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鸡源抗菌肽fowlicidin-3表达条件的优化及生物学特性和体内疗效研究

南京农业大学学报 2011年第2期34卷 113-118页

作者：李荣荣和祯泉吕英军鲍恩东陈溥言南京农业大学动物医学院江苏南京210095

对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5～6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源F... 详细信息

对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5～6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg.L-1。采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌CowanⅠ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μ***-1。在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果。

关键词： fowlicidin-3 表达优化生物学特性 X-33 体内疗效

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鸡抗菌肽fowlicidin-3分子中的铰链结构对其细胞选择活性的作用

鸡抗菌肽Fowlicidin-3分子中的铰链结构对其细胞选择活性的作用

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会

作者：屈佩朱健李丹陈惠娴刘超群冯兴军东北农业大学动物科学技术学院

fowlicidin-3(Fow-3)是在鸡体内发现的一种抗菌肽,抑菌活性强,具有明显溶血及细胞毒作用,由27个氨基酸残基组成,N端与C端各形成一α-螺旋结构,中间由一铰链结构(A16-N19)连接。为研究铰链结构对Fow-3细胞选择性的作用,同时获得具有理想... 详细信息

fowlicidin-3(Fow-3)是在鸡体内发现的一种抗菌肽,抑菌活性强,具有明显溶血及细胞毒作用,由27个氨基酸残基组成,N端与C端各形成一α-螺旋结构,中间由一铰链结构(A16-N19)连接。为研究铰链结构对Fow-3细胞选择性的作用,同时获得具有理想活性的新型抗菌肽分子,本试验设计合成了Fow-3的系列衍生肽Fow-3(1-15)、Fow-3(1-19)、Fow-3(1-15,20-27)、Fow-3(20-27),测定了其抑菌活性、溶血及细胞毒性,研究了其抑菌机制。结果表明:Fow-3(1-15)、Fow-3(1-19)抑菌活性很低,而Fow-3(1-15,20-27)保持了同母肽相当的高抑菌活性;三种衍生肽溶血活性显著降低。Fow-3(20-27)未表现出明显的抑菌活性,但溶血及细胞毒作用与母肽相当。内外膜通透性、内膜去极化试验表明Fow-3(1-15,20-27)能破坏细菌的膜完整性,产生去极化作用;扫描与投射电镜结果也表明该抗菌肽对细菌细胞膜产生破坏作用,进一步证实了其通过作用于细胞膜而发挥抑菌作用。以上结果提示,铰链结构对Fow-3抑菌活性无影响,但对Fow-3的溶血及细胞毒作用至关重要;Fow-3(1-15,20-27)具有极高的细胞选择性,治疗指数达到36以上,是一种极具开发潜力的新型抗菌肽。

关键词：抗菌肽 fowlicidin-3 铰链结构细胞选择性抑菌活性抑菌机制

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抗菌肽Folicidin-3在大肠杆菌中融合表达及抑菌活性

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第4期32卷 1-6页

作者：和祯泉刘天健吕英军鲍恩东南京农业大学动物医学院江苏南京210095 秦皇岛市畜牧工作站河北秦皇岛066000

根据抗菌肽fowlicidin-3氨基酸序列,选用大肠杆菌(Escherichia coli)偏嗜密码子,设计合成117bp的Fowli-cidin-3a和102bp的fowlicidin-3b基因。将这2个基因克隆到突变载体,构建出表达载体pET-32a-C-fowlicidin-3a和pET-32a-Tev-C-fowlicidin-3b,分别转化至*** BL21Rosetta-2中,IPTG诱导表达融合蛋白Trx-fowlicidin-3a和Trx-fowlicidin-3b并进行纯化。结果表明:肠激酶裂解Trx-fowlicidin-3a和Tev酶裂解Trx-fowlicidin-3b效率都较高,获得的裂解液都对指示菌*** DH5α显示出抑菌活性。fowlicidin-3a和fowlicidin-3b对指示菌*** DH5α的最小抑菌浓度均为2μ***-1。

关键词： fowlicidin-3 抗菌肽融合表达抑菌试验

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鸡源抗菌肽Folicidin-3在毕赤酵母中的分泌表达及其生物学活性鉴定

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中国农业科学 2010年第21期43卷 4529-4535页

作者：李荣荣和祯泉鲍恩东陈溥言南京农业大学动物医学院动物免疫与诊断农业部重点实验室南京农业大学

【目的】研究鸡源重组抗菌肽fowlicidin-3的生物学特性,并为重组抗菌肽在临床上的应用奠定基础。【方法】根据抗菌肽数据库中fowlicidin-3的氨基酸序列,选用毕赤酵母的偏嗜密码子,设计抗菌肽的基因,通过SOE法合成得到全长为114bp的Fowli... 详细信息

【目的】研究鸡源重组抗菌肽fowlicidin-3的生物学特性,并为重组抗菌肽在临床上的应用奠定基础。【方法】根据抗菌肽数据库中fowlicidin-3的氨基酸序列,选用毕赤酵母的偏嗜密码子,设计抗菌肽的基因,通过SOE法合成得到全长为114bp的fowlicidin-3基因。将fowlicidin-3基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-F。将线性化重组表达载体pPICZα-A-F通过电击法转入毕赤酵母宿主菌X-33中,构建分泌型重组酵母表达菌株。【结果】获得分泌型重组酵母表达菌株,fowlicidin-3多肽表达量达到170mg·L-1,对致病性大肠杆菌K99和鸡白痢沙门氏菌显示出较好的抑制活性,抑菌圈直径分别为1.9cm和2.2cm。优化表达条件结果显示,转接到BMMY培养基中(pH6.0),每24h补加2%甲醇,29℃培养72h后,fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达。【结论】成功构建分泌型重组酵母表达菌株,并获得了具备高效表达能力和较好生物学活性的抗菌肽。

关键词： fowlicidin-3 抗菌肽 SOE法毕赤酵母抑菌试验

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