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山东医药 2017年第14期57卷 77-79页

作者：安丰杨继宏崔振宇师晓强刘明锴郭景阳王洪福河北大学附属医院河北保定071000 华北石油总医院

目的探讨肾细胞癌(RCC)组织中g蛋白信号转导调节因子4(RgS4)的表达变化及其与RCC患者临床病理特征的关系。方法收集120例RCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化染色及Western blot法检测RgS4蛋白表达,RT-PCR法检测RgS4 mRNA表... 详细信息

目的探讨肾细胞癌(RCC)组织中g蛋白信号转导调节因子4(RgS4)的表达变化及其与RCC患者临床病理特征的关系。方法收集120例RCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化染色及Western blot法检测RgS4蛋白表达,RT-PCR法检测RgS4 mRNA表达,分析不同临床病理特征的RCC患者癌组织RgS4蛋白表达变化。结果免疫组化染色示,RgS4特异性表达于肾细胞的细胞质中,在癌旁组织中为浅黄色,在癌组织中为深黄色。癌旁组织、RCC癌组织中RgS4蛋白表达阳性率分别为24.2%、37.5%,RCC癌组织中RgS4蛋白表达阳性率高于癌旁组织(PgS4蛋白表达量分别为0.66±0.03、1.02±0.03,RCC癌组织RgS4蛋白表达量高于癌旁组织(PgS4 mRNA表达量分别为0.93±0.04、1.67±0.04,RCC癌组织RgS4 mRNA表达量高于癌旁组织(PgS4表达率显著高于轻度浸润的患者(PgS4表达增高,并随浸润程度增加表达率显著升高,参与RCC的发生发展。

关键词：肾细胞癌癌组织 g蛋白信号转导调节因子4 g蛋白

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实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）树鼩模型的建立及其初步应用

实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）树鼩模型的建立及其初步应用

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作者：胡开娇重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景与目的自身免疫性葡萄膜炎是世界范围内的一种常见致盲性眼病,其发生与免疫反应紊乱有关。尽管葡萄膜炎狭义地被认为是虹膜、睫状体及脉络膜的炎症,但实际上是指包含视网膜、脉络膜、玻璃体、视神经、巩膜和角膜等整个眼球组织... 详细信息

研究背景与目的自身免疫性葡萄膜炎是世界范围内的一种常见致盲性眼病,其发生与免疫反应紊乱有关。尽管葡萄膜炎狭义地被认为是虹膜、睫状体及脉络膜的炎症,但实际上是指包含视网膜、脉络膜、玻璃体、视神经、巩膜和角膜等整个眼球组织的炎症,特别是视网膜和脉络膜是其受累主要的部位。既往研究发现,在自身免疫性葡萄膜炎中,外来抗原或视网膜抗原等危险信号激活天然免疫细胞（如眼局部的小胶质细胞,外周单核巨噬细胞和树突状细胞等）,导致血眼屏障破坏,激发眼组织内获得性免疫反应导致眼内炎症和眼组织破坏,由此导致患者视力损伤是眼视科学研究的重要课题。由于受伦理道德和法律限制,难以直接利用人体深入研究葡萄膜炎的发病机制和防治策略。因此,实验性自身免疫性葡萄膜炎（Experimental Autoimmune Uveoretinitis,EAU）动物模型则为人类葡萄膜炎发病机制和治疗防治研究提供了有效手段。目前广泛用于人类自身免疫性葡萄膜炎的动物模型主要为由视网膜抗原如光感受器间维生素A类结合蛋白（Interphotoreceptor retinoid-binging protein,IRBP）诱导易感Lewis大鼠、B10RⅢ小鼠和C57BL/6J小鼠而形成的实验性自身免疫性葡萄膜炎。例如,应用源于人IRBP1169-1191抗原肽R14可诱导Lewis大鼠呈现依赖Th1细胞免疫反应的慢性自发复发-消退性葡萄膜炎。然而,在Lewis大鼠眼组织内缺乏色素上皮细胞,大鼠EAU模型不能反映人类色素上皮细胞在葡萄膜炎中的参与作用;在B10RⅢ小鼠和C57BL/6J小鼠EAU模型中,虽然B10RIII小鼠和C57BL/6J小鼠EAU表现人类葡萄膜炎的主要特征,但在这两种小鼠的视网膜组织结构中缺乏人类主要由视锥细胞组成的视网膜中央凹,无法模拟人类中央凹视锥细胞在自身免疫反应中对视力损伤的作用。树鼩作为一种新型的模式动物,与人类在生理机能、生化代谢和基因组学等方面的相似性远高于大鼠、小鼠等实验动物,被认为是灵长类动物的近亲。另外,树鼩作为昼行性动物,在视觉系统、色彩分辨能力和眼睛构造等方面比啮齿类更接近于人类。如在眼组织解剖结构方面,树鼩视网膜光感受器细胞由具有高达95%的视锥细胞和5%的视杆细胞组成视网膜,而这些高密度的视锥细胞位于视网膜中央,类似于人类视网膜中央凹,提示树鼩将可能成为研究人类葡萄膜炎的潜在可靠的模式动物。在我们课题组前期研究中,已应用人R14和树鼩IRBP1197-1211肽段初步建立起EAU树鼩模型,但其生物学特征和干预应用有待进一步研究。因此,我们以前期建立的树鼩IRBP1197-1211抗原肽诱导的树鼩EAU作为对照,进行下述三方面内容研究:（1）筛选诱导树鼩EAU发生的其他可能抗原和免疫条件:在添加或不添加百日咳毒素的两种条件下,应用包含不同浓度的树鼩IRBP1177-1191（R16）、树鼩IRBP1169-1191（R14）、牛R14、牛R16和树鼩IRBP1197-1211的抗原肽弗式完全佐剂（Complete Freund’s adjuvant,CFA）乳化物经皮下免疫树鼩,免疫后使用裂隙灯显微镜和眼底镜观察眼内炎症发生,在炎症高峰期或仁慈终点收集眼球进行病理组织学评价,观察眼组织病理损伤,筛选建立树鼩EAU发生的诱导条件;（2）将筛选出的抗原通过低,中,高四种浓度（50μg低剂量,300μg或400μg中剂量,800μg高剂量）分别免疫树鼩,通过临床表现、组织病理学切片、苏木素伊红（H＆E）染色、免疫组织化学染色、转录组RNA测序（RNA-seq）、T淋巴细胞增殖、流式荧光微球等技术,鉴定和评价树鼩EAU的临床表现、组织病理学损伤、免疫表型以及基因表达谱等特征;（3）应用RNA-seq测序筛选出的上调表达差异基因RgS4抑制剂CCg 203769和中成药双氢青蒿素对EAU模型的干预研究,评价其应用效果。通过上述研究,以期阐明实验性自身免疫性葡萄膜炎树鼩模型的创建条件、模型特征和应用效果,为葡萄膜炎的发病机制和防治研究提供一种新的理想策略。第一部分筛选建立树鼩EAU模型的诱导条件方法1.应用低剂量50μg和100μg的树鼩R14、树鼩R16、牛R16共三种抗原肽,经包含1mg/ml或5mg/ml结核分枝杆菌（H37Ra）的CFA形成乳化物200μl经皮下免疫树鼩,腹腔不注射百日咳毒素（Pertussis Toxin,PTX）;2.应用50μg低剂量、800μg高剂量的树鼩R14、树鼩R16、牛R14三种抗原肽,经包含3.5–5 mg/ml结核分枝杆菌的CFA形成乳化物200μl通过皮下免疫树鼩,腹腔注射1000 ng的PTX。同时,应用课题组前期筛选出的树鼩IRBP1197-1211多肽按相同剂量和免疫方式诱导树鼩作为阳性对照。免疫后7天

关键词：实验性自身免疫性葡萄膜炎慢性树鼩差异表达基因代谢途径小胶质细胞 T细胞反应 g蛋白信号转导调节因子4

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