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四川大学学报（医学版） 2006年第1期37卷 30-32页

作者：杨凡姚裕家熊英袁粒星余波陈永秀四川大学华西第二医院儿科成都610041

目的了解ADF和g-actin在新生大鼠肾脏缺血损伤中的变化情况,探讨ADF对肌动蛋白细胞骨架的影响机理及其在损伤发病机制中所起的作用。方法新生大鼠分为缺血10MIN组、缺血30MIN组和对照组,每组各8只。通过钳夹肾蒂不同时段,建立新生大鼠... 详细信息

目的了解ADF和g-actin在新生大鼠肾脏缺血损伤中的变化情况,探讨ADF对肌动蛋白细胞骨架的影响机理及其在损伤发病机制中所起的作用。方法新生大鼠分为缺血10MIN组、缺血30MIN组和对照组,每组各8只。通过钳夹肾蒂不同时段,建立新生大鼠肾脏缺血动物模型。同一张肾脏组织切片上,同时使用兔抗鸡ADF抗血清和鼠g-actin单克隆抗体,通过FITC和TRITC标记的不同二抗检测实验组和对照组ADF和g-actin在肾小管上皮细胞的表达情况。结果对照组ADF和g-actin染色均匀地分散在肾小管上皮细胞胞浆内。缺血损伤后,ADF和g-actin的分布发生明显变化,出现在TEC顶侧区的聚集,同时肾小管腔颗粒中也出现两者的染色。ADF的表达在缺血前后差异无统计学意义(P>0.05),g-actin的表达在缺血后出现增加,差异有统计学意义(P>0.05)。结论生理情况下,ADF和g-actin在肾小管上皮细胞内呈弥散分布。缺血损伤使ADF激活并向顶侧区聚集,解聚微绒毛轴心的F-actin束,出现该处g-actin的浓集,造成微绒毛肌动蛋白骨架的破坏,出现微绒毛的断裂、脱落等病理变化。

关键词：缺血 g-actin 肌动蛋白解聚因子肌动蛋白细胞骨架

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弱极低频磁场对actin骨架组装效率的频率窗口效应初探

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生物化学与生物物理进展 2015年第8期42卷 758-769页

作者：杜娟吴霞齐红新宋维涛王志丹饶凌月张三军陈树德夏若虹华东师范大学物理系生物物理实验室上海200241 华东师范大学物理系光学实验室上海200241 华东师范大学精密光谱科学与技术国家重点实验室上海200062

前期研究发现，50Hz弱磁场辐照能明显降低细胞的微丝含量和组装效率，对actin骨架形态也有明显影响．电磁生物学效应是否与辐照场频率相关，一直受到研究者的关注．单体球状肌动蛋白（g—actin）是带电结构，电磁场频率会影响其振荡频... 详细信息

前期研究发现，50Hz弱磁场辐照能明显降低细胞的微丝含量和组装效率，对actin骨架形态也有明显影响．电磁生物学效应是否与辐照场频率相关，一直受到研究者的关注．单体球状肌动蛋白（g—actin）是带电结构，电磁场频率会影响其振荡频率并对微丝聚合效率产生影响．本文从细胞骨架形态和蛋白质两层次，采用免疫荧光技术考察0．4mT，在35～140Hz范围内5个频率的极低频磁场（ELF-MF）对FL细胞中纤维状肌动蛋白（F-actin）含量的影响，并采用荧光共振能量转移技术（FRET）验证效应最明显的频率对离体g-actin组装效率的干扰程度．结果显示，相比假辐照组，细胞中F—actin含量在50Hz辐照组下降T（34．66±3．141％，110Hz次之，而另外3组（35、70和140Hz）无显著性差异．同时利用FRET方法验证，在50Hz磁场辐照下，离体环境中***组装成***的效率较假辐照组、35和70Hz组显著降低．经初步分析，g-actin在弱ELF—MF中受到以洛伦兹力和感生电场力的合力为主的相关电磁力干扰，致使组装效率下降，且由于工频磁场周期与微丝组装周期的特殊相干性，在50Hz频率附近可能存在一个外磁场干扰actin骨架组装的频率窗口．

关键词：工频磁场磁场频率 g-actin F—actin 洛伦兹力感生电场力

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母体双酚A暴露对子鼠神经发育影响的探究

母体双酚A暴露对子鼠神经发育影响的探究

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作者：杜晓敏中国医科大学

学位级别：硕士

目的:双酚A(bisphenol A,BPA;学名2,2二丙烷)是一种常见的环境内分泌干扰物,可通过扰乱人体或生物体内自身激素的合成、分泌、转运及代谢等过程从而对人体的内分泌、神经、生殖和免疫系统等产生影响。研究指出,双酚A对发育中的中枢神经... 详细信息

目的:双酚A(bisphenol A,BPA;学名2,2二丙烷)是一种常见的环境内分泌干扰物,可通过扰乱人体或生物体内自身激素的合成、分泌、转运及代谢等过程从而对人体的内分泌、神经、生殖和免疫系统等产生影响。研究指出,双酚A对发育中的中枢神经系统神经元起类似雌激素的作用,参与了神经元的生长、发育、成熟从而影响了神经元之间的连接,进而导致了一系列神经系统相关的症状。然而其中的剂量-效应关系目前尚无确切一致的结论,而孕期母体双酚A暴露的研究主要集中在海马及甲状腺等脏器,其中对小脑神经元影响的研究尚未见明确的报道,本实验模拟自然接触环境,采用经水口服建立妊娠期不同浓度BPA暴露模型,通过神经发育行为学、免疫组化及Westernblot等方法探究母体双酚A暴露是否影响了子鼠小脑神经元的发育及其相关机制。方法:实验共分4组,实验动物为SD大鼠(每组10只,其中高剂量组11只),每组分别给予双酚A剂量为0、0.5、5.0、50mg/kg·day,其中对照组给予等量双蒸水。暴露时间为自确认大鼠怀孕至分娩,每天称量孕鼠体重,计算所需双酚A量。仔鼠出生后在相应时间进行平面翻正、负趋地性和旋转杆测试;免疫组化检测仔鼠小脑组织神经元树突特异性标志物微管相关蛋白MAP2表达;Westernblot检测小脑神经元中细胞骨架蛋白F-actin、g-actin的表达,了解其表达情况;检测肌动蛋白结合蛋白:脑发育调节蛋白Drebrin、丝切蛋白Cofilin及其磷酸化状态P-cofilin的表达;结果:在平面翻正、负趋地性检测中:与对照组相比,各剂量组达标所需时间(s)差异虽无统计学差异,但用时均延长,且呈现线性关系,即暴露剂量越高相应达标时间越长,各暴露剂量组组内雌雄比较差异无统计学意义。在旋转杆测试中:匀速时与对照组相比,暴露剂量组停留时间均大于对照组;但是匀加速时,各剂量组停留时间均缩短,并呈现出剂量-效应关系,各暴露剂量组组内雌雄比较差异无统计学意义。免疫组化分析:在各时间点,各暴露剂量组组间比较MAP2表达有统计学意义(P=0.047,P=0.001,P=0.017)。进一步组间多重比较,在子鼠PND7日龄,高剂量暴露组与对照组及低剂量暴露组相比MAP2表达均明显降低(P=0.013,P=0.021),差异有统计学意义。在子鼠PND14日龄,与对照组相比,各暴露剂量组MAP2表达均明显降低(P=0.001,P=0.046,P=0.000),差异有统计学意义;高剂量暴露组MAP2表达明显低于中剂量暴露组(P=0.035),差异有统计学意义。在子鼠PND21日龄时高、中暴露剂量组MAP2表达明显低于对照组(P=0.045、P=0.003),差异有统计学意义;高暴露剂量组MAP2表达明显低于低剂量暴露组(P=0.034)差异有统计学意义。在子鼠PND7及21日龄,中剂量暴露组雌性子鼠MAP2表达明显高于雄性(P=0.006,P=0.021,P=0.042);在子鼠PND14日龄,雌性子鼠MAP2表达明显低于雄性(P=0.021)。Westernblot:与对照组相比,各剂量暴露组F-actin表达呈下降趋势,而g-actin基本不变;与对照组相化,各剂量暴露组cofilin表达均升高,而Drebrin、p-cofilin表达下降(P<0.05),差异有统计学意义。结论:1:母体双酚A暴露对子鼠的平衡、运动、协调和感觉等基本行为功能产生不良影响;2:母体双酚A暴露对子鼠小脑神经元树突早期发育产生不良作用,并在一定水平上呈现出剂量依赖性;3:母体双酚A暴露影响了子鼠小脑神经元细胞骨架蛋白的聚合状态,影响了肌动蛋白结合蛋白的表达水平。4:母体双酚A暴露的子鼠小脑神经元细胞骨架蛋白的聚合状态改变可能与肌动蛋白结合蛋白的表达水平改变有关

关键词：大鼠双酚A 神经元 MAP-2 F-actin g-actin Drebrin Cofilin P-cofilin

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gPER1基因敲除对癫痫大鼠海马突触可塑性的影响

GPER1基因敲除对癫痫大鼠海马突触可塑性的影响

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作者：张贤宁夏医科大学

学位级别：硕士

第一部分gPER1-KO对癫痫大鼠再认记忆的影响目的观察gPER1-KO后对癫痫大鼠再认记忆的影响。方法①动物分组:选取SPF级健康雄性2月龄SD大鼠(wild type,WT)和gPER1-KO大鼠各12只,分别随机分为:对照组(WT group)、癫痫14 d(WT-SE 14 d gro... 详细信息

第一部分gPER1-KO对癫痫大鼠再认记忆的影响目的观察gPER1-KO后对癫痫大鼠再认记忆的影响。方法①动物分组:选取SPF级健康雄性2月龄SD大鼠(wild type,WT)和gPER1-KO大鼠各12只,分别随机分为:对照组(WT group)、癫痫14 d(WT-SE 14 d group)及 gPER1-KO 对照组(gPER1-KO group)、gPER1-KO 癫痫 14 d(gPER1-KO-SE 14 d group);②采用氯化锂-匹罗卡品制备癫痫模型;③采用Intellicage智能行为学检测系统对各组大鼠再认记忆进行检测,通过设定对应的程序模块,来测定各组大鼠在鼻触学习、角落位置学习以及角落位置逆转学习、灯光吸引阶段、惩罚(逆转)学习这几个过程中的再认记忆变化情况。结果Intellicage行为学检测结果:a.自由探索阶段(适应阶段,3 d):各组大鼠都能正常活动,都能成功喝到水,WT组、gPER1-KO组、WT-SE 14 d组及gPER1-KO14 d组大鼠访问角落次数和鼻触次数无统计学差异(P>0.05)。b.鼻触学习阶段(7 d):①与WT组比较,gPER1-KO组鼻触学习阶段访问角落次数与鼻触次数无显著性差异(P>0.05);②与WT组比较,WT-SE 14 d组访问角落次数和鼻触次数减少(PgPER1-KO组比较,gPERI-KO-SE 14 d组访问角落次数和鼻触次数减少(PgPER1-KO-SE 14 d组访问角落次数和鼻触次数明显减少(PgPER1-KO组此阶段访问正确角落次数无显著性差异(P>0.05);②与WT组比较,WT-SE 14 d组访问正确角落次数减少(PgPER1-KO组比较,gPER1-KO-SE 14 d组访问正确角落次数减少(PgPER1-KO-SE 14 d组访问正确角落次数更少(PgPER1-KO组此阶段访问灯光角落次数无显著性差异(P>0.05);②与WT组比较,WT-SE 14 d组访问灯光角落次数减少(PgPER1-KO组比较,gPER1-KO-SE 14 d组访问灯光角落次数明显减少(PgPER1-KO-SE 14 d组访问灯光角落次数更少(PgPER1-KO组此阶段鼻触正确角落的次数无显著性差异(P>0.05);②与WT组比较,WT-SE 14 d组鼻触正确角落的次数减少(PgPER1-KO组比较,gPER1-KO-SE 14 d组鼻触正确角落的鼻触次数减少(PgPER1-KO-SE 14组鼻触正确角落次数更少(PgPER1-KO对癫痫大鼠突触可塑性的影响目的探究癫痫发生发展过程中,gPER1-KO对大鼠海马突触可塑性的影响。方法①动物分组:选取SPF级健康雄性2月龄SD大鼠和gPER1-KO大鼠各90只,分别随机分为 WT group、WT-SE 1 d group、WT-SE 3 d group、WT-SE 7 d group、WT-SE 14 d group 及 gPER1-KO group、gPER1-KO-SE 1 d group、gPER1-KO-SE 3 d group、gPER1-KO-SE 7 d group、gPER1-KO-SE 14 d group;②模型制作方法同实验一,用脑电监测仪监测癫痫发作时皮层脑电波(electroencephalograph,EEg)的变化;③尼氏染色观察各组大鼠海马神经元形态、数目和尼氏体变化;④Timm染色评估各组大鼠海马苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting,MFS)程度;⑤golgi染色观察各组大鼠海马神经元树突复杂性及树突棘密度的改变;⑥在癫痫14 d,应用膜片钳记录大鼠海马Schafer侧支通路,TBS诱导前后fEPSP Slope变化,并分析schafer侧支的LTP变化;⑦电镜观察各组大鼠海马CA1、CA3和Dg区神经元超微结构及突触形态结构的变化。结果 ①EEg监测结果:WT组与gPER1-KO组未见癫痫波,WT-SE组和gPER1-KO-SE组均可见明显的癫痫波,对癫痫波进行傅里叶转换分析显示在3 Hz-12 Hz范围可见功率异常增高的脑电波,此功率异常增高的

关键词： gPER1-KO 癫痫突触可塑性 F-actin g-actin

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