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frizzled/lrp受体与ROR2受体在白血病细胞中的表达及其机制研究

中国肿瘤临床 2011年第11期38卷 612-616页

作者：李瑞燕胡艳妮顾晓艳徐酉华重庆医科大学附属儿童医院血液肿瘤科重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室重庆市400014

目的:探讨WNT信号通路中卷曲蛋白-低密度脂蛋白相关蛋白复合受体(frizzled/lrp)、酪氨酸激酶样孤独受体-2(ROR2)在淋巴细胞白血病发生发展中的作用。方法:实验分组:1)实验组1:急性淋巴细胞白血病骨髓(ALL);2)对照组1:特发性血小板减少... 详细信息

目的:探讨WNT信号通路中卷曲蛋白-低密度脂蛋白相关蛋白复合受体(frizzled/lrp)、酪氨酸激酶样孤独受体-2(ROR2)在淋巴细胞白血病发生发展中的作用。方法:实验分组:1)实验组1:急性淋巴细胞白血病骨髓(ALL);2)对照组1:特发性血小板减少性紫癜骨髓(ITP);3)实验组2:氯化锂作用后的Jurkat、K562和HL-60细胞株;4)对照组2:Jurkat、K562和HL-60细胞株。以RT-PCR方法从mRNA水平检测frizzled/lrp(FZD/lrp)受体、ROR2受体的表达;以Western blot方法从蛋白水平检测FZD-5和ROR2的表达;通过MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪检测细胞周期。结果:所有白血病细胞中均可见FZD-2、lrp-6和ROR2的表达,ROR2在HL-60细胞中的表达明显低于其他白血病细胞,其他各组受体表达水平未见差异;11例ITP骨髓标本中2例标本可见ROR2表达,FZD受体的表达与白血病细胞无显著性差异。氯化锂处理后,ROR2在Jurkat细胞中的表达明显减少,其他受体的表达未见显著性差异。重复MTT试验结果显示:不同浓度(5、10、20mmol/L)氯化锂(LiCl)对各组细胞均有增殖抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖性。氯化锂处理后,Jurkat和HL-60细胞周期与正常组相比G_1期和S期比例减少,G_2期增高,发生G_2/M期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度组K562的细胞周期未见明显差异。结论:ROR2在急性淋巴细胞白血病骨髓中的表达较其在ITP骨髓中的表达高,在Jurkat细胞株中有高表达,氯化锂作用后的Jurkat细胞中ROR2的表达明显减低,细胞增殖受抑制,提示ROR2可能与淋巴细胞白血病的发生有关。

关键词： WNT信号通路 ROR2受体 frizzled/lrp受体氯化锂白血病

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课题1 氯化锂对白血病细胞株中非经典WNT信号传导通路的作用机制研究课题2 川崎病病因与感染关系研究

课题1 氯化锂对白血病细胞株中非经典WNT信号传导通路的作用机制...

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作者：李瑞燕重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过对氯化锂处理前后的白血病细胞株中WNT受体表达的研究,探讨氯化锂对白血病细胞株中非经典WNT信号传导通路的作用及机制。方法:1将不同浓度氯化锂分别与Jurkat、K562、HL-60细胞进行共培养建立GSK-3β激酶阻断组细胞株;实... 详细信息

目的:通过对氯化锂处理前后的白血病细胞株中WNT受体表达的研究,探讨氯化锂对白血病细胞株中非经典WNT信号传导通路的作用及机制。方法:1将不同浓度氯化锂分别与Jurkat、K562、HL-60细胞进行共培养建立GSK-3β激酶阻断组细胞株;实验分组:实验组氯化锂处理后的Jurkat, K562, HL-60细胞株;空白对照组Jurkat, K562, HL-60细胞株;正常对照组特发性血小板减少性紫癜（ITP）。2 RT-PCR方法从基因水平检测各组细胞中frizzled-2、frizzled-5、frizzled-7、frizzled-8、lrp-6和ROR2 mRNA的表达。3 Western Blot方法从蛋白水平检测各组细胞中frizzled-5、ROR2的表达。4流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期。5 MTT法检测各组细胞的增值情况。结果:1筛选出最佳抑制效应的氯化锂浓度为40mmol/L,并成功构建了GSK-3β激酶阻断组细胞株。2在基因水平RT-PCR检测出,实验组、空白对照组及正常对照组中frizzled-2、frizzled-7、frizzled-8和lrp-6的表达水平均未见统计学差异;阻断前后的HL-60细胞、K562细胞及ITP单个核细胞中ROR2的表达水平未见统计学差异;而阻断后的Jurkat细胞株中ROR2的表达均较阻断前明显减低（P＜0.05）。3在蛋白水平Western Blot检测:ROR2在阻断前后的K562细胞、HL-60细胞及ITP单个核细胞中的表达水平未见统计学差异,而在阻断后Jurkat细胞株中的表达较阻断前明显减低（P＜0.05）。4流式细胞仪检测细胞周期结果:阻断后Jurkat细胞株的细胞周期与阻断前相比G1期和S期比例减少,G2期比例明显增高,提示G2期阻滞;而阻断前后的K562和HL-60细胞株的细胞周期未见明显差异。5 MTT检测细胞周期结果:阻断后Jurkat细胞株的增殖较阻断前明显减低,差异有统计学意义（P＜0.05）;而阻断前后的K562、HL-60增殖未见明显差异。结论:1在40mmol/L以内,氯化锂对Jurkat细胞株的生长抑制呈剂量依赖性,随着浓度的增高,抑制作用增强,最佳抑制浓度为40mmol/L;而对K562、HL-60及ITP骨髓单个核细胞无明显抑制作用。2氯化锂对K562、HL-60细胞及ITP骨髓单个核细胞中frizzled/lrp复合受体和ROR2受体的表达无明显影响,而对Jurkat细胞株中ROR2的表达有明显影响。3氯化锂对Jurkat细胞的细胞周期和细胞增殖有明显的抑制作用,推测与氯化锂阻断GSK-3β的作用,影响ROR2磷酸化,进而抑制非经典WNT信号传导通路有关。氯化锂对Jurkat细胞有抑制作用而对正常细胞无明显抑制作用,提示氯化锂可能成为临床治疗急性淋巴细胞白血病的新方法。目的:分析与川崎病发病相关的病原,探讨感染与川崎病病因之间的关系。方法: 1系统评价:全面检索中国知网、Pubmed、EMbase、medline数据库中1979年1月至2010年1月的川崎病病原研究的相关文献,语种限中文和英文。纳入原始研究、质量评价并提取资料,对所纳入的研究数据采用Revman5软件进行统计学分析。 2临床实验研究:实验组:川崎病（KD）组;感染性疾病对照组;健康儿童对照组。分别提取三组儿童的血清,用双抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测三组患儿血清中SPA、TSST-1、SE、ASP、HSPA-Ag和HASP-Ag的水平。同时取KD组和感染性疾病对照组患儿的静脉血、咽分泌物及粪便做细菌培养。 3回顾性病例分析:病例系2002年1月—2008年12月住院的KD患儿266例,回顾性分析KD患儿血培养结果,不同年龄阶段KD患儿的血培养阳性率,及血培养阳性与冠状动脉损害之间的关系。结果: 1系统评价:纳入12篇文献,研究5种病原菌,包括593例川崎病患儿和1152例非川崎病儿童。Meta分析结果显示:金黄色葡萄球菌和A组链球菌,合并OR值为4.26,95%CI为[2.54,7.16],P＜0.00001。支原体和衣原体,合并OR值为3.41 , 95%CI为[1.99,5.84],P＜0.00001。人类微小病毒B19,合并OR值为6.58,95%CI为[2.37,18.25],P=0.0003。人类冠状病毒NL-63,合并OR值为0.75,95%CI为[0.20,2.78],P=0.66。 2临床实验研究结果示在KD组中SPA和TSST-1水平分别为1.93±0.35和6.50±1.15,在IC组中SPA和TSST-1的水平分别为1.19±0.24和6.

关键词： WNT信号通路 frizzled/lrp受体 ROR2受体氯化锂白血病川崎病病原 Meta分析超抗原毒素血培养

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