检索结果-南通市图书馆

作者：吴倩华北理工大学

学位级别：硕士

目的检测叉头盒转录因子O3a(Forkhead box O3a,FoxO3a)、叉头盒转录因子P4(Forkhead box P4,foxp4)及四项错配修复蛋白(MLH1、PMS2、MSH2、MSH6)在结直肠癌及其癌旁组织中的表达,对部分结直肠癌患者行KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA四种基因... 详细信息

目的检测叉头盒转录因子O3a(Forkhead box O3a,FoxO3a)、叉头盒转录因子P4(Forkhead box P4,foxp4)及四项错配修复蛋白(MLH1、PMS2、MSH2、MSH6)在结直肠癌及其癌旁组织中的表达,对部分结直肠癌患者行KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA四种基因状态的联合检测(简称KNBP基因检测),以此研究FoxO3a、foxp4的表达及其相关性,进一步探讨两者与临床病理特征及错配修复蛋白缺失与否的关系,并分析KRAS基因突变与FoxO3a、foxp4及临床病理特征的关系。方法收集华北理工大学附属唐山市工人医院于2019年1月～2021年12月行结直肠癌根治术的1025例患者的临床病理资料,从中筛选出术后免疫组化结果为存在错配修复蛋白表达缺失者共48例,剔除其中行KNBP基因检测者3例,将剩余45例作为dMMR/MSI-H组,同时从其余错配修复蛋白表达完整的977例中随机选取45例作为p MMR/MSS组;收集所有同意行KNBP基因检测者共42例,并重点分析基因突变率最高的KRAS基因与FoxO3a、foxp4及临床病理特征的关系,作为KRAS组。收集上述三组共132例患者术后癌组织及其癌旁组织蜡块,利用免疫组织化学En Vsion两步法检测蜡块中FoxO3a和foxp4的表达,采用美国Roche全自动免疫组化仪检测四项MMR蛋白的表达,KRAS组利用ARMS-PCR法行KNBP基因检测,对入组患者的实验结果及临床病理资料进行整理、分析。结果1 dMMR/MSI-H组,FoxO3a、foxp4在结直肠癌组织中的阳性率分别为26.7%、84.4%,在癌旁组织中的阳性率分别为86.7%、11.1%。p MMR/MSS组,FoxO3a、foxp4在结直肠癌组织的阳性率分别为31.1%,80.0%,在癌旁组织中的阳性率分别为84.4%、20.0%。KRAS组,FoxO3a、foxp4在结直肠癌组织中的阳性率分别为28.6%、85.7%,在癌旁组织中的阳性率分别为90.5%、9.5%。以上三组FoxO3a、foxp4在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(p=0.000)。2 132例结直肠癌组织中FoxO3a阳性率为28.8%,foxp4的阳性率为83.3%,两者的阳性表达呈负相关(r=-0.299,p=0.000)。3 dMMR/MSI-H组、p MMR/MSS组中,FoxO3a在结直肠癌组织中的表达均与临床分期情况(p=0.015、p=0.010)、有无淋巴结转移(p=0.023、p=0.023)相关,与性别(p=0.685、p=0.920)、年龄(p=0.982、p=0.173)、肿瘤部位(p=0.356、p=1.000)、肿瘤最大径(p=0.339、p=0.763)、组织学类型(p=0.308、p=0.295)、分化程度(p=0.561、p=1.000)、浸润深度(p=0.651、p=0.637)及远处转移(p=1.000、p=1.000)无关;foxp4在结直肠癌组织中的表达均与临床分期情况(p=0.016、p=0.014)、有无淋巴结转移(p=0.031、p=0.031)相关;与性别(p=0.847、p=0.941)、年龄(p=0.115、p=1.000)、肿瘤部位(p=0.240、p=1.000)、肿瘤最大径(p=0.087、p=0.331)、组织学类型(p=0.468、p=0.934)、分化程度(p=1.000、p=1.000)、浸润深度(p=0.613、p=0.939)及远处转移(p=0.156、p=0.569)无关。在结直肠癌组织中,FoxO3a阳性率(p=0.642)、foxp4阳性率(p=0.581)在dMMR/MSI-H组和p MMR/MSS组的组间差异均无统计学意义(p>0.05)。4 KNBP基因检测显示,21例发生KRAS基因突变且突变位点均为2号外显子点突变,NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变均为0例。KRAS基因突变与FoxO3a在结直肠癌组织中的表达(p=0.017)、是否合并黏液腺癌(p=0.005)及有无远处转移(p=0.049)相关,与性别(p=0.217)、年龄(p=0.533)、肿瘤部位(p=0.352)、肿瘤最大径(p=0.217)、分化程度(p=1.000)、浸润深度(p=0.872)及淋巴结转移(p=1.000)、foxp4的表达(p=0.186)均无关。结论1 FoxO3a表达降低和foxp4表达升高在结直肠癌的发生发展中发挥促进作用,且两者具有负相关性。2 FoxO3a和foxp4在结直肠癌中的表达均与临床分期和淋巴结转移相关,与错配修复蛋白缺失与否无关。3结直肠癌组织中KRAS基因在管状腺癌、有远处转移及FoxO3a阴性表达患者中的突变率高,与foxp4的表达无关。图 6 幅;表 8 个;参 136 篇。

关键词：结直肠肿瘤 FoxO3a foxp4 dMMR KRAS

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喉鳞状细胞癌进展中foxp4和miR-4476协同调控表达的临床意义

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肿瘤 2020年第9期40卷 602-613页

作者：赵岩刘胜辉王晶田石艳凤石健吴干勋兰利利河北医科大学第四医院耳鼻喉头颈外科河北石家庄050011 河北省滦南县医院五官科河北唐山063500

目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head ... 详细信息

目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head box protein 4,foxp4)的相关性及可能的结合位点。方法:应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学SP法检测LSCC组织及其相应癌旁正常组织中foxp4 mRNA和蛋白的表达情况。应用在线网站预测与foxp4有调控作用的miRNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-4476在LSCC组织与其相应癌旁正常组织及4种人喉癌细胞系中的表达情况,并检测其与foxp4表达的相关性。采用染色体免疫共沉淀技术检测foxp4与miR-4476启动子区的结合情况。将pcDNA3.1-foxp4与报告基因载体pGL3-miR-4476启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因荧光信号活性分析foxp4对miR-4476启动子区的影响。将miR-4476模拟物及抑制物分别转染人喉癌TU177和AMC-HN-8细胞,用实时荧光定量PCR法检测转染效率,然后采用MTS实验、细胞克隆形成实验、Transwell小室迁移及侵袭实验分别检测miR-4476表达调控对喉癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:在LSCC组织中foxp4 mRNA的表达水平(P4476表达水平明显高于癌旁正常组织(P4476与foxp4的表达呈正相关(R=0.455,Pfoxp4与miR-4476的启动子区结合(P4476启动子活性的作用(P4476表达均高于对照组(P4476模拟物后TU177细胞中miR-4476表达水平明显升高(P4476抑制物后AMC-HN-8细胞中miR-4476表达水平明显降低(P4476模拟物可增强喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均4476抑制物可减弱喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均4476可能是foxp4的调控分子,其高表达可能与LSCC的发生和发展相关。上调或下调miR-4476表达可以增强或抑制喉癌细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力。

关键词：喉肿瘤微RNAs 叉头转录因子类 miR-4476 foxp4 生物学行为

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转录因子foxp4在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其对喉鳞癌TU177细胞生物学特性的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2020年第8期27卷 895-902页

作者：赵岩刘胜辉王晶田石艳凤石健吴干勋兰利利河北医科大学第四医院耳鼻喉头颈外科河北石家庄050011 滦南县医院五官科河北唐山063000

目的:检测转录因子foxp4(Forkhead box P4)在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织和细胞系中的表达,及其对LSCC细胞TU177体外增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响,并探讨其与上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)进程间的关系。方法:从河北医科大学第四医院生物标本库选取2013年6月至2015年12月收治的40例LSCC手术患者的癌及癌旁组织标本,应用qPCR法检测foxp4在LSCC与相应癌旁组织中的表达水平,应用qPCR法和Western blotting检测foxp4在人LSCC细胞系(AMC-HN-8、TU177、TU686及TU212)中的表达水平。采用小干扰RNA敲低TU177细胞中foxp4的表达,MTS实验、克隆形成实验、Transwell实验及流式细胞术分别检测foxp4敲低对TU177细胞增殖、迁移、侵袭、周期及凋亡的影响。应用qPCR法检测si-foxp4转染TU177细胞后EMT标志物N-钙黏蛋白(N-cad‐herin)、β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、扭曲蛋白(Twist)、转录因子Snail及锌指E盒结合蛋白1(zine finger E box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的变化情况,应用Western blotting测定foxp4敲低后N-cadherin、β-catenin、Vimentin及Twist蛋白水平的改变。结果:在LSCC组织中foxp4的表达水平明显高于癌旁组织(Pfoxp4在LSCC细胞中的表达亦高于癌旁组织(Pfoxp4的TU177细胞中foxp4的表达显著低于对照组(Pfoxp4可抑制TU177细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(均Pfoxp4可使细胞周期阻滞于G0/G1期(Pfoxp4可降低TU177细胞中N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Twist、Snail、ZEB1的mRNA水平(Pfoxp4的高表达可能与LSCC的发生和发展相关,foxp4敲低可以抑制LSCC细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力,使细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡,且可能参与EMT进程。

关键词：转录因子 foxp4 喉鳞状细胞癌 TU177细胞生物学特性细胞周期凋亡

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foxp4、E-cadherin、Vimentin在胃癌中的表达及意义

FOXP4、E-cadherin、Vimentin在胃癌中的表达及意义

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作者：张富允遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:研究胃癌及配对癌旁组织中foxp4、E-cadherin、Vimentin的表达情况及相关性。方法:采用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测foxp4、E-cadherin、Vimentin的mRNA及蛋白在12对胃癌组织及其配对癌旁组织中的表达水平;采用免疫组... 详细信息

目的:研究胃癌及配对癌旁组织中foxp4、E-cadherin、Vimentin的表达情况及相关性。方法:采用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测foxp4、E-cadherin、Vimentin的mRNA及蛋白在12对胃癌组织及其配对癌旁组织中的表达水平;采用免疫组化方法检测foxp4、E-cadherin、Vimentin蛋白在50对胃癌组织及其配对癌旁组织中的表达,并进一步分析三者之间是否相关,三者与临床病理参数的关系。结果:(1)foxp4主要表达于上皮组织,细胞内定位于细胞核,在胃癌组织阳性表达率为82%,明显高于癌旁组织(62%),差异有统计学意义(?=4.96,P4%,明显高于癌旁上皮组织(2%),差异有统计学意义(?=64.94,P44%,明显低于正常胃上皮组织(100%),差异有统计学意义(?=38.88,Pfoxp4的表达水平与胃癌患者浸润深度有关(P0.05)。Vimenti、E-cadherin的表达水平与胃癌患者肿瘤分化程度相关(P0.05)。(3)foxp4与Vimentin的表达呈正相关(P4)。foxp4与E-cadherin的表达呈负相关(P4)蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测foxp4、Vimentin在胃癌组织中表达量上调,差异有统计学意义(Pfoxp4 mRNA、Vimentin的mRNA在胃癌组织中表达量上调,差异有统计学意义(Pfoxp4、Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调。(2)胃癌组织中,foxp4的表达水平与胃癌患者浸润深度有关,Vimentin及E-cadherin的表达水平与胃癌患者肿瘤分化程度相关。联合检测foxp4、Vimentin和E-cadherin可能有助于评估胃癌患者的肿瘤浸润、分化情况。(3)胃癌组织中,foxp4与Vimentin的表达呈正相关。foxp4与E-cadherin的表达呈负相关。E-cadherin与Vimentin的表达呈负相关。

关键词：胃癌上皮-间质转化 foxp4

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心脏发育相关基因foxp4相互作用蛋白的筛选与鉴定

心脏发育相关基因Foxp4相互作用蛋白的筛选与鉴定

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作者：刘华友湖南师范大学

学位级别：硕士

本实验室前期利用酵母双杂交技术,筛选获得了与心脏发育基因foxp4相互作用的15个候选蛋白,并分析了其中3个候选蛋白与foxp4相互作用的情况。本文进一步分析其它12个候选蛋白是否与foxp4相互作用,为研究foxp4调控心脏发育的信号通路提供... 详细信息

本实验室前期利用酵母双杂交技术,筛选获得了与心脏发育基因foxp4相互作用的15个候选蛋白,并分析了其中3个候选蛋白与foxp4相互作用的情况。本文进一步分析其它12个候选蛋白是否与foxp4相互作用,为研究foxp4调控心脏发育的信号通路提供信息。本研究首先克隆12个与foxp4相互作用的候选基因：Acta1、C17orf81、ABHD11、PTP4A3、RMBD5B、TNXB、HLA-DPB1、Loc100288161、COL1A1、COL3A1、COL4A2和FN1。从成人的肌肉和心脏组织中提取总RNA,反转录合成cDNA作为PCR扩增的模板。通过巢式PCR将扩增的目的片段克隆入pMD18T载体,经酶切检测与测序鉴定后,转入真核表达载体pCMV-Myc上。结果表明成功克隆了12个基因并构建出这12个基因的真核表达质粒。我们进一步将12个基因的pCMV-Myc质粒分别与pCMV-Tag2c-foxp4质粒转染Hek293细胞后,进行免疫共沉淀实验。经抗Flag和Myc单抗两个方向检测foxp4蛋白与12个蛋白之间的相互作用,证明12个候选对象中有3个候选蛋白Acta1、COL1A1和COL4A2与foxp4有相互作用。我们同时制备了斑马鱼foxp4基因多克隆抗体,检测了foxp4基因在斑马鱼早期胚胎和成体组织中的表达情况,发现foxp4从1细胞期开始,随着胚胎发育的延续,其表达量逐渐增多,囊胚期开始下调,90%外包期又开始回升。foxp4在成体组织中广泛表达,在脑、肌肉和鳃中表达较强,在心脏和眼中表达较弱。我们还进一步研究了其中一个候选基因Fbxl5在胚胎发育过程中的时空表达,并利用基因芯片分析敲低Fbxl5的表达时对其它基因表达的影响。通过搭桥PCR的方法克隆了斑马鱼Fbxl5基因,制备了该基因多克隆抗体。利用该抗体分析了斑马鱼早期胚胎和成体组织中的表达情况,发现Fbxl5在胚胎发育中一直较稳定表达,1细胞期表达较多,随着胚胎发育表达量略有下降,囊胚期开始又回升之后除24 h表达量较低外,其余时期均较稳定表达。斑马鱼成体中,Fbxl5在脑、心脏、肾、鳃、肌肉、肠中表达,其中鳃中表达最强,而在肌肉,肠中表达较弱。利用Fbxl5-MO敲低Fbxl5在斑马鱼胚胎中的表达,分析发育48 h和对照胚胎样品的mRNA含量差异,基因芯片分析结果表明,斑马鱼14295个基因中共检测到差异性表达的基因1874个,包括心脏标志基因tnc、vmhc、myl7等。总之,本文克隆出12个与foxp4相互作用的候选基因,通过免疫共沉淀技术进一步证明其中3个基因Acta1、COL1A1和COL4A2与foxp4相互作用,制备了斑马鱼foxp4基因多克隆抗体,分析了其在斑马鱼早期胚胎中和成体组织中的表达情况,为进一步探清foxp4的分子机制奠定了基础。同时,对候选基因Fbxl5开展的一些工作为以后的研究提供了帮助。

关键词： foxp4 免疫共沉淀搭桥PCR Fbxl5 基因芯片

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转录因子foxp4及其反义链长链非编码RNA foxp4-AS1在贲门腺癌中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响

转录因子FOXP4及其反义链长链非编码RNA FOXP4-AS1在贲门腺癌中的...

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作者：王欣晨河北医科大学

学位级别：硕士

近年来的成果表明转录因子叉头框家族在恶性肿瘤发病机制的研究中受到重视。转录因子叉头框蛋白P4（forkhead box protein 4,foxp4）属于叉头框家族的一员,目前许多针对foxp4的研究发现其在多种肿瘤中表达上调,说明foxp4可能参与恶性肿... 详细信息

近年来的成果表明转录因子叉头框家族在恶性肿瘤发病机制的研究中受到重视。转录因子叉头框蛋白P4（forkhead box protein 4,foxp4）属于叉头框家族的一员,目前许多针对foxp4的研究发现其在多种肿瘤中表达上调,说明foxp4可能参与恶性肿瘤的发生发展。但其在贲门腺癌（Gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中的作用及机制尚未见报道。长链非编码RNA（long non-coding RNAs,lnc RNAs）是存在于人类骨骼和转录组中一类重要的调控细胞分子,近年来的科学研究结果表明lnc RNAs的异常表达与多种恶性肿瘤密切地息息相关,而且foxp4-AS1基因对于恶性上消化道癌中的调控机制以及与foxp4基因的关系没有得到报道。本课题研究首先通过检测foxp4及foxp4-AS1基因对胃癌细胞系和贲门腺癌组织中的表达情况,进一步建立敲低和过表达质粒探究其对胃癌细胞系体外增殖、迁移及侵袭能力的影响以及其对胃癌细胞系上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。主要研究内容及结果如下:第一部分转录因子foxp4与长链非编码RNA foxp4-AS1在胃癌细胞系及贲门腺癌组织中的表达及相关性目的:分别研究胃癌细胞系及贲门腺癌组织中长链非编码RNA foxp4-AS1以及转录因子foxp4基因的表达及相关性,并分析与临床病理参数之间的关系。方法:1.检测4株胃癌细胞系（BGC-823、SGC-7901、MGC-803和HGC-27）中foxp4及foxp4-AS1基因的表达情况,采用实时荧光定量反转录多聚核苷酸酶链式反应（Quantitative real-time reverse tran（?）scription polymerase chain reaction,qRT-PCR）的方法。2.应用qRT-PCR法检测在50例贲门腺癌及其相对应的癌旁正常组织中foxp4及foxp4-AS1基因的表达情况及相关性,并结合临床病理参数进行统计学分析。结果:1.胃癌细胞系中foxp4基因的表达情况:qRT-PCR实验结果显示,foxp4基因在4株胃癌细胞系中均为高表达（P＜0.05）,且在SGC-7901细胞中表达水平最高。2.贲门腺癌组织及相应癌旁正常组织中foxp4基因的m RNA表达情况:foxp4基因的m RNA在贲门腺癌组织中表达上调（P＜0.05）,并与分期和转移密切相关（P＜0.01）。3.胃癌细胞系中foxp4-AS1基因的表达情况:qRT-PCR实验结果显示,foxp4-AS1基因在4株胃癌细胞系中均为高表达（P＜0.05或P＜0.01）,且在BGC-823细胞中表达水平最高。4.贲门腺癌及其相应癌旁正常组织中foxp4-AS1基因的表达情况:foxp4基因的m RNA在贲门腺癌组织中表达上调（P＜0.05）,并与分期和转移密切相关（P＜0.01）。5.贲门腺癌组织中foxp4-AS1与foxp4基因的m RNA表达相关性:在贲门腺癌组织中foxp4-AS1与foxp4基因的m RNA表达之间无明显的相关性（P＞0.05）。第二部分转录因子foxp4基因对胃癌细胞生物学特性的影响及机制研究目的:研究敲低及过表达转录因子foxp4基因后对胃癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法:1.设计并合成si-foxp4,转染胃癌细胞SGC-7901,并验证其转染效率。2.合成过表达质粒pc DNA3.1-foxp4并根据说明书转染胃癌细胞SGC-7901,并验证其转染效率。3.MTS实验分别检测敲低及过表达foxp4基因对SGC-7901细胞增殖能力的影响,并绘制生长曲线。4.划痕实验分别检测敲低及过表达foxp4基因对SGC-7901细胞迁移能力的影响。5.Transwell小室侵袭实验分别检测敲低及过表达foxp4基因对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。6.qRT-PCR法检测EMT相关因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Twist、ZEB1、MMP2及MMP9）m RNA表达水平在敲低及过表达foxp4基因后的不同。8.Western blot实验检测EMT相关因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及β-catenin）蛋白表达水平在敲低及过表达foxp4基因后的不同。结果:1.敲低foxp4基因的效率验证:成功设计si RNA si-foxp4并将si-foxp4转染胃癌细胞SGC-7901,通过qRT-PCR法分析发现,敲低组foxp4基因的表达显著低于对照组（P＜0.01）。2.过表达foxp4基因的效率验证:成功构建过表达载体pc DNA3.1-foxp4并转染胃癌细胞SGC-7901,通过qRT-PCR法分析发现,过表达foxp4

关键词：转录因子长链非编码RNA foxp4 foxp4-AS1 贲门腺癌

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肾细胞癌组织中foxp4的表达及临床意义的研究

肾细胞癌组织中FOXP4的表达及临床意义的研究

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作者：刘瑞河北医科大学

学位级别：硕士

肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是主要组织来源为肾近曲或远曲小管上皮细胞的肾恶性肿瘤,近年来RCC的发病率和病死率在全球范围内呈上升趋势。RCC早期症状不明显,血尿、腹部包块、腰痛等典型症状在临床上并不多见,晚期肾癌则预后... 详细信息

肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是主要组织来源为肾近曲或远曲小管上皮细胞的肾恶性肿瘤,近年来RCC的发病率和病死率在全球范围内呈上升趋势。RCC早期症状不明显,血尿、腹部包块、腰痛等典型症状在临床上并不多见,晚期肾癌则预后较差。因此RCC的早发现、早治疗极大改善患者生存获益。foxp4编码蛋白属于FOX转录因子家族P亚家族,位于6号染色体上。该基因的异常表达被证实与肺癌、肝癌、人骨肉瘤等肿瘤密切相关。研究表明,通过CIRC-ZNF609的上调可导致foxp4的高表达,这可能导致RCC的增殖和侵袭异常的原因之一。目的:本实验通过应用实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测RCC组织与相应正常组织中foxp4基因mRNA相对表达水平,应用PV免疫组化法检测RCC患者组织中foxp4蛋白的表达。通过与临床数据之间的分析,探讨其相关性,为RCC的发病机制、早期发现、临床诊断及治疗提供更多的可能性。方法:1.收集河北医科大学第四医院RCC患者术后标本的肾细胞癌组织及相应正常组织标本59例,整理记录59例RCC患者的发病年龄、性别、原发肿瘤大小和临床分期临床资料。2.运用PV免疫组化法检测59例RCC患者的肾细胞癌组织及相应正常组织中foxp4蛋白的表达情况,并对foxp4蛋白RCC中的表达情况与临床资料进行相关统计学分析。3.采用RT-qPCR技术测定59例RCC患者术后标本的肾细胞癌组织及相应正常肾组织中foxp4基因的mRNA相对表达量,并对foxp4基因mRNA在RCC中的相对表达量与临床资料进行相关统计学分析。4.应用SPSS21.0版统计软件对实验数据进行统计分析。结果:1.59例肾癌患者RCC组织中foxp4蛋白阳性表达率81.4%(48/59)显著高于相应的正常组织10.2%(6/59),差异具有统计学意义(Pfoxp4蛋白的表达情况与发病年龄、性别、原发肿瘤大小和临床分期等临床资料间均未见明显联系(P>0.05)。2.59例RCC患者RCC组织中foxp4基因mRNA的相对表达量显著高于相应正常组织,差异具有统计学意义((1.83±0.93)vs.(1.00±0.01),Pfoxp4基因mRNA相对表达量与发病年龄、性别、原发肿瘤大小和临床分期等临床资料间均未见明显联系(P>0.05)。结论:1.免疫组化结果显示foxp4蛋白在RCC组织中表达的阳性率显著高于相应的正常组织,提示foxp4蛋白的表达升高可能与RCC的发生有关。foxp4蛋白在RCC组织中的表达情况与患者发病年龄、性别、原发肿瘤大小和临床分期等临床资料间均未见明显联系。2.foxp4基因mRNA的相对表达量在RCC组织中显著高于相应的正常组织,提示foxp4基因mRNA表达升高可能与RCC的发生有关。foxp4基因mRNA在RCC组织中的相对表达量与患者发病年龄、性别、原发肿瘤大小和临床分期等临床资料间均未见明显联系。

关键词：肾细胞癌 foxp4 mRNA 免疫组化

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人类癌症相关基因foxp4的结构、功能及其调控研究

人类癌症相关基因FoxP4的结构、功能及其调控研究

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作者：黄文湖南师范大学

学位级别：硕士

癌症是目前人类健康的头号杀手。目前已知的癌症发病机理多是生长因子和生长因子的表面受体发生异常所致，因此，进一步阐明受体下游的调控基因对于阐明癌症的发生机理和进一步设计药物靶位点都是十分有意义的。forkhead box P4(foxp4)... 详细信息

癌症是目前人类健康的头号杀手。目前已知的癌症发病机理多是生长因子和生长因子的表面受体发生异常所致，因此，进一步阐明受体下游的调控基因对于阐明癌症的发生机理和进一步设计药物靶位点都是十分有意义的。forkhead box P4(foxp4)就是本文作者在利用生物信息学方法筛选人类心脏发育候选基因的过程中发现的一个人类新基因，目前发现三种转录本。该基因编码蛋白属于Fox转录因子家族P亚家族，包含一个N-端C2HC型锌指结构(307aa-332aa)和一个C-端Fork Head(465aa-547aa)结构域，在343aa至366aa有一个Coiled Coil Motif，具有结合DNA的功能。在哺乳动物中，如大鼠、小鼠，发现了它的同源蛋白，并且它们之间具有极高的保守度，说明此蛋白所在的亚家族可能具有一定的功能。组织表达分析表明该基因在80天胚胎中有不同的表达模式，且在大脑、胃、肾和肺组织中有较高水平的表达。亚细胞定位分析表明foxp4分布于细胞质中，是一种胞浆蛋白。转录活性分析在COS7细胞中过表达foxp4蛋白可以使MAPK信号途径的下游转录因子SRE的转录激活活性显著提高。此外，过表达foxp4蛋白对Hela细胞的生长表现出一定的促进作用。综合目前的研究结果来看，foxp4可能通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程。另外，通过酵母双杂交技术筛出foxp4蛋白的两种相互作用候选蛋白Cat D和Tcap。Cat D是一个很有效的内源性蛋白质水解酶，很多研究表明它与细胞凋亡有关。如Cat D参与Fas介导的细胞调亡的信号转导，并在P53介导的细胞凋亡中起重要作用，还促使线粒体释放细胞色素c。因此我们推测foxp4也可能参与了细胞凋亡。另一方面，与Titin相互作用的蛋白Tcap，在心肌伸展机制有非常重要的作用，这也为从其他方面研究foxp4的功能提供了线索。

关键词： foxp4 MAPK 转录活性

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foxp4过表达在神经干细胞体外诱导分化中的作用

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四川解剖学杂志 2021年第4期29卷 1-5,12页

作者：叶鑫张钦清杨娜娜龚劲雯任丽伊赵海霞成都医学院发育与再生四川省重点实验室、组织学与胚胎学教研室成都610500 成都市第三人民医院病理科成都610014 武汉市第一医院病理科武汉430022

目的:鉴定转录因子foxp4在神经干细胞及其分化过程中的表达,探究foxp4过表达对神经干细胞分化的影响.方法:收集E9.5胚胎小鼠的端脑,免疫荧光染色检测foxp4和神经干细胞标记分子Nestin的表达;利用E12.5胎鼠的脑皮质,体外分离培养神经干细... 详细信息

目的:鉴定转录因子foxp4在神经干细胞及其分化过程中的表达,探究foxp4过表达对神经干细胞分化的影响.方法:收集E9.5胚胎小鼠的端脑,免疫荧光染色检测foxp4和神经干细胞标记分子Nestin的表达;利用E12.5胎鼠的脑皮质,体外分离培养神经干细胞,并通过全反式维甲酸对其诱导分化.用细胞转染、免疫荧光、qRT-PCR等方法,检测foxp4在神经干细胞分化中的表达,并鉴定在神经干细胞分化过程中,foxp4过表达对生成的Map2^(+)神经元和GFAP^(+)星形胶质细胞的影响.结果:foxp4在E9.5胎鼠端脑的神经干细胞中表达,并且其mRNA表达水平在体外神经干细胞诱导分化过程中上升;在神经干细胞诱导分化过程中,foxp4过表达对Map2^(+)神经元的比例影响不明显,但是其显著降低了GFAP^(+)星形胶质细胞的比例.结论:foxp4在神经干细胞及其分化中表达,并且其过表达可抑制星形胶质细胞的分化.

关键词： foxp4 神经干细胞分化星形胶质细胞

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斑马鱼foxp4基因多克隆抗体的制备及检测

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激光生物学报 2011年第4期20卷 556-559,489页

作者：刘华友朱玲李帆王琨江志钢吴秀山李永青湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心湖南长沙410081

foxp4为Fox基因家族的一员,目前研究发现其与怖、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。按照巢式PCR原理,经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼foxp4基因片... 详细信息

foxp4为Fox基因家族的一员,目前研究发现其与怖、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。按照巢式PCR原理,经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼foxp4基因片段,将其克隆入表达载体pGEX4T-1,转化至大肠杆菌BL21中,再通过IPTG进行诱导表达GST-foxp4融合蛋白。融合蛋白先经谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,再经切胶纯化回收,然后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别进行Western-blot实验检测抗体效价和特异性。所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼foxp4多克隆抗体,为foxp4功能的进一步研究奠定了基础。

关键词： foxp4 原核表达多克隆抗体

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