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粘细菌转录因子frua与结合蛋白FruB协同参与发育基因的调控

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Acta Genetica Sinica 2000年第6期27卷 556-562页

作者：毛晓华丁蕾汪道涌南京铁道医学院生化教研室南京210009

粘细菌中一系列发育相关基因受到转录因子frua的调节。用亲和层析法从粘细菌分离出另一种与frua结合的蛋白因子FruB。实验表明，FruB可以被粘细菌细胞膜上的蛋白激酶磷酸化，磷酸化后的FruB与frua形成复合物，此复合物通过与靶基因顺式... 详细信息

粘细菌中一系列发育相关基因受到转录因子frua的调节。用亲和层析法从粘细菌分离出另一种与frua结合的蛋白因子FruB。实验表明，FruB可以被粘细菌细胞膜上的蛋白激酶磷酸化，磷酸化后的FruB与frua形成复合物，此复合物通过与靶基因顺式元件的结合来调节基因的表达。有助于深入理解frua对发育相关基因的调节作用机制。

关键词： frua FruB 发育基因调控粘细菌

粘细菌转录因子frua的表达、纯化及调控作用

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微生物学报 2000年第2期40卷 121-125页

作者：毛晓华丁蕾南京铁道医学院生化教研室南京210009

frua是粘细菌(Myxocoxccusxanthus)发育所必需的转录因子,影响着一系列发育特异性基因的表达。在大肠杆菌中表达了带组氨酸标记的frua,并用镍离子层析进行快速分离纯化。凝胶阻滞试验提示frua对靶基因的调控可能需要其它因子的参与。

关键词： frua 粘细菌基因表达基因调控发育

黄色黏细菌frua mRNA 5′非翻译区正性调节其自身基因的表达

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科学通报 2004年第20期49卷 2066-2071页

作者：吴倩毛晓华东南大学基础医学院遗传与发育生物学系发育与疾病相关基因教育部重点实验室南京210009

黏细菌是研究多细胞结构形态发生机制的良好模型.frua是黏细菌发育所必需的一种转录因子,其mRNA5′端存在相当长的由235个核苷酸组成的非翻译区(5′-UTR).以lacZ为报告基因,构建保留或缺失5′-UTR的frua-lacZ翻译融合载体并在染色体att... 详细信息

黏细菌是研究多细胞结构形态发生机制的良好模型.frua是黏细菌发育所必需的一种转录因子,其mRNA5′端存在相当长的由235个核苷酸组成的非翻译区(5′-UTR).以lacZ为报告基因,构建保留或缺失5′-UTR的frua-lacZ翻译融合载体并在染色体attB位点定点整合.5′-UTR自+4～+220缺失后frua-lacZ在发育阶段几乎不表达,说明完整的5-′UTR为frua表达所必需.二级结构预测显示,该区域可形成高度稳定的3螺旋接合结构,可能是蛋白因子的结合位点或存在调节frua表达的顺式元件.因此,frua发育特异性表达受其5′-UTR的正性调控.

关键词：黏细菌 5′-UTR frua 土壤菌模式生物

黄色黏细菌转录因子frua对自身基因的表达不具自调节作用

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第3期23卷 205-211页

作者：郑颖毛晓华东南大学基础医学院发育与疾病相关基因教育部重点实验室南京210009

粘细菌是研究多细胞结构形态发生机制的良好模型.frua是粘细菌发育所必需的一种关键性转录因子,调节一系列发育相关基因的表达,本文研究frua对自身基因是否存在反馈调节从而导致发育后期frua表达水平的下调.以野生型粘细菌模式菌株DK162... 详细信息

粘细菌是研究多细胞结构形态发生机制的良好模型.frua是粘细菌发育所必需的一种关键性转录因子,调节一系列发育相关基因的表达,本文研究frua对自身基因是否存在反馈调节从而导致发育后期frua表达水平的下调.以野生型粘细菌模式菌株DK1622为基础构建frua基因敲除突变株DK1622Δfrua,再将frua-lacZ转录融合载体pMF1A整合入frua突变株染色体attB,获得重组菌株DK1622Δfrua/pMF1A,通过检测β-半乳糖苷酶活性来确认frua对自身基因的表达水平是否有影响.结果表明frua调控序列完整的frua-lacZ转录融合体β-半乳糖苷酶活性在DK1622/pMF1A和DK1622Δfrua/pMF1A之间无明显差异,即frua表达产物作为一种转录因子对自身基因的转录没有调节作用,黏细菌发育后期frua表达水平的下降存在其它调节机制.

关键词：黏细菌发育 frua 调节

frua基因对伤寒沙门菌侵袭力和生物膜形成的影响

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华中师范大学学报（自然科学版） 2023年第2期57卷 255-261页

作者：党娟娟唐浩靳梦彤占子阳汤新逸张盈黄新祥江苏大学医学院江苏镇江212013

为探究frua对伤寒沙门菌生长、毒力及生物膜形成的影响,利用pBAD33制备frua的高表达菌株(WT-pfrua)及其空载体对照菌株(WT-pBAD33).通过细菌的生长曲线测定、泳动试验、T84细胞侵袭实验以及96孔微量板结晶紫染色法分别检测frua对伤寒沙... 详细信息

为探究frua对伤寒沙门菌生长、毒力及生物膜形成的影响,利用pBAD33制备frua的高表达菌株(WT-pfrua)及其空载体对照菌株(WT-pBAD33).通过细菌的生长曲线测定、泳动试验、T84细胞侵袭实验以及96孔微量板结晶紫染色法分别检测frua对伤寒沙门菌生长、毒力及生物膜形成的影响;同时应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析frua对伤寒沙门菌毒力及生物膜相关基因的调控作用.结果显示,成功制备了伤寒沙门菌的WT-pfrua及其WT-pBAD33,发现高表达frua后,伤寒沙门菌的生长无明显变化、运动能力增强、侵袭力上升、生物膜形成能力增加;同样地,与WT-pBAD33相比,WT-pfrua中动力、侵袭及生物膜相关基因的转录水平明显上调.综上,frua基因可增强伤寒沙门菌的毒力及生物膜形成,并对其相关表型基因起正调控作用.

关键词：伤寒沙门菌 frua 毒力生物膜

frua基因对伤寒沙门菌的AI-2内化及毒力调节的初步研究

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fruA基因对伤寒沙门菌的AI-2内化及毒力调节的初步研究

作者：党娟娟江苏大学

学位级别：硕士

目的:伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,***)是肠杆菌科中人类特异性的肠道致病菌。磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)不仅是重要的糖转运系统,还影响细菌的毒力调节。AI-2(Autoinducer-2)是细菌种间交流的... 详细信息

目的:伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,***)是肠杆菌科中人类特异性的肠道致病菌。磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)不仅是重要的糖转运系统,还影响细菌的毒力调节。AI-2(Autoinducer-2)是细菌种间交流的通用信号分子,参与调节细菌的多种生物学行为。有研究称,PTS有助于AI-2的早期内化。本课题经***两种菌株的转录组分析发现,lux S缺失能引起PTS中糖转运相关基因的m RNA水平变化,其中果糖转运蛋白的编码基因frua在***中尚未有过研究。本论文以PTS中的frua为研究对象,探索该基因在***信号分子AI-2内化过程中发挥的作用,以及frua对***毒力和生物膜形成的影响及相关的分子调控机制。方法:1.转录组测序分析:基于***的野生株(WT)和lux S缺陷株(Δlux S)对肠上皮细胞侵袭力的表型差异,分别提取这两种菌株对数早期的RNA做转录组测序分析。***-PCR验证转录组测序结果:分别提取生长至对数早期的WT和Δlux S的RNA,用qRT-PCR的方法验证转录组结果中与细菌侵袭及PTS中糖转运相关基因的m RNA表达水平。3.构建相关菌株的缺失变异株:应用自杀质粒介导的同源臂重组法构建***及大肠埃希菌相关的缺失变异株,***的frua缺陷株(Δfrua)、lux S和frua的双缺陷株(Δlux SΔfrua)、lux S和lsr B的双缺陷株(Δlux SΔlsr B)以及大肠埃希菌BL21的lux S缺陷株(BL21Δlux S)。***-2的内化实验:利用哈氏弧菌BB170的化学发光实验检测不同时间点胞外AI-2信号分子的含量,从动力学水平上观测frua对AI-2内化的影响;通过qRT-PCR检测frua对已知AI-2内化相关操纵子lsr的调控作用;通过体外表达纯化获得的frua蛋白与AI-2的结合和释放试验,从蛋白水平上检测frua对AI-2内化的方式。***高表达株的制备:设计frua全长的特异性引物,利用质粒p BAD33构建高表达载体p BAD33-frua,并将阳性重组载体及p BAD33空载体电转入WT中,制备frua高表达菌株WT-pfrua及其空载体对照株WT-p BAD33。6.生长曲线的测定:将过夜培养的细菌转接至新的培养液中,从0 h开始监测,每隔1 h测量一次吸光度A的值,连续12 h,用所得数据绘制生长曲线图,观察frua对***生长活性的影响。7.泳动实验:将培养至对数早期的WT-pfrua和WT-p BAD33接种在0.3%的半固体培养基上,正置37℃孵箱中培养约10 h后取出,测量细菌在平板上的动力圈直径,分析frua对***泳动能力的影响。8.肠上皮细胞T84的侵袭实验:将WT-pfrua和WT-p BAD33培养至A约为0.4时,以MOI=20:1的比例加入细菌到T84细胞中与之共培养90 min,PBS冲洗2次。换新的含有100μg/m L庆大霉素的培养液继续孵育90 min,弃培养液用PBS冲洗干净,加入0.5%Triton X-100裂解细胞后涂于含氯霉素的LB固体平板上过夜培养,次日进行菌落计数,比较两个菌株对T84细胞侵袭力的差异。9.生物膜的形成实验:当WT-pfrua和WT-p BAD33在TSB培养基中生长至A=0.4左右时,将菌液转接至96孔U型培养板中。4天后用结晶紫染色并检测细菌在595 nm波长处的吸光度值A,分析生物膜的形成量。***-PCR检测动力、侵袭力及生物膜形成相关基因的转录水平:将WT-pfrua和WT-p BAD33培养至对数早期,通过Trizol法提取细菌RNA。用qRT-PCR分析frua对***动力、侵袭力及生物膜形成相关基因转录水平的影响。结果:1.转录组测序结果显示,与WT相比,Δlux S中共有差异表达基因383个,其中270个上调基因,113个下调基因。2.转录组测序结果验证,挑取与细菌侵袭prg K、org A、inv H、pag N、sip A、hil D及糖转运相关基因man Y、man Z、frua、tre B进行qRT-PCR的分析验证,该结果中的m RNA表达水平与转录组测序结果趋势大体一致。3.成功构建***的相关缺陷株Δfrua、Δlux SΔfrua、Δlux SΔlsr B以及大肠埃希菌BL21的缺陷株BL21Δlux S。***-2内化实验显示,从动力学水平观察,frua在前2 h对AI-2的内化起促进作用,该表型与qRT-PCR结果中frua对AI-2内化相关操纵子lsr起

关键词：伤寒沙门菌 frua AI-2内化毒力生物膜

粗细菌转录因子frua及其结合蛋白FruB协同参与发育相关基因的调控

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 372-373页

作者：毛晓华丁蕾汪道涌南京铁道医学院生化教研室江苏南京210009

黄色黏细菌发育基因frua表达调节的机制研究

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黄色黏细菌发育基因fruA表达调节的机制研究

酵母双杂交筛选黏细菌转录因子frua互作蛋白的研究

中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会

作者：郑颖毛晓华东南大学基础医学院遗传与发育生物学系生化教研室

目的: 粘细菌是研究原核生物多细胞结构形成机制的一种良好模型。frua是粘细菌发育所必需的转录因子,影响着其他一系列发育特异性基因的表达。前期工作发现frua mRNA5’-UTR对自身基因在发育时期的表达起正性调控作用,但尚不能确定5’-... 详细信息

目的: 粘细菌是研究原核生物多细胞结构形成机制的一种良好模型。frua是粘细菌发育所必需的转录因子,影响着其他一系列发育特异性基因的表达。前期工作发现frua mRNA5’-UTR对自身基因在发育时期的表达起正性调控作用,但尚不能确定5’-UTR是在转录后水平调节frua发育特异性表达,本文进一步研究5’-UTR调节

关键词：黏细菌 frua 5’-UTR 发育调节

来源： cnki会议评论

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酵母双杂交筛选黏细菌转录因子FruA互作蛋白的研究