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G蛋白偶联受体75信号通路在20-羟二十烷四烯酸诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

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中国病理生理杂志 2022年第1期38卷 65-73页

作者：刘娇莉吉雨恬毛凌郭立荣韩勇遵义医科大学生理学教研室贵州遵义563000

目的:探讨G蛋白偶联受体75(g-protein-coupled receptor 75,gPR75)介导的PLC/PKC信号通路在20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用慢病毒转染敲减乳鼠心肌细胞gPR75基因表达;RT-q PCR和Western blot检测gPR75 m RNA及细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)和caspase-3蛋白表达;ELISA法检测三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP_(3))含量以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)和NADPH氧化酶活性;Fluo-3/AM探针法检测细胞内Ca^(2+)浓度;二氢乙啶(dihydroethidine,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的含量;TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:在培养的乳鼠心肌细胞中,gPR75在m RNA及蛋白水平均有表达,且20-HETE具有促进细胞内gPR75表达的作用(PgPR75或应用磷脂酶C(phospholipase C,PLC)抑制剂U73122可显著阻断20-HETE的如上效应,细胞内IP;含量降低(PgPR75表达、应用PLC抑制剂以及IP_(3)受体阻断剂2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)预处理,可抑制20-HETE诱导的细胞内Ca^(2+)浓度升高(PgPR75表达、应用PKC抑制剂gF109203X或NADPH氧化酶抑制剂apocynin处理后,20-HETE诱导的细胞内ROS生成被抑制(PgPR75表达可降低20-HETE作用的细胞中PKC、NADPH氧化酶的活性(PgPR75表达、应用U73122或gF109203X,均可减少20-HETE诱导的心肌细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Cyt C和caspase-3的表达(PgPR75介导的PLC/PKC信号通路通过引起心肌细胞钙超载、ROS生成增多,参与了20-HETE诱导的乳鼠心肌细胞凋亡进程。

关键词： 20-羟二十烷四烯酸 G蛋白偶联受体75 钙超载活性氧簇心肌细胞细胞凋亡

20-HETE通过gPR75受体偶联g_(αq)信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的作用

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遵义医科大学学报 2024年第4期47卷 361-370页

作者：刘恋恋吉雨恬刘娇莉韩婧怡李开远张淳韩勇遵义医科大学基础医学院生理学教研室贵州遵义563099

目的探讨gPR75受体偶联g_(αq)信号通路在20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡中的作用与机制。方法 H9c2心肌细胞采用慢病毒载体干扰gPR75表达,敲减效率通过RT-qPCR和Western blot法检测;ELISA法检测IP_(3)及cAMP含量;TUNEL法评估细胞凋亡... 详细信息

目的探讨gPR75受体偶联g_(αq)信号通路在20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡中的作用与机制。方法 H9c2心肌细胞采用慢病毒载体干扰gPR75表达,敲减效率通过RT-qPCR和Western blot法检测;ELISA法检测IP_(3)及cAMP含量;TUNEL法评估细胞凋亡率;分别使用Fluo-4/AM、DHE和JC-1荧光探针检测细胞内Ca^(2+)浓度、ROS含量以及线粒体膜电位(ΔΨm)水平;Western blot检测EgFR、ERK1/2、AKT、gSK3β、Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果慢病毒载体shgPR75转染后,H9c2心肌细胞gPR75受体mRNA和蛋白表达分别降低67.16%和63.99%(PgPR75表达或应用AAA阻断其作用,显著抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡(P蛋白Bax、Cyt C、Caspase-3蛋白表达增高(P0.05),而敲减gPR75表达、应用AAA或者PLC信号通路阻断剂U73122预处理后,可显著阻断细胞内IP_(3)生成(PgPR75表达、应用AAA或者U73122预处理后,明显抑制20-HETE诱导的Ca^(2+)浓度升高和ROS生成效应(PgPR75受体下游调控关键蛋白EgFR、ERK1/2、AKT、gSK3β磷酸化水平明显升高(PgPR75表达或应用AAA可有效阻断20-HETE上述效应(PgPR75受体偶联的g_(αq)蛋白及其介导的PLC、EgFR/ERK1/2/AKT/gSK3β信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡。

关键词： 20-羟二十烷四烯酸 G蛋白偶联受体75 g_(αq)蛋白心肌细胞凋亡

敲减G蛋白偶联受体75表达抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡

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中国病理生理杂志 2020年第3期36卷 421-426页

作者：毛凌陆光金唐清清李小红任啟旭韩勇陈远寿遵义医科大学生理学教研室贵州遵义563000

目的:探讨G蛋白偶联受体75(gPR75)对20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法:慢病毒转染敲减H9c2心肌细胞gPR75基因表达;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-qPCR法检测gPR75以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的mRNA表达;J... 详细信息

目的:探讨G蛋白偶联受体75(gPR75)对20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法:慢病毒转染敲减H9c2心肌细胞gPR75基因表达;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-qPCR法检测gPR75以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的mRNA表达;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测gPR75、Bcl-2、Bax及细胞色素C(CytC)蛋白表达;发色底物法检测caspase-3的活性。结果:H9c2心肌细胞在mRNA及蛋白水平均表达gPR75,敲减gPR75抑制了20-HETE诱导的细胞凋亡(PgPR75阻断了20-HETE诱导的Bax和CytC表达上调以及caspase-3活性增高作用(PgPR75介导引起线粒体功能紊乱,诱导H9c2心肌细胞凋亡。

关键词： 20-羟二十烷四烯酸 G蛋白偶联受体75 细胞凋亡线粒体功能紊乱心肌细胞

CBP/P300介导的PTIP乙酰化可能促进下游肿瘤相关基因CCDC121和gPR75的转录

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中国生物化学与分子生物学报 2019年第2期35卷 205-211页

作者：钟燕燕王嘉东北京大学基础医学院放射医学系系统生物医学研究所北京100191

PTIP (Pax transactivation domain-interacting protein,PAXIP1)蛋白参与MLL3 (lysine methyltransferase 2C,KMT2C)/MLL4(lysine methyltransferase 2B,KMT2B)组蛋白H3K4甲基转移酶复合体,促进基因的转录激活。但关于PTIP蛋白的乙酰化修饰及人宫颈癌细胞中PTIP转录激活靶基因的研究尚无报道。本研究以稳定表达SFB-PTIP蛋白的293T细胞株为对象,通过免疫沉淀和Western印迹法发现,PTIP蛋白能够发生乙酰化修饰,乙酰转移酶CBP/P300介导PTIP蛋白的乙酰化过程,CBP是主要乙酰转移酶。去乙酰化酶HDAC1/2/3介导PTIP蛋白的去乙酰化过程。选择性HDAC1-3抑制剂MS-275促进PTIP蛋白乙酰化水平上升,且呈剂量和时间依赖性。以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,RNA-seq和RT-qPCR证明,CCDC121 (coiled-coil domain containing121)和G蛋白偶联受体75 (g protein-coupled receptor 75,gPR75)是PTIP的转录激活靶基因(P75介导的蛋白质乙酰化水平上升,促进基因CCDC121和gPR75的mRNA转录呈现不同程度的剂量依赖性上升(P75有可能是通过促进PTIP蛋白的乙酰化水平,促进CCDC121和gPR75的转录。但其详细机制有待进一步研究。本研究对今后深入探讨PTIP乙酰化修饰对下游肿瘤相关基因转录的调节和功能,如肿瘤发生、进展等方面的调控机制提供了基础。

关键词： PTIP蛋白乙酰化转录激活 CCDC121 G蛋白偶联受体75

20-HETE作用受体的发现及其对高血压的影响

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中国病理生理杂志 2018年第12期34卷 2294-2299页

作者：毛凌贾蝉忆贺滟韩勇遵义医学院基础医学院生理教研室贵州遵义563000

花生四烯酸(arachidonic acid,AA)可通过环氧合酶和脂氧合酶代谢途径生成白三烯类、前列腺素类和血栓素类等物质[1]。近年研究发现,AA经过细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)代谢途径中的表氧化酶作用可生成环氧二十碳四烯酸(epoxyeicos... 详细信息

花生四烯酸(arachidonic acid,AA)可通过环氧合酶和脂氧合酶代谢途径生成白三烯类、前列腺素类和血栓素类等物质[1]。近年研究发现,AA经过细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)代谢途径中的表氧化酶作用可生成环氧二十碳四烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs),经过羟化酶作用生成羟基二十碳四烯酸(hydroxyeicosatetraeonic acids,HETEs),如20-羟基二十碳四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)。

关键词： 20-羟基二十碳四烯酸 G蛋白偶联受体75 心血管疾病高血压

gPR75受体介导20-HETE信号通路对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

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国际泌尿系统杂志 2021年第6期41卷 968-972页

作者：赵华姚硕刘丽天津市北辰医院内镜科 300400 天津市北辰区双街镇社区卫生服务中心 300400

目的探讨G蛋白偶联受体75(gPR75)受体介导20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)信号通路对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养PC-3雄激素非依赖性前列腺癌细胞系,未经干预为对照组,细胞转染敲减gPR75受体为shgPR75... 详细信息

目的探讨G蛋白偶联受体75(gPR75)受体介导20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)信号通路对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法体外培养PC-3雄激素非依赖性前列腺癌细胞系,未经干预为对照组,细胞转染敲减gPR75受体为shgPR75组,20-HETE干预为20-HETE组,细胞转染敲减gPR75联合20-HETE干预为shgPR75+20-HETE组。采用Western blot检测各组gPR75表达情况,采用四唑盐比色法(MTT)观察PC-3细胞增殖情况,采用Transwell检测PC-3细胞侵袭能力,采用划痕实验检测PC-3细胞迁移能力。结果对照组gPR75蛋白表达量为(1.04±0.13),shgPR75组为(0.42±0.03),20-HETE组为(1.27±1.20),shgPR75+20-HETE组为(0.68±0.07),四组gPR75蛋白表达水平整体比较差异有统计学意义(PgPR75组为(40.33±4.60)%,20-HETE组为(88.50±12.61)%,shgPR75+20-HETE组为(54.38±6.70)%,四组PC-3细胞存活率整体比较,差异具有统计学意义(F=30.269,PgPR75组为(62.30±7.20)个,20-HETE组为(123.57±18.90)个,shgPR75+20-HETE组为(80.11±10.61)个,四组侵袭能力整体比较,差异有统计学意义(PgPR75组为(86.24±10.60)个,20-HETE组为(170.93±24.78)个,shgPR75+20-HETE组为(113.65±16.01)个,四组差异有统计学意义(PgPR75受体可降低20-HETE的促癌作用。

关键词：前列腺肿瘤 G蛋白偶联受体75 20-羟二十烷四烯酸细胞运动