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fstl3在结直肠癌中的表达及临床价值的初步探讨

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FSTL3在结直肠癌中的表达及临床价值的初步探讨

作者：田梦翔中南大学

学位级别：硕士

研究目的:卵泡抑素样蛋白3(fstl3)在多种恶性肿瘤当中高表达并在肿瘤的进展当中扮演重要角色,但目前已有的研究缺乏fstl3在结直肠癌(CRC)中的具体表达情况及其临床意义的探索。本研究探讨了fstl3在III期CRC中的表达情况,并评估其作为CR... 详细信息

研究目的:卵泡抑素样蛋白3(fstl3)在多种恶性肿瘤当中高表达并在肿瘤的进展当中扮演重要角色,但目前已有的研究缺乏fstl3在结直肠癌(CRC)中的具体表达情况及其临床意义的探索。本研究探讨了fstl3在III期CRC中的表达情况,并评估其作为CRC预后标志物的价值。研究方法:通过GEPIA、Ualcan、Human Protein Atlas project等公共数据库的数据,分析fstl3在CRC组织中的表达情况及其表达水平的高低与患者预后的关系。随后采用回顾性研究的方法,收集2011-2014年行根治性手术切除的III期结直肠癌患者的临床病理资料,用免疫组化的方法得到fstl3在CRC组织及癌旁正常组织当中的表达情况,结合收集到的患者临床信息及病理资料,采用单因素和多因素分析评估fstl3的表达水平与患者的临床病理特征之间的关系及对CRC患者预后的影响。最后我们选取了HCT-116和DLD-1细胞进行fstl3的敲低和过表达,随后进行细胞划痕试验及Transwell迁移试验及侵袭试验评估fstl3对体外CRC细胞的侵袭迁移能力的影响。研究结果:GEPIA、Ualcan、Human Protein Atlas project等公共数据库的分析显示fstl3在结直肠癌组织当中相对癌旁正常组织呈现高表达,且fstl3高表达的CRC患者的预后明显较低表达患者差。免疫组化显示相对癌旁组织,fstl3在CRC肿瘤组织、转移淋巴结组织和脉管癌栓组织中呈现高表达。fstl3的高表达组与低表达组在III期CRC患者的肿瘤直径(P=0.013)、淋巴结转移分期(Pfstl3的表达(P=0.007)与CRC患者的总生存期有关,肿瘤直径(P=0.029)、脉管癌栓形成(Pfstl3的表达(P=0.032)与CRC患者的无病生存期有关,fstl3是CRC患者的一个独立预后因素。体外细胞实验发现fstl3的敲低和过表达可以对HCT-116细胞和DLD-1细胞的侵袭和迁移能力分别产生抑制和促进作用。研究结论:***3在结直肠癌组织中为高表达,且fstl3在结直肠癌组织当中的高表达与III期CRC患者的肿瘤直径的大小、淋巴结转移、肿瘤亚分期(IIIA、IIIB、IIIC)和脉管癌栓(IVE)之间具有显著的相关性;***3在结直肠癌组织中高表达患者的总生存期和无病生存期均短于低表达患者;3.体外细胞实验显示fstl3促进了结直肠癌细胞株的迁移和侵袭。图15幅,表6个,参考文献76篇

关键词： fstl3 结直肠癌临床病理肿瘤预后

fstl3在结肠癌的临床意义、预后价值及作用机制的初步探索

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FSTL3在结肠癌的临床意义、预后价值及作用机制的初步探索

作者：周晓瑞江苏大学

学位级别：硕士

目的结肠癌发病率高且近年呈上升趋势。本文旨在探究编码基因卵泡抑素样蛋白3(Follistatin-like 3,fstl3)及其表达在结肠癌的临床意义、预后价值及作用机制。方法利用来自TCGA-COAD数据库中肿瘤组织、癌旁组织、正常组织的fstl3基因表... 详细信息

目的结肠癌发病率高且近年呈上升趋势。本文旨在探究编码基因卵泡抑素样蛋白3(Follistatin-like 3,fstl3)及其表达在结肠癌的临床意义、预后价值及作用机制。方法利用来自TCGA-COAD数据库中肿瘤组织、癌旁组织、正常组织的fstl3基因表达及临床病理特征的相关数据,分析fstl3基因在不同组织的表达差异;fstl3表达在各期结肠癌中的诊断价值;fstl3表达与结肠癌患者临床病理特征的相关。分析fstl3过表达可否作为独立危险因素影响结肠癌预后。富集分析fstl3的生物学功能以及参与的信号通路。利用CRISPR/Cpf1编辑下调结肠癌细胞中编码基因fstl3表达,构建稳定的fstl3低表达细胞系,q PCR(实时荧光定量PCR)检验基因下调有效性。通过CCK-8、Transwell实验检验fstl3表达下调后,结肠癌细胞系RKO、SW480的增殖、侵袭能力的变化情况。收集来自本院的31组结肠癌及癌旁病理组织,提取组织RNA,通过q PCR检验不同组织来源的fstl3表达是否有明确差异;通过包埋、孵育、染色等免疫组化步骤,制备组织切片,显微镜下观察切片染色情况,对比fstl3蛋白在结肠癌和癌旁组织中的分布情况;收集31名患者临床特征信息,分析fstl3蛋白表达与临床病理特征的相关性。结果1.分析TCGA-COAD数据库中的fstl3基因表达,发现肿瘤组织fstl3基因表达较癌旁组织、正常组织均高;不同T分期、淋巴结转移、肿瘤位置、临床分期肿瘤组织之间的fstl3基因表达有显著差异;fstl3基因表达对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期结肠癌的诊断价值递增;fstl3基因高表达与T分期、N分期、M分期、临床分期和患者的生存状况有关;fstl3基因高表达与全部患者、T3/T4组、N0组、M0组、I/II期组、III/IV期组患者的总体生存率低相关;多变量Cox分析发现可视fstl3基因高表达为影响结肠癌患者总体生存率的独立危险因素。2.富集分析显示fstl3蛋白有负调控TGF-β/BMP信号通路、影响Smad蛋白信号转导、正调控Smad蛋白磷酸化、负调控细胞分化、影响血管生成、调节凋亡信号通路等作用。3.q PCR检测CRISPR/Cpf1编辑下调fstl3的结肠癌细胞系(RKO、SW480),发现实验组结肠癌细胞中fstl3基因表达较对照组显著下调。CCK-8、transwell实验显示fstl3表达下调后结肠癌细胞的增殖、侵袭能力显著弱于对照组。4.q PCR检测31组病理组织显示结肠癌中fstl3基因表达显著高于癌旁组织。免疫组化结果显示结肠癌组织细胞中的fstl3蛋白表达较癌旁组织细胞中明显增高,分析fstl3蛋白高表达与患者临床特征,示fstl3蛋白高表达与肿瘤神经侵犯、中低分化显著相关。结论数据库分析显示fstl3基因表达与结肠癌患者预后相关,细胞实验显示fstl3表达与结肠癌细胞的增殖、侵袭相关,免疫组化分析显示结肠癌组织中的fstl3蛋白表达显著高于癌旁组织。fstl3有潜质成为结肠癌诊断、预后相关的生物标志物。

关键词：结肠癌 fstl3 临床特征预后 CRISPR/Cpf1 免疫组化

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fstl3基因在绵羊常年发情中的功能研究

FSTL3基因在绵羊常年发情中的功能研究

作者：雷梦媛四川农业大学

学位级别：硕士

本实验旨在从分子水平和细胞水平上探究fstl3在绵羊常年发情中的功能,来揭示fstl3与绵羊繁殖季节性间的关系,为进一步阐明绵羊常年发情的分子机理提供理论基础。通过验证不同生理状态下小尾寒羊和滩羊卵巢中fstl3基因的表达差异情况,以... 详细信息

本实验旨在从分子水平和细胞水平上探究fstl3在绵羊常年发情中的功能,来揭示fstl3与绵羊繁殖季节性间的关系,为进一步阐明绵羊常年发情的分子机理提供理论基础。通过验证不同生理状态下小尾寒羊和滩羊卵巢中fstl3基因的表达差异情况,以常年发情的小尾寒羊卵巢颗粒细胞为研究对象,建立稳定的绵羊卵巢颗粒细胞的原代培养体系,在细胞水平上对fstl3基因进行RNA干扰,利用Real-time PCR、Western-Blot以及免疫荧光技术分别在RNA水平和蛋白水平上验证fstl3蛋白表达的抑制情况,并通过放射性免疫分析检测fstl3基因被干扰后颗粒细胞中雌二醇与孕酮浓度的变化,实验结论如下：1.通过RT-PCR检测处于不同生理状态下的小尾寒羊和滩羊卵巢组织中fstl3基因的表达量,发现在两种绵羊的卵巢组织中,fstl3基因的表达水平均随着发情周期呈波动性表达：fstl3基因的表达水平在发情间期达到顶峰,随着发情周期逐渐下降,并在发情期降至最低。在秋季,小尾寒羊和滩羊发情期的fstl3基因表达量没有差异。在春季时,滩羊处于乏情期,fstl3基因的表达相对稳定,保持在一个较低的水平;而小尾寒羊fstl3基因的表达水平依然成周期性变化,为了探究fstl3基因是否影响小尾寒羊的常年发情启动,我们在细胞水平上进一步研究。2.对原代培养的卵巢颗粒细胞进行FSHR免疫荧光染色,结果显示原代培养的卵巢颗粒细胞纯度高,FSHR阳性率达95%以上,可以直接进行后续实验。3.用RNAi的方法对小尾寒羊卵巢颗粒细胞中fstl3基因表达进行抑制,通过RT-PCR发现fstl3基因的3条siRNA的干扰效率分别为62.33%、49.27%、85.84%,其中SiRNA-3能有效地干扰卵巢颗粒细胞中fstl3基因的表达。4.在蛋白水平上验证RNAi的作用,Western-blot和细胞免疫荧光染色的结果表明,fstl3干扰组的蛋白表达量极显著降低(Pfstl3蛋白被有效抑制。5.对RNAi后48h的细胞培养基进行放射性免疫分析,结果显示fstl3基因的表达被抑制后,细胞培养基中的E2含量显著增加(Pfstl3基因对颗粒细胞分泌E2有一定负调控作用,对P4有正调控作用,进一步表明fstl3基因可能对绵羊的季节性繁殖有一定调控作用。

关键词： fstl3 小尾寒羊颗粒细胞 RNAi

卵泡素样3基因在结肠癌组织中的表达及其与预后的关系

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实用医学杂志 2021年第22期37卷 2871-2876页

作者：郭涛辛振王富豪淮北矿工总医院胃肠外科安徽淮北235000

目的探究卵泡素样3(fstl3)基因在结肠癌中的表达及其对预后的影响。方法通过TCGA数据库检测fstl3的表达与临床预后分析,免疫组化法检测fstl3在结肠癌病例中的表达水平,并分析其表达与结肠癌临床病理学特征及预后之间的关系。选取SW620... 详细信息

目的探究卵泡素样3(fstl3)基因在结肠癌中的表达及其对预后的影响。方法通过TCGA数据库检测fstl3的表达与临床预后分析,免疫组化法检测fstl3在结肠癌病例中的表达水平,并分析其表达与结肠癌临床病理学特征及预后之间的关系。选取SW620细胞为研究对象,分别构建fstl3基因过表达和沉默的细胞株,通过Western blot检测转染效率。MTT、克隆形成实验、Transwell实验分别检测结肠癌细胞增殖和迁移能力的变化。结果 TCGA数据库中数据显示fstl3表达明显上升,临床生存分析发现fstl3高表达患者的预后明显差于fstl3低表达患者(P fstl3对结肠癌的诊断效能较准确。在临床病例中,fstl3基因高表达(P fstl3在结肠癌中的表达与年龄(P=0.049)、TNM分期(P=0.033)、浸润深度(P=0.06)、远处转移(P=0.001)有关,而与性别(P=0.386)、淋巴转移(P=0.215)、分化程度(P=0.565)无关。并且在结肠癌组织中,fstl3高表达患者生存率显著低于低表达患者(P fstl3增强了细胞的增殖能力,敲低fstl3则细胞增殖能力降低(P fstl3使细胞迁移能力增强(P fstl3抑制了SW620细胞的迁移能力(P fstl3在结肠癌中高表达,与患者预后密切相关。沉默fstl3的表达后抑制结肠癌细胞的增殖及迁移。fstl3可能成为预测结肠癌患者发生发展及预后的分子标记物。

关键词：结肠癌 fstl3 临床病理学特征增殖迁移

基于iTRAQ技术在特发性羊水过多患者差异蛋白质组学的研究

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基于iTRAQ技术在特发性羊水过多患者差异蛋白质组学的研究

作者：岑姣广西医科大学

学位级别：硕士

目的:应用iTRAQ(isobaric tag for relative and absolute quantitation,同位素标记相对与绝对定量)技术鉴定特发性羊水过多患者和正常妊娠孕妇羊水差异蛋白质组学,从而筛选出特发性羊水过多发生发展中发挥重要作用的调控蛋白和涉及的... 详细信息

目的:应用iTRAQ(isobaric tag for relative and absolute quantitation,同位素标记相对与绝对定量)技术鉴定特发性羊水过多患者和正常妊娠孕妇羊水差异蛋白质组学,从而筛选出特发性羊水过多发生发展中发挥重要作用的调控蛋白和涉及的信号通路,为初步探讨其参与羊水调控机制提供新的思路。方法:(1)临床收集特发性羊水过多者3例和正常妊娠孕妇3例,于孕中期收集羊水,去除羊水中高峰度蛋白后进行蛋白酶解,使用iTRAQ肽段标记,高效液相及质谱检测、蛋白质鉴定和定量分析后得到羊水差异蛋白,经过生物信息学和文献查阅,筛选可能参与羊水循环动态平衡的候选蛋白。(2)临床收集20例妊娠晚期的特发性羊水过多者和20例妊娠晚期的正常孕妇的羊膜、绒毛膜、胎盘组织,应用蛋白免疫印迹方法检测CUL5、HIP1、fstl3、LAMP2候选蛋白在羊膜,绒毛膜和胎盘上的表达水平。结果:(1)本研究在羊水中共鉴定出277989张二级图谱,5430条特有肽段序列,最终鉴定到1246个羊水蛋白。特发性羊水过多组和正常组比较,得到357个差异蛋白,其中282个上调蛋白和75个下调蛋白(筛选原则:上调比值>1.2 or3,3A、CD59、SDCBP、LEP、CLIC5、NRP2、CRP、ARPC5、DYHC1、UPAR、RAB5B、COFA1、LEG3、LAMP2、fstl3、PGBM、EPHB4、CD14、MYO6、LMAN2、PDC6I、CUL5、RAB35。(3)CUL5蛋白在特发性羊水过多患者的羊膜,绒毛膜中表达差异无统计学意义,在胎盘表达上调且差异具有统计学意义(fstl3蛋白在特发性羊水过多患者的羊膜,绒毛膜,胎盘中表达上调,差异具有统计学意义(fstl3可能在羊水平衡调控中起到重要作用。结论:本研究首次利用iTRAQ技术鉴定特发性羊水过多患者羊水蛋白组质学,利用生物信息学分析发现可能调节羊水循环的潜在蛋白和涉及的通路,为羊水量的调节机制提供研究基础。fstl3蛋白在特发性羊水过多患者的羊膜,绒毛膜,胎盘中表达上调,差异具有统计学意义(fstl3可能在羊水调控中起到重要作用。

关键词：特发性羊水过多 iTRAQ技术羊水蛋白质组学羊水循环 fstl3