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血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀（BCNU）治疗g422胶质母细胞瘤的实验研究

血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀（BCNU）治疗G422胶质母...

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作者：万曙浙江大学

学位级别：硕士

目的：评价血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀(BCNU)治疗g422胶质母细胞瘤的可行性，并分析TNP-470的作用机制。方法：取昆明种小鼠72只，于每只小鼠右腿内侧皮下接种0.1ml(1×10只)g422细胞，荷瘤4天后随机分为4组——TNP—... 详细信息

目的：评价血管生成抑制剂TNP-470及其联合卡莫司汀(BCNU)治疗g422胶质母细胞瘤的可行性，并分析TNP-470的作用机制。方法：取昆明种小鼠72只，于每只小鼠右腿内侧皮下接种0.1ml(1×10只)g422细胞，荷瘤4天后随机分为4组——TNP—470治疗组、TNP—470+BCNU治疗组、BCIW治疗组、对照组。TNP—470治疗组于荷瘤第4天起，用微量注射器在荷瘤小鼠左腿皮下注射0.2mlTNP—470溶剂(相当于30mg／kg)，隔天一次，共8次。TNP—470+BCNU治疗组的TNP—470用法同TNP-470治疗组，于荷瘤第7天起，用微量注射器腹腔注射BCNU溶液20mg,／kg(0.4ml/只)，隔天一次，共3次。BCNU治疗组的BCNU用法同TNP—470+BCNL治疗组。对照组用等量3％酒精·5％阿拉伯胶／生理盐水混合液替代TNP—470溶剂，治疗方式同TNP—470治疗组。观察各组小鼠皮下肿瘤的生长情况，隔天称重每只小鼠，并测量每只荷瘤小鼠的肿瘤大小，肿瘤体积用ab／2表示(a，b分别为肿瘤的长短径)。当荷瘤小鼠的肿瘤体积达到5OOmm时予以处死，记录荷瘤生长时间(天);切取肿瘤标本分成两份，一份作石蜡病理切片;另一份液氮急冻后置于-80℃冰箱中保存。随机抽取7例TNP-470治疗组的肿瘤组织冰冻标本及5例对照组的肿瘤组织冰冻标本，抽提肿瘤组织总RNA并行mVEgFmRNA定量RT-PCR检测。晰江大学阿士学位论义随机抽取TNP470治疗组和对照组的肿瘤组织石蜡病理切片各6例，采J！IBoehringer Mannheim公司的原位末端标记法(TUNEL)染色试6lJ盒，检测肿瘤细胞凋亡悄况。随机抽取TNP－470治疗组和对照组的肿瘤组织石蜡病理切片各6例，采m PCNA免疫组化染色试剂盒，免疫组化SABC法检测肿瘤细胞增殖情况。统计分析采用SPSS10．0 forwindows统计软件包。分别用单因素方差分析(LSD法)、 t检验及卡方检验。结果：动物实验发现，各组问荷瘤生长时间(大)分别为：TN P．47O治疗织，25＊士4．5;TN卜470十B＊NU治疗组，46．3土5．2;＊＊NU治疗组，43．1土4．8：对照组(＊＊mr。1)， 20．口士4厂。两两比较显示，所有两组间荷瘤生长时间比较差别均有显著性意义(＊＜0刀5)。在用药的整个过程中，给予TNP470治疗的小鼠活动良好，除个别小鼠注射局部有脱毛外，未见其他不良反应。TIP470治疗组与对照组之间在荷瘤 14大时的小鼠体重分别为27．3土1．ig、27石士1．4g，两组间比较差别无显著性意义(卜o＊26，卜＞0刀5)。TN卜470 ＋BCNU治疗组与BCNU治疗组在荷瘤34大时的小鼠体重分别为27．9上1．gg、28．3土2．og，两者之间差别无显著性意义(1—0．501，P＞0刀5)。定量RT－PCR检测结果显示：TNP－470治疗组及对照组的肿瘤组织mVEgF，。。InRNA表达水平(比值)分别为1l 士0刀7、口石9土0．10，两者之问比较差别有极显著性意义(t—8．80， P＜0刀01)。肿瘤组织KM免疫组化染色显示：州卜470治疗组及对照组的肿捆细胞增殖抬数分别为56S士4．3％、56刀士3．9％，两者之间比较差别无显著性意义(P＞0刀5)。肿瘤组织几贴卜染色显示：TNP－470治疗组及对照组的肿瘤细胞凋亡指数分别为 5．7土 1．5％、二．5土 1刀％，两者之间比较差别有非常显著性意义(P＜0．01)。结论：1．TNI，－470能够明显抑制小鼠体hJ g422 M质毋细胞瘤细胞的生LC，其对 g422 胜质母细胞瘤血管生成的抑制作川可能是迎过抑制肿瘤细胞的：nVEgF mRNA表达而实现的。常规治疗剂量(30mghg)hP－470对g422 ＆质母细胞瘤生长的抑制作川可能是通过抑制肿瘤的血管生成，诱发肿瘤细胞凋亡而实现的。2．TNP

关键词：血管生成抑制剂 TNP－470 BCNU 联合治疗 g422 胶质母细胞瘤

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