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基于Fas/Fasl介导的线粒体凋亡探讨枫杨总黄酮治疗RA的作用机制

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基于Fas/FasL介导的线粒体凋亡探讨枫杨总黄酮治疗RA的作用机制

作者：侯孜明湖北民族大学

学位级别：硕士

目的:观察枫杨总黄酮(Pterocarya hupehensis skan total flavonoids,PHSTF)通过对fas/fas L介导的线粒体凋亡的影响,从而对胶原诱导型关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(Collagen induced arthritis-Fibroblast-like synoviocytes,CIA-FLS)的促凋亡作用和对胶原诱导型关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)大鼠的治疗作用,为枫杨在临床治疗类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)提供一定的实验基础。方法:采用超声辅助提取、D-101大孔树脂纯化PHSTF,直接测定法检测PHSTF纯度。体外培养CIA-FLS细胞,CCK-8检测PHSTF对CIA-FLS细胞存活率的影响,筛选出合适的药物浓度及作用时间;流式细胞术检测PHSTF对细胞凋亡的影响;Western Blot检测fas、fas L、Bax、Bcl-2、t-Bid、Cleaved-Caspase8、Cleaved-Caspase9、Cleaved-Caspase3蛋白表达水平,加入fas抑制剂KR-33493(20μM)后进一步检测相关蛋白的表达水平。体内实验采用SD大鼠构建CIA模型,分为Control组、Model组、PHSTF组、雷公藤多苷(Tripterygium glycosides,TG)组,评估大鼠关节炎指数(Arthritis Index,AI)和足趾肿胀度;ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量;HE染色观察膝关节病理学变化;WB检测滑膜组织相关蛋白表达水平。结果:提取的PHSTF纯度为78%;流式细胞术显示PHSTF促进CIA-FLS细胞凋亡,并且随药物浓度增加促凋亡作用越明显(Pfas、fas L、Bax、t-Bid、Cleaved-Caspase8、Cleaved-Caspase9、Cleaved-Caspase3蛋白表达均增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(Pfas抑制剂KR-33493干扰fas信号通路后,发现其逆转了fas信号通路相关蛋白的表达。体内实验结果显示,与Control组比较,Model组大鼠AI评分和足跖肿胀程度升高(Pfas L、Cleaved-Caspase9、Cleaved-Caspase3蛋白表达减少(Pfas、fas L、Bax、t-Bid、Cleaved-Caspase8、Cleaved-Caspase9、Cleaved-Caspase3蛋白表达均增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(Pfas/fas L介导的线粒体凋亡。

关键词：枫杨总黄酮类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 CIA大鼠 Fas/Fasl

前列消汤干预EAP小鼠Fas/Fasl表达调控PrF细胞凋亡的研究

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前列消汤干预EAP小鼠Fas/FasL表达调控PrF细胞凋亡的研究

作者：杨青云广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过建立Pr F细胞体外诱导纤维化模型,采用ELISA法检测fas/fas L的表达水平,流式细胞术检测Pr F细胞凋亡率,探讨前列腺消汤对EAP小鼠Pr F细胞凋亡作用机制,为后续中医药防治CP提供新的思路和方法。方法:动物实验:采用C57BL/6小鼠60... 详细信息

目的:通过建立Pr F细胞体外诱导纤维化模型,采用ELISA法检测fas/fas L的表达水平,流式细胞术检测Pr F细胞凋亡率,探讨前列腺消汤对EAP小鼠Pr F细胞凋亡作用机制,为后续中医药防治CP提供新的思路和方法。方法:动物实验:采用C57BL/6小鼠60只,随机抽取30只作为模型组,20只作为药物血清组,10只作为无药物血清组,10只作为空白组。1.采用“弗氏完全佐剂+前列腺蛋白提纯液”多点皮下及腹腔注射的方法对30只模型组小鼠建立EAP小鼠模型。2.无菌条件下摘取造模成功前列腺组织标本,进行HE染色,对各组小鼠前列腺组织进行病理学观察。3.将20只药物血清组小鼠进行前列消汤药物灌胃,共灌胃7d,每日1次,10只为无药物血清组小鼠不做灌胃处理。按照《动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表》计算每只小鼠每天所需药物剂量为200mg/kg。当第7天灌胃结束后2h开始进行眼球取血,取血后常温下静置2h,离心(温度4℃,时间:10min,转速:10000r/min),分离提取血清,56℃恒温水浴箱中30min血清灭活,0.22μm微孔滤膜滤过除菌,分装至离心管后放-20℃冰箱冻存备用。细胞实验:1.摘取造模成功的小鼠前列腺,使用“酶消化法+差速贴壁法”进行Pr F原代细胞培养、传代、纯化,TGF-β诱导建立体外前列腺Pr F细胞模型。2.免疫荧光法鉴定Pr F细胞。3.CCK8检测细胞生长曲线、药物血清对Pr F细胞毒性、TGF-β干预Pr F细胞增殖情况、药物血清干预TGF-β1刺激后各组Pr F细胞增殖情况。4.ELISA法检测药物血清干预后各组Pr F细胞fas、fas L蛋白情况。5.流式细胞术检测药物血清干预后各组Pr F细胞凋亡率。结果:1.EAP小鼠模型病理学观察:空白组腺腔结构完整,基底膜完好,腔内未见粉红色分泌物,腺体和间质无或少量炎性细胞浸润,间质无充血水肿,未见明显成纤维细胞,无纤维化改变。模型组腺腔结构破坏,部分萎缩或扩张,基底膜损伤,腔内可见大量粉红色分泌物,腺体和间质周围可见大量的炎性细胞浸润,间质充血水肿增厚,可见大量成纤维细胞,有纤维化改变,表示EAP模型造模成功。2.药物血清干预各组TGF-β诱导后的Pr F细胞增殖:药物血清干预各组TGF-β诱导后的Pr F细胞增殖:TGF-β刺激后模型组、溶剂组与空白组比较,Pr F细胞增殖明显(Pfas、fas L蛋白表达:药物血清低、中、高剂量组与空白组比较均(Pfas、fas L蛋白表达,且药物血清浓度越高,fas、fas L蛋白表达越高。4.流式细胞术检测药物血清干预后各组Pr F细胞凋亡率:药物血清低、中、高剂量组与空白组比较均有显著差异(PFas/Fasl蛋白表达,使EAP小鼠Pr F凋亡增加,从而减轻前列腺腺体纤维化程度,且呈明显的量效关系。

关键词：前列消汤 EAP Fas/Fasl 成纤维细胞细胞凋亡

泻肺汤对肺纤维化模型鼠肺组织病理形态变化及Fas/Fasl蛋白表达的影响

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中国现代应用药学 2020年第9期37卷 1035-1039页

作者：史旭锋安方玉颜春鲁刘永琦骆亚莉伍志伟刘雪松李杨张雪甘肃中医药大学兰州730000 甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究省级重点实验室兰州730000

目的观察泻肺汤对博莱霉素致肺纤维化模型鼠肺组织病理形态变化及Fas/Fasl蛋白表达的影响。方法SPF级SD大鼠84只随机分为空白对照组,博来霉素模型对照组,泻肺汤低、中、高剂量组,醋酸泼尼松组,每组14只。除空白对照组外,其余各组采用气... 详细信息

目的观察泻肺汤对博莱霉素致肺纤维化模型鼠肺组织病理形态变化及Fas/Fasl蛋白表达的影响。方法SPF级SD大鼠84只随机分为空白对照组,博来霉素模型对照组,泻肺汤低、中、高剂量组,醋酸泼尼松组,每组14只。除空白对照组外,其余各组采用气管滴注博莱霉素法制备肺纤维化大鼠模型,空白对照组气管内滴注等量生理盐水,造模24 h后,泻肺汤低、中、高剂量组灌胃泻肺汤(10,20,40 g·kg^-1·d^-1),醋酸泼尼松组灌胃醋酸泼尼松(1.8 mg·kg^-1·d^-1),空白对照组和博来霉素模型对照组用等体积生理盐水灌胃,第29天处死动物,HE染色法观察肺组织的病理形态变化,ELISA法测定各组大鼠细胞间黏附因子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血清结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的含量,实时荧光定量PCR法测定各组大鼠肺组织fas和fasl的基因表达,Western blotting检测各组大鼠肺组织fas和fasl的蛋白表达。结果与博来霉素模型对照组相比,泻肺汤各剂量组血清ICAM-1和CTGF均显著降低,肺组织fas和fasl的基因表达也均显著减弱(Pfas和fasl的蛋白表达均显著减弱(PFas/Fasl表达来显著改善博来霉素诱导的肺纤维化,表明泻肺汤对博来霉素诱导的大鼠纤维化改善与Fas/Fasl凋亡通路有关。

关键词：泻肺汤肺维化细胞因子 Fas/Fasl

二甲双胍治疗对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢中Fas/Fasl表达的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2018年第6期39卷 825-830页

作者：田宏欧阳远朔丁上书王蕊孔宁王子阳申琳路明张晓田武捷胡海波周劲松西安交通大学医学部基础医学院人体解剖与组织胚胎学系陕西西安710061 西安交通大学医学部基础医学院生殖医学研究中心陕西西安710061 石河子大学医学院新疆石河子832003

目的探讨二甲双胍(dimethylbiguanide,DB)治疗前后多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠卵巢组织中fas(factor associated suicide)和fasl(factor associated suicide ligand)蛋白的表达变化,为研究DB临床治疗PCOS的分子机制提供实验资料。方法选取30只85天龄SD雌性大鼠,随机分为PCOS组(10只)、DB治疗组(10只)、对照组(10只)。前两组通过皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,PCOS组和对照组喂服安慰剂,同期DB治疗组喂服二甲双胍。14d后取出各组大鼠卵巢称重,观察卵巢大体解剖和组织学结构变化(HE染色),并取外周血测定血清胰岛素(insulin,INS)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和睾酮(testosterone,T)水平。采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测3组卵巢组织中fas蛋白和fasl蛋白的表达变化。结果 (1)PCOS组大鼠卵巢的重量、体积、平均卵巢面积、最大卵泡直径和卵泡膜厚度均比对照组增加;DB治疗组大鼠以上各指标均比PCOS组降低,所有差异均有统计学意义(P均fas蛋白和fasl蛋白主要表达于囊状卵泡颗粒细胞胞质内,且在PCOS组囊状扩张卵泡中近卵泡腔的1～2层颗粒细胞中表达较强,而在初级卵泡卵母细胞胞质和透明带表达较弱;(4)Western blot显示,PCOS组大鼠卵巢组织中fas和fasl蛋白的表达较对照组增高,但DB治疗组fas蛋白的表达较对照组和PCOS组均降低,而fasl蛋白的表达却较对照组增加,所有差异均具有统计学意义(P均Fas/Fasl的表达改变是DHEA诱导的PCOS组大鼠卵泡异常凋亡的主要通路之一,可以通过DB治疗逆转卵巢多囊性改变。

关键词：多囊卵巢综合征二甲双胍 Fas/Fasl 大鼠

重楼总皂苷对人胃癌MKN-45细胞凋亡及Fas/Fasl信号通路的影响

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中国中药杂志 2015年第7期40卷 1388-1391页

作者：方海雁龚晓燕洪星辉华明柳黄金玲安徽中医药大学安徽合肥230012 南京中医药大学江苏南京210023

目的:研究重楼总皂苷(Paridis Rhizoma total saponins,PRTS)诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡的机制。方法:在前期研究基础上,将PRTS设定3个不同质量浓度(5,10,20 mg·L^(-1))处理人胃癌细胞12 h,采用荧光染色法观察MKN-45细胞凋亡形态学变化... 详细信息

目的:研究重楼总皂苷(Paridis Rhizoma total saponins,PRTS)诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡的机制。方法:在前期研究基础上,将PRTS设定3个不同质量浓度(5,10,20 mg·L^(-1))处理人胃癌细胞12 h,采用荧光染色法观察MKN-45细胞凋亡形态学变化;流式细胞术(Annexin V/PI双染色法)测定细胞凋亡率;ELISA测定MKN-45细胞caspase-3,caspase-8酶活性;Western blotting法检测fas,fasl蛋白表达水平。结果:在荧光显微镜下,经PRTS处理的MKN-45细胞,可见典型的凋亡形态学特征;PRTS可明显增加细胞凋亡率,且PRTS 20 mg·L^(-1)与对照组相比凋亡率有显著差异(Pfas,fasl蛋白表达明显增高(Pfas和fasl的表达有关。

关键词：重楼总皂苷细胞凋亡 caspase-3 caspase-8 Fas/Fasl

Fas/Fasl and Complement Activation are Associated with Chronic Active Epstein-Barr Virus Hepatitis

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Journal of Clinical and Translational Hepatology 2023年第3期11卷 540-549页

作者： Jing Lin Miao-Fang Su Jiao-Long Zheng Lei Gu Hai-Cong Wu Xia Wu Hai-Yan Lin Zhi-Xian Wu Dong-Liang Li Department of Hepatobiliary Medicine Fuzong Clinical Medical College of Fujian Medical University900TH Hospital of the Joint Logistic Support ForcePLAFuzhouFujianChina Department of Respiratory and Critical Care Medicine The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical UniversityChongqingChina

Background and Aims:Chronic active Epstein-Barr virus hepatitis(CAEBVH)is a rare and highly lethal disease char-acterized by hepatitis and hepatomegaly.This study aimed to investigate the clinicopathological features and pathogenic mechanisms of CAEBVH.Methods:Ten patients with con-firmed Epstein-Barr virus hepatitis infection were enrolled.The clinicopathological characteristics of these patients were summarized and analyzed.Flow cytometry was utilized to detect peripheral blood immune cell phenotypes and whole exome sequencing was used to explore pathogenic genetic mechanisms.Lastly,immunohistochemical staining was em-ployed to verify pathogenic mechanisms.Results:Clinical features observed in all Epstein-Barr virus hepatitis patients included fever(7/10),splenomegaly(10/10),hepatomeg-aly(9/10),abnormal liver function(8/10),and CD8+T cell lymphopenia(6/7).Hematoxylin and eosin staining revealed lymphocytic infiltration in the liver.Positive Epstein-Barr vi-rus-encoded small RNA in-situ hybridization(EBER-ISH)of lymphocytes of liver tissues was noted.Whole exome se-quencing indicated that cytotoxic T lymphocytes and the complement system were involved.The expression of CD8,fas,fasl,and Caspase-8 expression as well as apoptotic markers was enhanced in the Epstein-Barr virus hepatitis group relative to the controls(pFas/Fasl and complement activation were involved in CAE-BVH patients.

关键词： Chronic active EB virus hepatitis Fas/Fasl Complement

硒酵母联合地塞米松治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎的疗效及其对氧化/抗氧化系统和Fas/Fasl表达的影响

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药物评价研究 2021年第9期44卷 1956-1960页

作者：张娜易茂林田双黎黄冈市中心医院乳甲外科湖北黄冈438000 华中科技大学同济医学院附属同济医院乳甲外科湖北武汉430030

目的探讨硒酵母联合地塞米松治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎的疗效及其对患者氧化/抗氧化系统及Fas/Fasl表达的影响,为其临床诊治提供参考。方法选择黄冈市中心医院2018年5月—2020年6月收治的116例慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者作为研究对象... 详细信息

目的探讨硒酵母联合地塞米松治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎的疗效及其对患者氧化/抗氧化系统及Fas/Fasl表达的影响,为其临床诊治提供参考。方法选择黄冈市中心医院2018年5月—2020年6月收治的116例慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者作为研究对象,按照治疗方法将患者分为对照组和观察组,各58例。对照组患者肌内注射地塞米松磷酸钠注射液1 mg/次,2次/周。观察组在对照组的基础上口服硒酵母片,2片/次,2次/d。两组均进行6个月的治疗。观察两组患者的临床疗效,比较两组治疗前后甲状腺功能、T淋巴细胞、血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-PX)水平及fas和fasl表达情况。结果治疗后,观察组患者总有效率为94.83%,明显高于对照组的79.31%(Pfas及fasl表达明显降低(P<0.05),且观察组更为显著(P<0.05)。结论硒酵母联合地塞米松治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者可以明显改善患者甲状腺功能和氧化/抗氧化系统,有效控制细胞凋亡,增强机体免疫功能,效果显著,具有一定的临床应用价值。

关键词：硒酵母地塞米松慢性淋巴细胞性甲状腺炎氧化/抗氧化系统 Fas/Fasl

Fas/Fasl、p38 MAPK通路在溃疡性结肠炎大鼠中的表达及雷公藤多苷的作用

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中国药理学通报 2019年第2期35卷 218-223页

作者：杨强钦丹萍杨新艳岑刚代群张春丽汪瑶浙江中医药大学第一临床医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第一医院消化内科浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院胃肠研究实验室浙江杭州310006 浙江中医药大学附属第一医院病理科浙江杭州310006

目的探讨Fas/Fasl及p38 MAPK信号通路在溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达变化,以及雷公藤多苷(TWP)对其的影响。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型。对大鼠结肠炎症进行评分;以表达谱技术分析Fas/Fasl的差异表达... 详细信息

目的探讨Fas/Fasl及p38 MAPK信号通路在溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达变化,以及雷公藤多苷(TWP)对其的影响。方法采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型。对大鼠结肠炎症进行评分;以表达谱技术分析Fas/Fasl的差异表达,并用real-time PCR技术进行验证;继而DAVID数据库信号通路分析显示,Fas/Fasl调节UC的炎症活动涉及p38 MAPK信号通路,同时在表达谱中分析此信号通路中的相关分子,并以real-time PCR法加以验证;最后采用RT-PCR法及Western blot法检测该信号通路末端炎症因子的表达。结果 UC大鼠结肠炎症评分明显升高,TWP能明显降低其炎症评分; fas/fas L系统及p38 MAPK通路中的fas L、MAPK14(p38α)、TNF-α、IL-1β在UC大鼠炎症活动时均呈上调表达,TWP能够明显下调上述指标的表达。结论 TWP能够通过fas/fas L系统及p38MAPK信号通路对UC炎症活动进行调控。

关键词：雷公藤多苷溃疡性结肠炎 Fas/Fasl p38 MAPK TNF-α IL-1β

桂药生精胶囊对肾阳虚型弱精症患者精子DFI及凋亡因子fas、fasl表达影响临床研究

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桂药生精胶囊对肾阳虚型弱精症患者精子DFI及凋亡因子Fas、Fasl表...

作者：林泽森广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过观察桂药生精胶囊(曾用名:生精宝胶囊)治疗肾阳虚型弱精症的临床疗效,以及精子DFI(DNA fragmentation index,DFI)及凋亡相关因子fas、fasl表达影响,探讨桂药生精胶囊治疗弱精症可能作用机理,为临床中药治疗弱精症提供新思路及... 详细信息

目的:通过观察桂药生精胶囊(曾用名:生精宝胶囊)治疗肾阳虚型弱精症的临床疗效,以及精子DFI(DNA fragmentation index,DFI)及凋亡相关因子fas、fasl表达影响,探讨桂药生精胶囊治疗弱精症可能作用机理,为临床中药治疗弱精症提供新思路及理论依据。方法:将符合纳入标准的40例肾阳虚型弱精症患者按随机数字表法以每组20例随机分为对照组和治疗组,治疗组口服桂药生精胶囊,每次3粒,1天3次;对照组口服麒麟丸,每次6g,每天3次;两组均以12周为一疗程。在治疗前后分别对患者进行精液常规与精子DFI,凋亡因子fas、fasl表达检测和进行证候评分。结果:观察期间治疗组有1例因到外地出差因素服药依从性差脱落,最后完成观察19例;对照组有2例病例脱落,最后完成观察18例;治疗组和对照组在治疗前的精子浓度,PR,PR+NP,DFI碎片率,fas、fasl表达水平,中医证候学评分的统计学分析显示,差异无统计学意义(P>0.05)。两组病例经过12周治疗后,治疗后观察组和对照组前向精子PR(%)比较,差异有统计学意义(Pfas表达水平为396.20?36.88,对照组fas表达水平为430.21?61.55,治疗组和对照组fas蛋白均有下降,差异有统计学意义(Pfasl表达水平为163.01?16.99,对照组fas表达水平为159.38?19.66;治疗后差异无统计学意义(P>0.05)结论:桂药生精胶囊能明显增加肾阳虚型弱精症患者的精子前向运动,改善精液质量,降低患者的精子碎片率,降低凋亡因子fas的表达,且优于对照组,桂药生精胶囊能明显改善肾阳虚型弱精症患者的精子活力,临床疗效明显优于对照组,其作用可能通过降低精子DFI及凋亡因子fas、fasl表达来实现的。

关键词：弱精子不育症桂药生精胶囊肾阳虚症 DFI Fas/Fasl