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g31p对高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良的影响及机制

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G31P对高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良的影响及机制

作者：马爽大连医科大学

学位级别：硕士

目的:建立高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BpD)动物模型,研究IL-8受体CXCR1/2拮抗剂g31p对BpD疾病进展的影响,通过检测不同时期大鼠肺组织细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9及T... 详细信息

目的:建立高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BpD)动物模型,研究IL-8受体CXCR1/2拮抗剂g31p对BpD疾病进展的影响,通过检测不同时期大鼠肺组织细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9及TgF-β/Smad信号通路相关蛋白,探讨g31p对BpD肺保护的作用及机制,为BpD的防治提供新的思路。方法:动物模型建立及分组:将新生24小时内的SD大鼠随机分为3组,每组12只,分别为正常组(Fi O=21%)、高氧组(Fi O=80%)及g31p治疗组(Fi O=80%+g31p)。高氧组及治疗组大鼠饲养于氧浓度为80%的氧箱中,正常组大鼠饲养于空气中。治疗组新生大鼠生后每日给予g31p 0.5mg/kg皮下注射,高氧组及正常组每日皮下注射同等体积生理盐水。每组分别于7天、14天、21天取材肺部组织用于后续试验。应用HE染色观察各时期各组新生大鼠肺组织的病理改变,应用实时荧光定量pCR法检测各组各时期大鼠肺部MMp9及TgF-β在m RNA水平上的表达情况,应用蛋白免疫印迹方法检测各组各时期大鼠及MMp9、TgF-β及p-Smad2/3在蛋白水平表达情况,应用免疫组织化学染色方法验证各组大鼠Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、MMp9及TgF-β的表达及分布情况。结果:***染色结果显示正常组新生大鼠随着时间增加,肺泡发育逐渐成熟,肺泡结构完整,形态均匀,而高氧组大鼠表现为肺间质内大量炎性细胞浸润,肺泡形态不规则,肺泡腔变大,可见肺泡融合,出现肺泡简化,纤维结缔组织增生,肺泡间隔增厚等病理表现,g31p治疗组的肺部病理改变较高氧组减轻,g31p可减轻肺泡简化程度,抑制肺泡结构破坏,减轻间质增厚。2.g31p对细胞外基质的影响。免疫组化结果显示,与正常空气组比较,高氧组新生大鼠在7天、14天、21天时细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白表达显著增强,分布更加广泛,g31p治疗组与高氧组比较,其同时期的Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少;同样,与正常空气组比较,高氧组大鼠在7天、14天、21天时细胞外基质中Ⅲ型胶原蛋白表达增强,与高氧组比较,g31p治疗组在同时期的Ⅲ型胶原蛋白表达明显减少;高氧组大鼠在7天、14天、21天时肺组织中MMp9在m RNA水平及蛋白水平的表达均较同时期正常组增加,而g31p治疗组MMp9在m RNA及蛋白水平上表达情况明显低于同时期的高氧组。3.g31p对高氧BpD大鼠TgF-β/Smad信号通路的影响。与正常组比较,BpD模型组在7天、14天、21天时TgF-β在m RNA及蛋白水平上表达明显升高,而g31p治疗组与同时期高氧组相比,可显著减少高氧诱导的TgF-β表达;与正常对照组相比,7天、14天、21天时大鼠肺组织磷酸化Smad2/3蛋白在高氧组中表达要显著增加,与高氧组相比,g31p治疗可下调同一时期的磷酸化Smad2/3蛋白的水平。结论:1.g31p可以减轻高氧诱导的新生大鼠BpD病理改变。2.g31p可以通过减少细胞外基质中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及MMp9沉积进而减轻BpD病理改变。3.g31p改善BpD的机制可能与抑制TgF-β/Smad信号转导通路相关。

关键词：支气管肺发育不良 g31p 新生SD大鼠转化生长因子-β 细胞外基质

CXCR1/CXCR2受体拮抗剂—g31p抑制前列腺癌血管新生的体内实验

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肿瘤防治研究 2012年第7期39卷 784-786页

作者：刘欣戴晓冬李星云王晓丽李芳大连医科大学微生物学教研室辽宁大连116044 大连医科大学寄生虫学教研室辽宁大连116044 大连医科大学免疫学教研室辽宁大连116044

目的探讨g31p(CXCR1/CXCR2受体拮抗剂)对人前列腺癌pC-3细胞的体内血管新生的抑制作用。方法建立体内绿色荧光蛋白(gFp)标记的人雄激素非依赖性前列腺癌细胞pC-3的裸鼠原位移植瘤模型,观察g31p对裸鼠前列腺原位移植瘤血管新生的影响。... 详细信息

目的探讨g31p(CXCR1/CXCR2受体拮抗剂)对人前列腺癌pC-3细胞的体内血管新生的抑制作用。方法建立体内绿色荧光蛋白(gFp)标记的人雄激素非依赖性前列腺癌细胞pC-3的裸鼠原位移植瘤模型,观察g31p对裸鼠前列腺原位移植瘤血管新生的影响。结果与对照组(1.26±0.46)相比,g31p处理组明显抑制前列腺肿瘤的血管新生(0.49±0.12,pg31p处理组VEgF(ppg31p对人雄激素非依赖性前列腺癌的血管新生有明显抑制作用。

关键词： g31p 前列腺癌血管新生 CXCR1 CXCR2

CXCR1/CXCR2受体拮抗剂(g31p)对人前列腺癌增殖的体内外实验研究

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重庆医科大学学报 2011年第12期36卷 1420-1422页

作者：刘欣邓国英杨淑凤李芳大连医科大学基础医学院微生物学教研室免疫学教研室大连116044

目的:探讨CXCR1/CXCR2受体拮抗剂-g31p对人前列腺癌细胞pC-3增殖的体内外抑制作用。方法:采用CCK-8法研究不同浓度g31p对pC-3细胞体外增殖的抑制作用。建立体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,gFp)标记人雄激素非依赖性前列腺... 详细信息

目的:探讨CXCR1/CXCR2受体拮抗剂-g31p对人前列腺癌细胞pC-3增殖的体内外抑制作用。方法:采用CCK-8法研究不同浓度g31p对pC-3细胞体外增殖的抑制作用。建立体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,gFp)标记人雄激素非依赖性前列腺癌细胞pC-3裸鼠原位移植瘤模型,观察g31p对裸鼠前列腺癌原位移植瘤的体积、重量的影响。结果:CCK-8结果显示100 ng/ml g31p与对照组相比分别作用1、3 d和5 d差异具有统计学意义(1 d p=0.007、3 d p=0.001、5 d p=0.028,均为ppC-3细胞裸鼠模型体内实验显示,与对照组(100μl N.S)相比,g31p处理组(0.5 mg/kg)从给药第18天起能显著抑制前列腺肿瘤的体积(p=0.026,pg31p处理组在抑制前列腺肿瘤重量方面有明显作用(p=0.027,pg31p体内外实验均能抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系pC-3的增殖。

关键词： g31p 前列腺癌 CXCR1 CXCR2

CXCR1/2拮抗剂g31p对获得性大疱性表皮松懈症皮肤损伤的影响

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CXCR1/2拮抗剂G31P对获得性大疱性表皮松懈症皮肤损伤的影响

作者：郎兴莹大连医科大学

学位级别：硕士

目的：获得性大疱性表皮松懈症（Epidermolysis bullosa acquisita EBA）多数累及皮肤和黏膜表面，特别是口腔、鼻、咽、喉粘膜和结膜处出现红肿瘙痒，形成水疱、糜烂、疤痕等。EBA患者血循环中含有针对Ⅶ型胶原蛋白（COL-7）的自身循环... 详细信息

目的：获得性大疱性表皮松懈症（Epidermolysis bullosa acquisita EBA）多数累及皮肤和黏膜表面，特别是口腔、鼻、咽、喉粘膜和结膜处出现红肿瘙痒，形成水疱、糜烂、疤痕等。EBA患者血循环中含有针对Ⅶ型胶原蛋白（COL-7）的自身循环Igg抗体，皮损部位的组织病理学检查显示病损部位真表皮分离，真表皮基底膜处有Igg抗体、C3补体的线性沉积，表皮下存在以嗜中性粒细胞为主的炎性细胞浸润。EBA模型小鼠主要在眼周、口唇周围、四肢躯干、尾部等部位发病，出现水疱、糜烂、疤痕等症状。本课题在成功建立EBA模型小鼠后，将其分成两组，分别在预定的时间注射g31p或NS。通过比较g31p组和NS组EBA模型小鼠的区别，观察CXCR1/2拮抗剂g31p是否能够抑制获得性大疱性表皮松懈症模型小鼠的皮肤损伤，是否能够缓解EBA模型小鼠的炎症，对EBA治疗提供理论依据。方法：g31p配制：取1mgg31p粉末，加10mlNS配制成10g/100l的工作浓度溶液，每只小鼠注射10g/20g（即100l/只）。实验动物分组：取Balb/c小鼠20只，分为两组，每组各10只，分别为g31p组（雌雄各5只）、NS组（雌雄各5只）。动物模型建立：将gST-mCol7c和弗式完全佐剂（FCA）主动免疫兔子，提取血清后，纯化，得到致病性Igg抗体（p-Igg)，被动免疫Balb/c小鼠。实验第1、3、6、8、10天，g31p组注射g31p，NS组注射NS，实验第2、4、7天，两组均注射p-Igg（德国吕贝克大学皮肤病实验室赠送）。检测方法：实验第5、9天，EBA模型小鼠尾静脉取外周血、尾部末端取皮肤分别用于FACS(gr-1)、IF/IHC。实验第11天，对小鼠的皮肤破损程度评分，第12天，解剖小鼠，取小鼠各脏器待用。外周血静置后取血清，用于流式细胞术微球阵列法FACS（CBA）检测细胞因子;耳部组织一部分室温存放在福尔马林中用于HE染色，另一部分放在空Ep管内-80℃冻存用于直接免疫荧光（IF）;病损部位的皮肤室温存放在福尔马林中用于HE染色;脾组织用于FACS（gr-1、T/B）。结果：1.g31p组和NS组大体观察结果显示，两组均在耳部、眼周、尾部皮肤出现大疱、糜烂、疤痕等症状，但g31p组较NS组更晚出现症状且g31p组症状较NS组有所缓解;2.g31p组EBA模型小鼠的皮损部位评分低于NS组（pg31p组EBA模型小鼠病损部位皮肤真表皮分离不明显，表皮下可见少量炎性细胞浸润;4.直接免疫荧光检测结果显示，g31p组和NS组均可见真表皮的分离，表皮下Igg和C3的线性沉积，荧光强度分析结果显示，p>0.05，不具有统计学意义;5.流式细胞术检测两组小鼠外周血gr-1，第5天两组结果显示轻微差别（p>0.05），第9天NS组明显高于g31p组（pgr-1、CD3、CD9表达，两组结果(p>0.05)未见显著性差异。结论：1. g31p可以明显减轻EBA模型小鼠的皮肤损伤症状;2. g31p可以减少EBA模型小鼠表皮下炎性细胞浸润，缓解病损部位真表皮分离;3. g31p可以减少EBA模型小鼠外周血中性粒细胞数量，但是对脾脏内的中性粒细胞、T细胞及B细胞数量没有影响;4. g31p对表皮下Igg和C3线性沉积引起的EBA模型小鼠皮肤损害没有显著影响。

关键词：获得性大疱性表皮松懈症 g31p Ⅶ型胶原蛋白中性粒细胞

IL-8介导血管平滑肌细胞迁移机制及g31p的作用初探

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IL-8介导血管平滑肌细胞迁移机制及G31P的作用初探

作者：孙云亮大连医科大学

学位级别：硕士

目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)导致的心脑血管疾病是人类健康的最大杀手,在我国的发病率逐年升高。近年来的研究表明AS是一种炎症性疾病,大量的炎症细胞和炎性因子伴随在其发生和发展过程的始终。炎症细胞参与AS表现为在损伤... 详细信息

目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)导致的心脑血管疾病是人类健康的最大杀手,在我国的发病率逐年升高。近年来的研究表明AS是一种炎症性疾病,大量的炎症细胞和炎性因子伴随在其发生和发展过程的始终。炎症细胞参与AS表现为在损伤部位有大量炎症细胞的粘附、浸润,并且释放大量的炎性因子,趋化白细胞穿过血管内膜,诱导平滑肌细胞表型改变,继而迁移进入内膜并进行增殖。这些细胞进入内膜后,开始吞噬脂质形成泡沫细胞,加速AS的发展。趋化因子是一类具有趋化作用的小分子量分泌型蛋白,可以诱导白细胞进入血管内膜,在AS中发挥重要作用。白细胞介素-8(Interleukin-8, IL-8)是一种单核/巨噬细胞分泌的多肽,通过与其受体CXCR1/CXCR2结合从而启动中性粒细胞趋化反应。IL-8还能够诱导人主动脉血管平滑肌细胞迁移和增殖;并且可以促进AS中新生血管形成,但其具体机制尚不清楚。抑制IL-8与其受体结合为治疗AS提供了新的思路。g31p是通过对人IL-8基因的定点突变,筛选的出高亲和力,无活性的人IL-8类似物。通过实验证实了g31p可以高效的亲和CXCR1/CXCR2,对与中性粒细胞相关的感染治疗上有明显的疗效。g31p对中性粒细胞CXCR1/CXCR2的有效抑制作用能否发生在血管平滑肌细胞中尚未有研究。方法:(1)利用RT-pCR的方法检测A7r5细胞中是否有IL-8的受体之一CXCR2的表达;(2)利用Boyden Chamber法观察IL-8和g31p对A7r5细胞迁移的影响;(3)利用划痕法和Boyden Chamber法观察g31p在IL-8诱导A7r5细胞迁移过程中的影响;(4)利用细胞免疫荧光方法观察细胞骨架变化情况;(5)利用钙离子荧光探针Fluo-3 AM检测IL-8与g31p对A7r5细胞内钙离子浓度的影响。结果:(1)RT-pCR结果显示A7r5细胞中有CXCR2的表达;(2)IL-8诱导A7r5细胞迁移实验结果显示,随着IL-8浓度的增加,细胞迁移数呈现上升趋势,IL-8浓度为20ng/ml、50ng/ml两组的细胞迁移数较其它各组有统计学意义,但这两组之间差异无统计学意义。随着g31p浓度的增加,迁移的细胞数并未发生明显变化,各组间的差异无统计学意义。(4)划痕和迁移实验结果显示了细胞平均迁移距离与相对迁移数量两项统计值的变化情况,只用g31p处理的阴性对照组与空白对照组比较,两项统计值的变化均无统计学意义。只用IL-8诱导的阳性对照组与空白对照组比较,两项统计值的变化均有统计学意义(pg31p抑制组与空白对照和g31p阴性对照组比较,两项统计值的变化无统计学意义;与IL-8阳性对照比较,两项统计值的变化有统计学意义(pg31p预处理、IL-8终浓度为20ng/ml组的细胞相比,在用g31p预处理后再用IL-8刺激,可观察到细胞伪足的伸出不明显。(6)细胞内钙离子浓度测定结果显示,随着IL-8浓度的增加(0-100ng/ml)细胞内钙离子的荧光强度逐渐增加,呈现剂量依赖趋势,与对照组相比有统计学意义。与用同样浓度的IL-8刺激组相比,用g31p预处理的细胞、再用IL-8刺激后,其细胞内钙离子的荧光强度变弱,有统计学意义。结论:(1)IL-8可以诱导A7r5细胞的迁移、细胞伪足伸出、细胞内钙离子浓度升高,具有剂量依赖性。(2)g31p可以有效抑制IL-8对A7r5细胞的诱导作用。(3)IL-8对A7r5细胞的诱导作用可能通过调节细胞膜钙离子通道进而调节细胞功能。

关键词： IL-8 g31p A7r5细胞动脉粥样硬化细胞迁移趋化因子

高氧暴露下g31p对新生鼠支气管肺发育不良保护机制研究

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高氧暴露下G31P对新生鼠支气管肺发育不良保护机制研究

作者：王馈大连医科大学

学位级别：硕士

目的:建立SD大鼠BpD(Bronchopulmonary dysplasia)动物模型,检测BpD大鼠模型体内,相关高氧肺损伤与炎症因子IL-8/CXCL8、炎症信号通路NF-κB的变化,予IL-8/CXCL8受体拮抗剂g31p干预BpD大鼠模型,来探索g31p对BpD大鼠的保护机制。方法:随... 详细信息

目的:建立SD大鼠BpD(Bronchopulmonary dysplasia)动物模型,检测BpD大鼠模型体内,相关高氧肺损伤与炎症因子IL-8/CXCL8、炎症信号通路NF-κB的变化,予IL-8/CXCL8受体拮抗剂g31p干预BpD大鼠模型,来探索g31p对BpD大鼠的保护机制。方法:随机选取新生的SD大鼠,雌雄不限48只,分3组,每组各16只:(1)正常对照组(Fi0=21%);(2)高氧对照组(Fi0=60%);(3)高氧g31p处理组(Fi0=60%)。高氧对照组放置于自制的密闭氧箱内,氧浓度维持在60%。高氧g31p处理组置于和高氧组相同的环境的氧箱内,予g31p粉针剂500μg/kg腹腔注射每日1次;正常组和高氧组腹腔注射相同剂量的生理盐水每日1次。观察大鼠的精神状况、活动度和进食情况,记录新生大鼠体重。分别在出生后3d、7d、14d、21d取新生大鼠的肺组织,观察肺组织的大体形态,利用HE染色和Masson染色的方法,观察肺组织的病理变化和纤维化程度。同时分别使用实时RT-pCR和Western Blot方法检测,各组大鼠肺组织中CXCR1/CXCR2,NF-κB在蛋白和mRNA水平上的表达情况。结果:1.一般情况:实验开始的前三天,各组大鼠之间一般情况未见明显差异,随着高氧时间的延长,各组之间出现明显差异,正常组大鼠精神活跃,呼吸平稳,进食良好且体重增加正常。实验开始的第7天,高氧组大鼠反应一般,自主活动减少,摄食减少,离开氧环境出现呼吸急促,恢复供氧可缓解;第14天,高氧组大鼠反应差,自主活动减少,体毛无光泽,离开氧环境出现轻度的呼吸困难;第21天,高氧组大鼠消瘦,精神萎靡,反应差,离开氧环境呼吸困难加重,鼻翼皮肤发绀,升高环境的氧浓度可缓慢缓解。高氧g31p治疗组大鼠反应于正常对照组类似,和高氧对照组相比反应明显减轻。2.各组大鼠体重变化:高氧处理后第21天,高氧对照组(Hyperoxia)体重增加明显比对照组(conctrol)和g31p组降低,差异具有统计学差异(pg31p组大体变化较高氧组明显减轻。***染色:正常组肺泡结构完好,肺泡表现均匀,肺泡数目较多;高氧对照组肺泡数目明显减少,体积变大还有部分融合,间隔增厚,结构紊乱,有毛细血管扩张,部分有炎性细胞浸润。而高氧g31p治疗组病理变化介于正常组和高氧组之间。***染色:正常对照组较少见胶原沉积,而高氧对照组3天时,实验各组未见异常变化,第7天时,肺组织内可见少量胶原纤维沉积;第21天时,肺组织内可见较多的胶原纤维沉积,肺组织纤维化;高氧g31p处理组胶原纤维沉积介于高氧组和正常组之间。***1/CXCR2在mRNA以及蛋白产物在三组大鼠肺组织中的表达水平。实验3、7、14、和21d时,高氧对照组肺组织中CXCR1/CXCR2在mRNA较正常组和g31p治疗组显著增高(ppg31p处理组。***-κB mRNA以及蛋白产物在三组大鼠肺组织中变化水平差异的比较。实验3、7、14、和21d时,高氧组肺组织内NF-κB mRNA较正常组和高氧g31p治疗组显著升高(pppD动物模型;2.与高氧对照组相比g31p可以明显改善BpD大鼠肺组织的病理变化,说明对BpD大鼠具有治疗作用;3.g31p对BpD治疗作用机制可能抑制NF-κB,减少炎症反应有关。

关键词：支气管肺发育不良新生大鼠 g31p IL-8/CXCL8 炎症损伤 NF-κB

CXCR1/2拮抗剂g31p在小鼠特应性皮炎中抗炎作用的研究

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CXCR1/2拮抗剂G31P在小鼠特应性皮炎中抗炎作用的研究

作者：兰元翎大连医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨特应性皮炎小鼠模型中CXCR1/2拮抗剂g31p的抗炎作用。材料和方法:1、动物分组及模型的建立:BALB/c小鼠60只随机分成特应性皮炎组(AD组)、g31p治疗组和对照组,每组20只。根据Spergel[1]等外用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏小鼠... 详细信息

目的:探讨特应性皮炎小鼠模型中CXCR1/2拮抗剂g31p的抗炎作用。材料和方法:1、动物分组及模型的建立:BALB/c小鼠60只随机分成特应性皮炎组(AD组)、g31p治疗组和对照组,每组20只。根据Spergel[1]等外用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏小鼠的方法,建立特应性皮炎动物模型,AD组和g31p治疗组用100μl(1μg/μl)的卵清蛋白溶液腹部经皮致敏小鼠,每周3次,间隔两周重复1次,步骤同第一周,共重复2次。对照组给予相同剂量的生理盐水。g31p治疗组小鼠在每次致敏的前一天和致敏后第7天局部皮下注射20μl(0.25μg/μl)的IL-8受体CXCR1/2拮抗剂g31p。2、标本的采集:小鼠致敏结束24 h后,处死小鼠,取腹部致敏部位皮肤组织。3、检测方法:⑴观察各组小鼠瘙痒情况及致敏处皮损情况。⑵HE染色法检测各组小鼠皮肤组织病理学改变。⑶酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠致敏局部皮肤组织匀浆液中炎症细胞因子IL-4、IL-8的水平。⑷pCR检测各组小鼠皮肤组织炎症细胞因子(IL-4、IL-8、IL-6、IL-10)m RNA的水平。⑸Western Blot和免疫组化检测各组小鼠皮肤组织转录因子NF-κB的表达。⑹免疫组化法检测各组小鼠皮肤组织gRO-α的表达。⑺皮肤组织髓过氧化物酶(MpO)活性检测分析各组小鼠皮肤组织中性粒细胞的浸润情况。结果:1、通过对各组小鼠致敏及治疗过程中搔抓现象及皮损程度的观察:对照组小鼠全程无明显的搔抓现象,致敏处皮肤光滑未出现明显病理改变;AD组小鼠会出现频繁的搔抓现象,致敏处的皮肤出现红斑、结痂、脱屑等典型特应性皮炎外观改变;g31p治疗组小鼠水肿及脱屑现象较AD组均有明显的减轻,提示g31p能够明显抑制OVA诱导的特应性皮炎引起的小鼠局部皮损,具有调节改善特应性皮炎的作用。2、各组小鼠皮肤组织的HE染色结果显示,AD组小鼠皮肤表皮明显增厚,真皮层有大量炎症细胞浸润,g31p治疗组的小鼠皮肤表皮轻微增厚,有少量炎症细胞浸润,对照组小鼠皮肤组织未见炎症病理改变,提示g31p可能对特应性皮炎的炎症反应有减轻或抑制作用。3、各组小鼠皮肤组织匀浆液的ELISA结果显示,经g31p治疗后的小鼠皮肤组织匀浆液中的炎症细胞因子IL-4、IL-8的表达(10.76±5.6,7.69±2.19,ng/L)显著低于AD组(27.12±6.3,16.69±2.36,ng/L)(p﹤0.01),但明显高于对照组(4.18±2.15,3.04±1.18,ng/L)(p﹤0.01),提示g31p可以降低特应性皮炎皮肤组织匀浆液中炎性因子(IL-4、IL-8)的表达水平,从而对特应性皮炎的炎症反应起到一定的抑制作用。4、pCR检测各组小鼠皮肤组织部分炎症细胞因子m RNA的水平,结果显示,AD组小鼠皮肤组织中细胞因子IL-4、IL-8、IL-6、IL-10 m RNA的水平明显高于对照组(p﹤0.05),经g31p治疗后的小鼠皮肤组织中的上述细胞因子m RNA水平显著降低(p﹤0.05)。提示g31p可以降低特应性皮炎皮肤组织中炎症因子(IL-4、IL-8、IL-6、IL-10)的m RNA水平,从而一定程度的抑制特应性皮炎的炎症反应。5、用Western Blot、免疫组化方法检测各组小鼠皮肤组织中转录因子NF-κB蛋白的表达,Western Blot和免疫组化检测结果均显示,AD组小鼠转录因子NF-κB的表达明显高于对照组(p﹤0.05),而g31p治疗组的小鼠转录因子NF-κB的表达明显低于AD组(p﹤0.05),提示g31p对炎症反应中转录因子NF-κB蛋白表达有一定的抑制作用。6、各组小鼠皮肤组织免疫组化结果显示,AD组小鼠皮肤组织中的gRO-α高表达,经g31p治疗后gRO-α的表达明显降低(p﹤0.05),对照组中gRO-α几乎不表达。提示g31p可以抑制炎症反应中gRO-α的表达。7、各组小鼠皮肤组织匀浆液MpO检测结果显示,AD组小鼠MpO活性(34.69±6.3,U/g)明显高于对照组(11.56±1.79,U/g)(p﹤0.01),g31p治疗组MpO活性(20.98±8.61,U/g)低于AD组,两者差异有统计学意义(p﹤0.01),表明g31p对特应性皮炎的炎症反应中皮损部位的中性粒细胞浸润有一定抑制作用,从而减轻炎症损伤。结论:1、AD组小鼠皮肤组织中IL-8的表达明显升高,故可推测IL-8在特应性皮炎的炎症反应中起重要作用。2、经IL-8受体CXCR1/2拮抗剂g31p局部皮下注射治疗后,小鼠局部皮肤的外观和皮损病理学炎症表现均有明显的减轻,某些炎症相关因子和蛋白的表达及MpO活性均显著降低。综上所述CXCR1/2拮抗剂g31p可能在治疗特应性皮炎中具

关键词：小鼠特应性皮炎 CXCR1/2拮抗剂 g31p

Wortmannilatone F与g31p联合用药对旋毛虫抑杀作用和抗囊包形成与纤维化的实验研究

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Wortmannilatone F与G31P联合用药对旋毛虫抑杀作用和抗囊包形成...

作者：张雪强大连医科大学

学位级别：硕士

实验目的:旋毛虫病是一种对人类健康危害较大的寄生虫病,本病呈世界性分布,也是我国重点防治的一种食源性寄生虫病。目前国内外有关旋毛虫病的实验研究主要集中于病原学和免疫学,而针对旋毛虫病药物防治方面的研究较少。阿苯达唑和苯并... 详细信息

实验目的:旋毛虫病是一种对人类健康危害较大的寄生虫病,本病呈世界性分布,也是我国重点防治的一种食源性寄生虫病。目前国内外有关旋毛虫病的实验研究主要集中于病原学和免疫学,而针对旋毛虫病药物防治方面的研究较少。阿苯达唑和苯并咪唑是当前临床上应用最广的治疗旋毛虫病药物,该类药物非我国自主产权,且有一定的副作用,同时又有产生耐药性的趋向,因此开发具有我国自主产权的抑杀旋毛虫的药物,无论从临床上应用于防治旋毛虫病的实际工作方面,还是对我国社会经济发展方面都有着重要的意义。Wortmannilactone F是一种从邬氏黄丝曲菌(***)分离得到的新型化合物,它可以抑制蠕虫线粒体内膜上的电子传递,为NADH-延胡索酸还原酶抑制剂。我们的前期实验已证明该药对旋毛虫成虫具有明显的抑杀作用。g31p是一种趋化因子的竞争性抑制剂,能阻断IL8以及其他趋化因子与CXCR1/2结合,从而使得趋化因子失去正常的生物学效应,阻止多种炎症细胞的浸润,减轻病灶周围的炎症反应。在探讨防治旋毛虫病的临床用药时,除应选用能直接有效地抑杀幼虫,以防止其引发的机械损害和免疫病理损伤的药物外,还要考虑到能有效地阻止囊包形成、囊包外胶原纤维的增生和囊壁周围血管的新生,防止由于囊包形成和纤维化给病灶周围组织器官造成继发性损害,以达到有效地防治旋毛虫感染(病)的目的。本实验旨在探讨Wortmannilatone F与g31p联合用药对旋毛虫的抑杀作用和对囊包形成与纤维化的影响。实验方法:1.建立旋毛虫感染动物模型和实验分组:(1)建立模型:取32只BALB/c雄性小鼠,其中8只作为阴性对照组,其余24只小鼠全部感染旋毛虫囊包,囊包接种数为150±5个/鼠,建立旋毛虫病小鼠实验动物模型。囊包感染接种过程见参考文献[1]。(2)实验分组:将感染旋毛虫的24只小鼠,随机分为三个组:Wortmannilactone F治疗组、Wortmannilactone F与g31p联合治疗组(简称联合治疗组)、阳性模型组(Model)。未感染的8只作为阴性对照组(Control)。四组小鼠饲养条件相同。2.实验方法:在小鼠实验感染旋毛虫囊包10天后,Wortmannilactone F和g31p联合治疗组小鼠皮下注射g31p,500μg/kg,隔日注射1次,连续7次。同时给小鼠口服Wortmannilactone F,200mg/kg,每日1次,连续灌胃3天;Wortmannilactone F治疗组小鼠在感染旋毛虫10天后,口服Wortmannilactone F,200mg/kg,每日1次,连续灌胃3天,同时隔日皮下注射等量的生理盐水。阳性模型组和阴性对照组小鼠,用等量生理盐水代替Wortmannilactone F和g31p。停药后1天,将所有实验小鼠麻醉处死,无菌解剖小鼠,收集膈肌组织等进行药效的实验观察。3.实验观察指标:(1)抑杀旋毛虫幼虫观察:收集4组小鼠膈肌组织采用HE染色法,计数膈肌组织内旋毛虫囊包量并比较囊包大小,目的是观察Wortmannilactone F和g31p对旋毛虫囊包的联合抑杀疗效。(2)旋毛虫囊包形态学观察:对4组小鼠膈肌组织采用HE染色法,在光镜下观察药物对膈肌组织内旋毛虫囊包形态的影响、宿主在囊包外周产生的免疫病理反应,以及通过电子显微镜观察旋毛虫囊包形成的完整性和其内幼虫虫体发育等情况。(3)采用免疫组织化学染色检测FSp1的表达,以观察g31p对膈肌组织囊包外周成纤维细胞积聚数量和旋毛虫囊包形成完整性的影响。(4)采用Masson染色法检测旋毛虫囊包纤维化的程度,以观察g31p对膈肌组织囊包外周胶原纤维含量的影响,进而探讨药物治疗后对旋毛虫囊包形成完整性的影响。(5)应用免疫荧光染色检测各组小鼠膈肌组织中v WF因子的表达量,探讨在旋毛虫病鼠膈肌组织中囊包形成过程中,联合用药对其周围新生血管形成的影响。结果与讨论:1、联合用药对旋毛虫幼虫的抑杀效果观察(1)Wortmannilactone F治疗组和联合治疗组小鼠经药物作用后,在镜下计数膈肌组织中虫体囊包数量分别为11.5±2.1、6.4±1.2,减虫率分别达到58.0%、76.6%,进行统计学比较具有显著性差异(pp<0.01)。(2)在光镜下观察阳性模型组小鼠感染的旋毛虫囊包内幼虫虫体形态,发现虫体完整,表皮光滑,完好地盘曲在宿主的营养细胞内,其外可见纤维化囊包。在电镜下观察,阳性模型组肌幼虫角质层光滑平坦,每隔等长距离有大小相等的横纹。而Wortmannilactone F治疗组和联合用药治疗组旋毛虫囊包内幼虫的虫体形态结构发生明显的变化,光镜下可见虫体小且僵

关键词：旋毛虫病 Wortmannilatone F g31p 杀虫纤维化

重组人CXCR1/2拮抗剂g31p调节平滑肌细胞增殖、迁移及相关分子机制研究

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重组人CXCR1/2拮抗剂G31P调节平滑肌细胞增殖、迁移及相关分子机...

作者：范福顺大连医科大学

学位级别：硕士

目的：动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)导致的心脑血管疾病是人类健康的最大杀手，其是由多种因素导致的一种慢性炎症疾病，在我国的发病率逐年升高。白细胞介素-8（Interleukin-8, IL-8）作为一种炎症因子,在动脉粥样硬化的发生、... 详细信息

目的：动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)导致的心脑血管疾病是人类健康的最大杀手，其是由多种因素导致的一种慢性炎症疾病，在我国的发病率逐年升高。白细胞介素-8（Interleukin-8, IL-8）作为一种炎症因子,在动脉粥样硬化的发生、发展中起着重要的作用。高脂血症通常与动脉粥样硬化的发病密切相关，因此，预防高脂血症的发生可能是早期动脉粥样硬化治疗的一个重要组成部分。g31p是通过对人IL-8基因定点突变获得的IL-8类似物，其可高亲和力结合CXCR1/2而无生物学活性，使其成为理想的IL-8受体CXCR1/2的拮抗剂。已知g31p在中性粒细胞相关的感染治疗上有明显的疗效，然而g31p对CXCR1/2的有效抑制作用是否能应用于血管平滑肌细胞中尚未有报导。本研究的主要目的是探讨g31p对小鼠高脂血症的预防效果并初步探求其调节平滑肌细胞增殖和迁移的机制,为预防高脂血症提供一个新的靶点和思路。方法： 1.体内实验 1）模型建立：6周龄雄性BALB/c小鼠共30只，被随机分为高脂血症模型组（n=12），g31p治疗组（n=12），阴性对照组（n=6）。高脂血症模型组喂以高脂饮食（普通饲料78.8％，10％猪油，蛋黄粉10％，胆固醇1％，猪胆汁盐0.2％盐）并皮下注射生理盐水。g31p治疗组喂以高脂饮食，并每周皮下注射一次g31p（500ug/kg）。阴性对照组喂以普通饲料，皮下注射生理盐水。三组动物分别于4个月、6个月及8个月眼眶取血。测定血脂含量确定高脂血症模型是否建立成功。 2）血清中血脂及IL-8含量测定：小鼠眼眶取血后通过离心的方法制备血清。ELISA检测血清中IL-8含量，血脂含量测定试剂盒检测血清中CHO、Tg、HDL、LDL指标。 3）小鼠胸主动脉炎症因子表达情况测定：RT-pCR检测胸主动脉中MIp-2、KC、CXCR2、TNF-α、 IFN-γ等炎症因子表达情况。4）小鼠胸主动脉与迁移及增殖相关因子的表达情况;免疫组化检测胸主动脉和迁移有关的MMp-2、MMp-9表达情况及和增殖有关pCNA表达情况。 2.体外实验： 1）MTT检测g31p对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的调节作用。流式细胞术检测g31p对IL-8诱导下的VSMCs细胞周期的变化。 2）划痕实验、Boyden Chamber检测g31p对IL-8诱导下的VSMCs迁移的调节作用。免疫荧光检测g31p对IL-8诱导下的VSMCs伪足形成的影响。结果： 1.体内实验 1）高脂血症模型的建立在动物饲养四个月、六个月、八个月眼眶取血，测定血清中血脂含量。高脂血症模型组CHO（127.30±11.87mg/dl，165.00±15.56mg/dl，147.40±14.33mg/dl）;Tg（234.35±40.51mg/dl，252.63±41.78mg/dl，205.15±30.23mg/dl）;LDL（27.20±7.24mg/dl，34.90±6.51mg/dl，31.50±3.41mg/dl）。阴性对照组CHO（72.70±4.77mg/dl，96.00±11.10mg/dl，84.20±10.39mg/dl）;Tg（168.94±38.20mg/dl，168.42±16.00mg/dl，152.51±24.12mg/dl）;LDL（20.40±6.34mg/dl，21.50±8.70mg/dl，23.50±4.56mg/dl）。高脂血症模型组CHO、Tg、LDL含量与阴性对照组相比明显升高，二者有显著差异（p＜0.05）。高脂血症模型组中HDL（60.00±26.32mg/dl,，85.83±17.52mg/dl，60.00±14.70mg/dl）与阴性对照组HDL（80.00±14.33mg/dl，155.80±11.19mg/dl，97.56±12.87mg/dl）相比明显下降，二者相比也有显著差异（p＜0.05）。 2） g31p对高脂血症的治疗效果g31p治疗组（500ug/kg）中CHO（109.10±20.18mg/dl，136.00±26.56mg/dl，126.30±13.35mg/dl）、Tg（185.45±35.85mg/dl，201.24±67.63mg/dl，170.14±40.50mg/dl）、LDL（12.30±6.26mg/dl，22.50±4.56mg/dl，16.15±3.14mg/dl），与高脂血症模型组相比显著下降（p＜0.05）。 g31p治疗组HDL（100.00±19.63mg/dl，167.50±15.16mg/dl，104.32±24.09mg/dl），与高脂血症模型组相比明显升高（p＜0.05）。g31p治疗组小鼠体重与高脂血症模型组相比显著下降（p＜0.05）。g31p治

关键词：高脂血症 IL-8 g31p 迁移增殖血管平滑肌细胞