞共同孵育24h后,在糖原合成实验中,Fla-CN,C42能够剂量依存性地增加Hepg2细胞内糖原的含量;而C7低浓度时升高Hepg2细胞内糖原含量,随着给药浓度升高,其作用强度降低,12.5μM浓度时,抑制糖原合成。糖酵解实验中,Fla-CN,C7,C42,C45对Hepg2细胞内乳酸含量无显著性影响。在糖异生试验中,Fla-CN,C7能够剂量依存性地抑制葡萄糖的生成;C42,C45对糖异生过程无显著性影响。在糖摄取实验中,Fla-CN,C7,C42,C45均能剂量依存性地增加Hepg2细胞的葡萄糖摄取。3.分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,加入不同浓度的C7,C42,C45,与正常对照组相比,一定浓度范围的C7,C42,C45具有显著促进脂肪细胞脂解的作用,其中C45能够剂量依存性地降低脂肪细胞中甘油三酯的含量,增加细胞外甘油和游离脂肪酸的含量,与脂解作用呈正相关;而低浓度C7,C42能够明显降低脂肪细胞中甘油三酯的含量,增加细胞外甘油和游离脂肪酸的含量,高浓度C7,C42的脂解作用反而受到抑制,提示其脂解作用与其作用浓度在一定范围内呈负相关。4.C7能够剂量依存性地上调Hepg2细胞和3T3-L1成熟脂肪细胞中AMPK以及下游ACC的磷酸化水平。此外,C7能够剂量依存性地下调Hepg2细胞中糖异生相关的g6pase和PEPCK的蛋白表达。结论:采用胰岛素抵抗Hepg2细胞模型筛选山奈酚衍生物,发现C7,C14,C26,C27,C41,C42,C43,C45有较强的抗糖尿病活性,EC值达到nM级别。其中强活性的化合物C7能够激活Hepg2细胞中AMPK,上调ACC的磷酸化水平,同时能够下调糖异生相关的g6pase和PEPCK的蛋白表达,进而发挥调节糖代谢的作用;另外,C7通过激活AMPK促进3T3-L1脂肪细胞的脂肪水解,在0.1-12.5μM范围内激活AMPK,但是与浓度呈负相关,高浓度C7的作用反而减弱,需要进一步深入研究。

关键词：山奈酚衍生物胰岛素抵抗 AMPK ACC g6pase PEPCK

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AMPK与肝脏糖异生研究进展

中国现代应用药学 2017年第7期34卷 1062-1067页

作者：陈金成张吟福建医科大学附属第二医院药学部临床药学室福建泉州362000 福建医科大学药学院福州350108

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP activated protein kinase,AMPK)是一种广泛参与多种代谢调节的激酶,是主要的细胞"能量感受器"。AMPK通过α亚基的Thr172发生磷酸化而激活,通过抑制脂质合成相关转录因子以及肝脏糖异生来控制脂质合成以及血糖... 详细信息

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP activated protein kinase,AMPK)是一种广泛参与多种代谢调节的激酶,是主要的细胞"能量感受器"。AMPK通过α亚基的Thr172发生磷酸化而激活,通过抑制脂质合成相关转录因子以及肝脏糖异生来控制脂质合成以及血糖稳定。肝脏糖异生的调控过程中,通过激素及转录因子如Fox O1、CREB、TORC2、HNF-4α、PgC-1α等的参与,最后将信号传达至糖异生的2个关键性限速酶基因PECK与g6pase,起到调控作用。激活的AMPK能抑制糖异生转录因子及相关关键酶的有效表达,阻止肝脏发生糖异生,进而下降血糖浓度。本文旨在讨论与总结AMPK在肝脏糖脂代谢中的作用,重点分析AMPK与肝脏糖异生信号通路转录因子之间的联系。

关键词：腺苷酸活化蛋白激酶肝脏糖脂代谢糖异生 PEPCK g6pase 转录调节因子

基于网络药理学和实验验证探究大黄素调控肝糖异生的作用机制

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中医学报 2024年

作者：张婷房卫华张珊珊山东中医药大学山东中医药大学附属医院

目的：基于网络药理学结合体外实验，探讨大黄素对AML12小鼠肝细胞糖异生及关键酶的影响及其作用机制。方法：通过TCMSP、Swiss Target Prediction以及SEA数据库，挖掘大黄素相关靶点，利用OMIM、TTD、geneCards数据库收集并筛选出2型... 详细信息

目的：基于网络药理学结合体外实验，探讨大黄素对AML12小鼠肝细胞糖异生及关键酶的影响及其作用机制。方法：通过TCMSP、Swiss Target Prediction以及SEA数据库，挖掘大黄素相关靶点，利用OMIM、TTD、geneCards数据库收集并筛选出2型糖尿病相关的疾病基因靶点，获取交集基因后导入STRINg数据库中，构建靶点蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络。进行基因本体（gO）功能富集及基因组百科全书（KEgg）通路富集分析。采用CCK-8法检测大黄素对AML12细胞活力的影响；采用kFluor488-EdU法检测大黄素对AML12细胞增殖能力的影响；体外培养AML12细胞，以乳酸和丙酮酸为糖异生底物，glucagon为刺激物，刺激AML12细胞糖异生。予大黄素干预、以二甲双胍为阳性对照，分为空白组、模型组、3μmol·L-1大黄素组、6μmol·L-1大黄素组、150μmol·L-1二甲双胍组。葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖含量；ELISA法检测cAMP含量变化；RT-qPCR法检测g6pase、PEPCK的mRNA表达。结果：从大黄素成分中得到126个作用于2型糖尿病靶点。KEgg富集分析得到136条信号通路，与糖异生相关的cAMP信号通路在其中富集。体外实验证实，3μmol·L-1、6μmol·L-1大黄素处理24h后AML12细胞存活率在100％左右。3μmol·L-1、6μmol·L-1大黄素溶液均对AML12细胞无毒性作用，并用于后续实验。糖异生模型组葡萄糖含量、g6pase、PEPCK的mRNA水平以及cAMP水平较对照组升高（P6μmol·L-1大黄素处理后葡萄糖含量、g6pase、PEPCK的mRNA水平及cAMP水平较模型组降低（P<0.05）。结论：利用网络药理学揭示了大黄素通过多靶点、多通路、多途径的形式治疗2型糖尿病。通过细胞实验成功验证了大黄素降低cAMP的表达水平；以及大黄素可通过抑制AML12细胞糖异生及关键酶基因转录，影响肝细胞糖异生。

关键词：大黄素 2型糖尿病网络药理学 AML12细胞 PEPCK g6pase