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fgf4在肺癌细胞体内和体外中表达差异的研究

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基因组学与应用生物学 2014年第3期33卷 501-504页

作者：李江超袁俏冰陈卉黎帅周泽启叶宇翔韩露王丽京广东药学院血管生物学研究所广州510006

fgf4已经被证明是癌基因,它涉及肿瘤的生长和转移,为了解fgf4的表达与肿瘤微环境的关系。我们利用fgf4抗体通过免疫组化对一名肺癌患者癌旁,癌组织,癌组织小鼠移植瘤,二次移植瘤以及原代培养的细胞爬片进行fgf4检测,探究其表达差异。通... 详细信息

fgf4已经被证明是癌基因,它涉及肿瘤的生长和转移,为了解fgf4的表达与肿瘤微环境的关系。我们利用fgf4抗体通过免疫组化对一名肺癌患者癌旁,癌组织,癌组织小鼠移植瘤,二次移植瘤以及原代培养的细胞爬片进行fgf4检测,探究其表达差异。通过对比癌组织与对照组(癌旁组织),fgf4在癌巢中高表达;同样,移植瘤与二次移植瘤的癌巢中与癌旁组织比较,fgf4表达相对较高;但是将癌组织进行原代培养后,免疫组化检测细胞爬片fgf4,发现仅有5%±0.21%的肿瘤细胞表达fgf4,对照蛋白Cytokine作为肿瘤标记物,则在100%的肿瘤细胞中表达。研究提示免疫组化检测到fgf4在体内和体外表达不同,提示肿瘤细胞fgf4的表达与肿瘤微环境调控密切相关,肿瘤微环境对肿瘤细胞的fgf4的调控有着重要作用。

关键词： fgf4 小鼠移植瘤肺癌肿瘤微环境

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fgf4诱导肺腺癌EMT的相关机制研究

FGF4诱导肺腺癌EMT的相关机制研究

作者：宋汪昭天津医科大学

学位级别：硕士

研究目的:研究fgf4在肺腺癌细胞系中诱导上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)过程中的相关机制,阐明fgf4在动物模型和腺癌组织中的表达意义,因而为控制肺腺癌侵袭转移提供依据。研究方法:1.用转化生长因子(transforming... 详细信息

研究目的:研究fgf4在肺腺癌细胞系中诱导上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)过程中的相关机制,阐明fgf4在动物模型和腺癌组织中的表达意义,因而为控制肺腺癌侵袭转移提供依据。研究方法:1.用转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导A549及H1299细胞发生EMT,检测不同成纤维细胞生长因子受体及配体的变化。2.用成纤维细胞生长因子fgf4及fgf7分别刺激肺腺癌细胞系A549和H1299发生EMT过程,用Western Blotting检测相关标志物如E-cadherin、Vimentin的表达情况;同时检测不同时间点转录因子Snail、Twist和Slug的表达情况;通过聚合酶链式反应的方法检测fgf4与fgf7的特异性受体fgfR2 IIIb和fgfR2IIIc的基因表达情况。3.用fgf4和fgf7分别刺激A549和H1299细胞,采用鬼炳环肽标记细胞骨架蛋白F-actin、Transwell、CCK-8及软琼脂成瘤实验来检测细胞的细胞骨架,移动,侵袭,增殖以及细胞干性能力的变化。4.用Western Blotting的方法检测在fgf4的刺激下,相关的通路变化情况。用钙荧光探针Fluo 3-AM的方法检测细胞内钙离子的变化。用Co-IP的方法检测fgf4与钙池操控性钙离子通道(store-operated calcium entry,SOCE)关键蛋白Orai1之间的蛋白相互作用关系。5.用Western Blotting和Fluo 3-AM的方法,检测在fgf4的刺激下,加入fgfR的抑制剂BGJ398后,细胞内钙离子和Orai1的表达变化。6.构建3个Orai1的小干扰RNA,通过Western Blotting的方法筛选出沉默效率最高的一个干扰RNA,以进行后续的实验。7.用Western Blotting和Fluo 3-AM的方法,观察在fgf4的刺激下,通过转染si-Orai1或加入SOCE抑制剂2,5-di-tert-butylhydroquinone(BHQ)后,EMT相关蛋白和转录因子的变化,以及细胞内钙离子的变化情况。8.用fgf4刺激A549和H1299细胞,之后转染si-Orai1或加入SOCE抑制剂BHQ后,采用鬼炳环肽标记细胞骨架蛋白F-actin、Transwell、CCK-8及软琼脂成瘤实验来检测细胞的细胞骨架,移动,侵袭,增殖以及细胞干性能力的变化。9.通过在裸鼠腹股沟部位皮下注射H1299细胞来检测fgf4和SOCE抑制剂对活体动物成瘤的作用和影响,实验分为3组,对照组、fgf4作用组(实验组1)和fgf4/BHQ组(实验组2)。实验组1中,当成瘤后,在肿物部位给予每周两次的fgf4;实验组2中,在给予fgf4十五天后,给予每周3次的BHQ。一个月后,处死老鼠,观察三组的肿物大小,远处转移情况,以及通过免疫组化的方法,检测三组瘤组织中fgf4、Orai1、E-cadherin,Vimentin的表达。10.选取60例肺腺癌组织标本,21例配对的肺腺癌原发灶与相应的肺转移灶,用SPSS分析fgf4的表达与患者临床病理特征(年龄、性别、肿物大小、部位、组织学类型、TNM分期、以及转移)之间的关系、fgf4的表达在肺腺癌原发灶和肺转移灶之间的差异、fgf4的表达与EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin之间的关系、fgf4的表达与Orai1之间关系。研究结果:1.经转化生长因子TGF-β1(5ng/ml)刺激后,肺腺癌细胞系A549和H1299中fgfR2 IIIb表达减少,fgfR2 IIIc表达增多,并且fgfR2 IIIb的特异性配体fgf7表达下降,fgfR2 IIIc的特异性配体fgf4表达增多。2.用fgf4和fgf7刺激细胞,Western Blotting的结果显示随着fgf4浓度的增加,E-cadherin表达逐渐减少,Vimentin表达逐渐增加,转录因子Snail、Twist表达增加,Slug的表达并无明显变化。而fgf7对这些蛋白和转录因子的表达并无明显作用。与TGF-β1的作用一致,在fgf4的刺激下,fgfR2 IIIc表达增高,并且fgfR2 IIIb的特异性配体fgf7表达下降,fgfR2 IIIc的特异性配体fgf4表达增多,同样,fgf7对这一现象无影响。3.在fgf4的刺激下,A549和H1299细胞出现了细胞骨架重拍的现象,F-actin的表达由细胞膜移至细胞内,并且细胞呈现梭形、极性丧失的表现;细胞的增殖、移动、侵袭和干性能力增加。4.通过对经典的fgfR/fgf通路MAPK/ERK和PI3K-AKT进行检测,发现fgf4并没有激活

关键词： fgf4 上皮间质细胞转化钙池操控性钙离子通道 Orai1

Wnt5a和fgf4基因对鹅毛囊及羽毛发育影响的研究

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Wnt5a和FGF4基因对鹅毛囊及羽毛发育影响的研究

作者：李瑶吉林农业大学

学位级别：硕士

本试验吉林白鹅为研究对象，采用胚胎期12胚龄（E12）至生后期127天（D127）的鹅背部皮肤和羽毛，运用荧光定量PCR方法和免疫组化方法定量定性分析目的基因Wnt5a与fgf4在不同时期毛囊表达量与表达部位变化规律，以此探讨两基因在胚胎期... 详细信息

本试验吉林白鹅为研究对象，采用胚胎期12胚龄（E12）至生后期127天（D127）的鹅背部皮肤和羽毛，运用荧光定量PCR方法和免疫组化方法定量定性分析目的基因Wnt5a与fgf4在不同时期毛囊表达量与表达部位变化规律，以此探讨两基因在胚胎期和生后期对鹅毛囊羽毛影响。 Wnt5a基因与fgf4两基因总体变化趋势： E12-E18，Wnt5a基因高表达量时抑制β-catenin基因表达，抑制初级毛囊发育，E18-E30，Wnt5a基因表达量下降,初级毛囊、次级毛囊发育活跃，深度增加明显，E30-D7，Wnt5a基因略有下降，由于初级毛囊发育几乎完成，此后其深度几乎没有变化，而次级毛囊正在发育。D7-D23，表达量逐渐上升， Wnt5a高表达量抑制毛干生长发育，毛干生长发育迟缓，D23-D37表达量下降，D37-D49表达量上升，D49-D57，表达量略有下降，D57-D76，表达量略有升高。D76-D84，Wnt5a表达量最高，D90以后，表达量显著下降，此后变化不显著;fgf4基因在E12-E16达量逐渐增加，E16-E18，fgf4表达量减少，E18-E22，表达量上升，E22-E24，表达量下降，E24-E30，表达量几乎没有变化，D7-D70，促进羽毛发育，表达量升高，D70-D84，表达量下降，D90-D127，表达量升高。 Wnt5a基因与fgf4基因定位表达结果： E18，Wnt5a基因在羽枝嵴和毛囊基底部（毛乳头和髓质部）内根鞘、外根鞘、大量阳性表达;E29初级毛囊中Wnt5a几乎不表达,只有髓质处有少量表达;D23仅在初级毛囊缘板有少量阳性表达，在羽轴嵴羽枝嵴未表达;D57，Wnt5a在羽轴嵴羽枝嵴有阳性表达,D69,Wnt5a在毛囊缘板、羽枝嵴、羽轴嵴阳性表达;D90，仅在羽枝嵴处少量阳性表达。E18,fgf4仅在次级毛囊缘板出表达，而在初级毛囊中表达强烈;E23，fgf4在初级毛囊中毛囊缘板处表达，在部分羽枝嵴少量表达;D13，fgf4基因在毛囊缘板表达，羽轴嵴少量表达;D35，fgf4初级毛囊缘板出有少量表达，在次级毛囊毛囊缘板处大量阳性表达;D69在毛囊缘板、毛囊内部均有阳性表达;D90，fgf4在毛囊缘板处、毛囊内部、部分羽嵴处阳性表达。揭示了两基因在毛囊启动发育过程中的作用。

关键词：鹅毛囊发育 Wnt5a fgf4 基因表达

干扰fgf4表达可抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力

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北京口腔医学 2021年第5期29卷 265-270页

作者：赵欣王辉任倩刘瑶任爽关晓兵首都医科大学口腔医学院黏膜科北京100050

目的探索干扰成纤维细胞生长因子4(fihmhlast growth factor 4,fgf4)表达对口腔鱗状细胞癌(oral squamous fell rarrinoma,0SCC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响_,方法培养5株0SCC细胞株并检测fgf4 DMA拷贝数及mRNA的表达变化;转染siRN... 详细信息

目的探索干扰成纤维细胞生长因子4(fihmhlast growth factor 4,fgf4)表达对口腔鱗状细胞癌(oral squamous fell rarrinoma,0SCC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响_,方法培养5株0SCC细胞株并检测fgf4 DMA拷贝数及mRNA的表达变化;转染siRNA干扰fgf4表达并进行验证;干扰fgf4表达后,采用CCK-8检测0SCC细胞株HSC-3、H3I4细胞增殖能力的变化,采用Transwell方法检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果同对照组相比,干扰fgf4表达后,HSC-3、H314细胞增殖能力明显下降(Pfgf4 siRNA-002组及siRNA-003组迁移细胞数分别下降了64.52%、66.81%;在H314细胞系中,fgf4siRNA-002组及siRNA-003组迁移细胞数下降了66.81%、82.01%。同对照组相比,在HSC-3中,fgf4siRNA-002组及siRNA-003侵袭细胞数分别下降了52.34%、49.89%。在H314中,fgf4 siRNA-002组及siRNA-003侵袭细胞数分别下降了75.3%、90.63%。结论在0SCC细胞中,干扰fgf4表达可抑制0SCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力.

关键词： fgf4 口腔鳞状细胞癌细胞增殖细胞迁移细胞侵袭

fgf4和BMP4基因表达与鹅毛囊发生发育的关联研究

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FGF4和BMP4基因表达与鹅毛囊发生发育的关联研究

HGF和fgf4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会

作者：闫文英孙永峰吴伟动物遗传育种分子遗传学实验室吉林农业大学动物生产及产品质量安全省部共建教育部重点实验室吉林农业大学

＜正＞引言毛囊是人和多种动物毛的生长载体,是受多种信号分子相互调控的高度复杂的生物系统。对人类、鼠和鸡的研究中发现,成纤维细胞生长因子（fgf4）和骨形成蛋白（BMP4）是毛囊发育过程中的两个重要成员,

关键词：鹅毛囊发生发育 fgf4 BMP4 基因表达

来源： cnki会议评论

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HGF和FGF4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用

HGF和fgf4体外诱导人骨髓CD45^-CD117^-细胞向肝细胞分化的研究

全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议

作者：孙荷董学君张卉张国荣邵健忠项黎新绍兴市人民医院分子医学中心浙江大学生命科学学院细胞与基因工程重点研究实验室

目的评估HGF和fgf4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用。方法CCL0.5ml/kg体重剂量隔日腹腔注射ICR小鼠,48小时后取小鼠肝脏制备肝损伤条件培养液。ELISA法分别测定肝损伤0、1.5、3、6、12、24、48小时后释放的HGF和fgf4量。分... 详细信息

目的评估HGF和fgf4在诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用。方法CCL0.5ml/kg体重剂量隔日腹腔注射ICR小鼠,48小时后取小鼠肝脏制备肝损伤条件培养液。ELISA法分别测定肝损伤0、1.5、3、6、12、24、48小时后释放的HGF和fgf4量。分离小鼠股骨和胫骨,吹出骨髓,用淋巴细胞分离液和贴壁培养法分离小鼠骨髓间充质干细胞。用肝损伤条件培养液培养骨髓间充质干细胞,分别加HGF、fgf4抗体或HGF合并fgf4抗体,以封闭培养液HGF、fgf4因子,未添加细胞因子抗体的培养液为对照组;培养第7天和14天,ELISA法检测分化细胞释放的肝细胞特异性蛋白ALB的量,免疫荧光法检测胞浆中产生的ALB、AFP和CK-19的量,评价骨髓间充质干细胞向肝系细胞的分化状况。结果各时间点,肝损伤条件培养液中的HGF和fgf4的量均高于正常肝脏培养液组,且HGF和fgf4在肝损伤后持续上升至3小时达到最高峰,随后下降;fgf4在损伤12小时后再次升高。HGF、fgf4单独和二者共同被封闭,在诱导第7天时肝细胞特异性蛋白ALB的表达量开始下降,但与未封闭的对照组相比无统计学差异(p>0.05)。诱导第14天时,封闭组ALB表达量更低,与对照组相比,二者差异具有统计学意义(pfgf4的逆向结果证明,HGF、fgf4是诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的重要因予,同时提示,还有其它因子可诱导肝细胞的定向分化。

关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞 HGF fgf4 定向分化

来源： cnki会议评论

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世界华人消化杂志 2004年第3期12卷 697-701页

作者：李文晰段芳龄马军陈香宇郑州大学消化疾病研究所河南省郑州市450003

目的:探讨在HGF、fgf4诱导下人骨髓CD45-CD117-细胞能否向肝细胞分化,并探讨两种生长因子在诱导分化中可能的作用机制. 方法:骨髓来自4名4-40岁健康志愿者的胸骨或髂骨.用两步磁式分离法分离出CD45-CD117-细胞,分别用含有fgf4,HGF,HGF+F... 详细信息

目的:探讨在HGF、fgf4诱导下人骨髓CD45-CD117-细胞能否向肝细胞分化,并探讨两种生长因子在诱导分化中可能的作用机制. 方法:骨髓来自4名4-40岁健康志愿者的胸骨或髂骨.用两步磁式分离法分离出CD45-CD117-细胞,分别用含有fgf4,HGF,HGF+fgf4或不加生长因子的DMEM培养基进行培养,相应地分为A,B,C,D四组.分别于新分离时和培养7 d,14 d,21 d,28 d时留细胞.备作免疫细胞化学检测AFP,CK18,白蛋白,PAS染色检测糖原等肝系细胞的特征型标志,RT-PCR检测C、D组细胞c-met(HGF受体)和fgfR2(fgf4R)mRNA表达情况. 结果:A,B,C三组加生长因子诱导培养后的细胞均可检测到肝系细胞的标志,D组细胞不加生长因子培养后没有检测到肝系细胞的标志.c-met和fgfR2mRNA在新分离的和D组培养7 d,14 d时的细胞均有较弱的表达,而在C组细胞诱导培养7 d,14 d时表达升高. 结论:HGF和fgf4可诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞样细胞分化.生长因子诱导分化的作用可能通过与其受体之间的正反馈调节.

关键词： HGF fgf4 体外诱导骨髓干细胞 CD45^- 细胞 CD117^-细胞肝细胞细胞分化

Methylation patterns in 5' terminal regions of pluripotency-related genes in bovine in vitro fertilized and cloned embryos

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Journal of Genetics and Genomics 2010年第5期37卷 297-304页

作者： Jie Lan Song Hua Hailin Zhang Yongli Song Jun Liu Yong Zhang Key Laboratory of Animal Reproductive Physiology & Embryo Technology Institution of biotechnology College of Veterinary Medicine Northwest A & F University Yangling 712100 China

In order to investigate DNA methylation profiles of five pluripotency-related genes （Oct4, Sox2, Nanog, Rexl and fgf4） during bovine maternal to zygotic transition （MZT） in both in vitro fertilized （IVF） and nuclear transfer （NT） embryos, sodium bisulfite sequencing method was used to detect DNA methylation levels, accompanied by the statistical analysis of embryo developmental rates. The results showed that Oct4, Nanog, Rexl and fgf4 were respectively demethylated by 25.22% （P 〈 0.01）, 3.84% （P 〉 0.05）, 31.82% （P 〈 0.01） and 10% （P 〉 0.05） while Sox2 retained unmethylafion during MZT in IVF embryos. By contrast, Oct4 and Rexl respectively underwent demethylation by 23.04% （P 〈 0.01） and 6.02% （P 〉 0.05）, and, reversely, Sox2, Nanog and fgf4 respectively experienced remethylation by 0.84% （P 〉 0.05）, 5.39% （P 〉 0.05） and 5.46% （P 〉 0.05） during MZT in NT embryos. Interestingly, the CpG 14 site of Sox2 was specifically methylated in both 8-cell and morula NT embryos. In addition, the development of blastocysts between IVF and NT embryos showed no significant difference. DNA methylation analysis showed that only Oct4 and Sox2 underwent the correct methylation reprogramming process, which may be responsible for the development of blastocysts of NT embryos to a certain extent. In conclusion, the five genes respectively experienced demethylation to different extents and incomplete DNA methylation reprogramming during bovine MZT in both IVF and NT embryos, suggesting that they may be used as indicators for bovine embryo developmental competence.

关键词： bovine DNA methylation fgf4 Nanog Oct4 Rex1 Sox2

成纤维生长因子4在妊娠早期牛胎盘组织的分布及表达特点

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畜牧兽医学报 2019年第8期50卷 1685-1693页

作者：张芮琪张莹利蒋明徐越徐永平卿素珠西北农林科技大学动物医学院

成纤维生长因子4(fgf4)是在哺乳动物胚胎发育过程中第一个被发现的fgf分子,在促进滋养层细胞的增殖方面具有广泛的作用。已经证实,fgf4是小鼠早期胚胎发育过程中的一个重要因子,异常表达会影响早期胚胎的发育,并影响小鼠胎盘的发育及功... 详细信息

成纤维生长因子4(fgf4)是在哺乳动物胚胎发育过程中第一个被发现的fgf分子,在促进滋养层细胞的增殖方面具有广泛的作用。已经证实,fgf4是小鼠早期胚胎发育过程中的一个重要因子,异常表达会影响早期胚胎的发育,并影响小鼠胎盘的发育及功能。截至目前,有关fgf4在牛胎盘发育过程中的表达尚无报道。本试验运用石蜡切片HE、PAS、免疫荧光染色技术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对妊娠早期牛胎盘组织结构特征及胎盘组织中fgf4的细胞定位和mRNA表达规律进行研究。结果显示,在所检测的各胎龄胎盘的羊膜、子叶及肉阜组织均检测到fgf4 mRNA,各部位表达量依区域和孕龄而异;在牛胎盘块的单核滋养层细胞、滋养层巨细胞、肉阜上皮、子宫内膜上皮及子宫腺等部位的细胞质均观察到fgf4阳性反应,滋养层巨细胞及子宫腺上皮呈强染色。可见,在妊娠早期的牛胎盘组织存在fgf4及其mRNA,随着胎龄的增加其表达量在胎儿胎盘(子叶)表现为先降低而后增高的规律,而在母体胎盘(肉阜组织)则呈现先逐渐升高然后降低的趋势。

关键词： fgf4 妊娠早期牛胎盘表达