检索结果-南通市图书馆

生物技术 2023年第6期33卷 677-682页

作者：韩海芳李智涛梁梦歌王烁谷变利高社干河南科技大学基础医学与法医学院河南洛阳471003 河南科技大学临床医学院第一附属医院肿瘤研究所河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003

[目的]诱导表达、纯化牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimaⅡ蛋白,将其作为免疫原制备抗Pg fimaⅡ单克隆抗体(mAbs),对抗体特性进行初步研究。[方法]将BL21-pET28a-fimaⅡ菌株诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白并作为抗... 详细信息

[目的]诱导表达、纯化牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimaⅡ蛋白,将其作为免疫原制备抗Pg fimaⅡ单克隆抗体(mAbs),对抗体特性进行初步研究。[方法]将BL21-pET28a-fimaⅡ菌株诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白并作为抗原免疫BALB/c小鼠,经PEG融合法和腹水法获得fimaⅡ单克隆抗体;分别采用SDS-PAGE法、酶联免疫吸附实验检测抗体纯度、效价和亚型,Western Blot和Biacore检测抗体的特异性和亲和力。[结果]fimaⅡ重组蛋白为可溶性表达,最适诱导条件为1 mmol/L IPTG诱导12 h;纯化后的重组蛋白纯度为90%以上,该免疫原制备的fimaⅡ单克隆抗体为IgG1亚类,kappa亚型,效价为1:8×104以上,特异性良好,亲和力可达到9nM。[结论]成功诱导表达、纯化fimaⅡ蛋白并制备抗Pg fimaⅡ特异性单克隆抗体,为后续开发快速检测Pg诊断试纸条奠定基础。

关键词：牙龈卟啉单胞菌 fimaⅱ菌毛蛋白 fimaⅡ型特异性单克隆抗体特性鉴定

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