检索结果-南通市图书馆

中华皮肤科杂志 2020年第12期53卷 998-1003页

作者：张芙蓉郭春梅谭灿刘洋徐宇杨国玲大连市友谊医院皮肤科 116001 大连医科大学基础医学院 116044 成都市第二人民医院皮肤科 610017 杭州市第三人民医院皮肤科 310009 成都市郫都区安靖镇卫生院 611731 大连医科大学附属第一医院皮肤科 116011

目的对丝氨酸水解酶家族1(fsh1)蛋白在犬小孢子菌中进行亚细胞定位分析。方法以前期构建的犬小孢子菌fsh1质粒及载体pCAMBIA-LRP-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为模板,PCR扩增fsh1基因及EGFP基因;同时利用SnaBI/KpnI对pCAMBIA-LRP-EGFP质粒... 详细信息

目的对丝氨酸水解酶家族1(fsh1)蛋白在犬小孢子菌中进行亚细胞定位分析。方法以前期构建的犬小孢子菌fsh1质粒及载体pCAMBIA-LRP-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为模板,PCR扩增fsh1基因及EGFP基因;同时利用SnaBI/KpnI对pCAMBIA-LRP-EGFP质粒双酶切获得载体DNA,将扩增的EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得EGFP表达载体;将扩增的fsh1基因及EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得融合载体Ptrcp-fsh1-EGFP-Ttrcp。通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,用重组质粒转化犬小孢子菌,使融合基因fsh1-EGFP在真菌通用启动子(Ptrpc)和终止子(Ttrpc)调控下在犬小孢子菌中整合型表达,利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位。结果成功构建根癌农杆菌转化系统及犬小孢子菌EGFP表达载体;融合基因fsh1-EGFP在犬小孢子菌中获得整合型表达。激光共聚焦显微镜显示fsh1-EGFP融合蛋白的荧光信号呈颗粒状或团块状集中于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中。结论fsh1-EGFP融合蛋白成功定位于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中,为进一步明确犬小孢子菌fsh1基因的功能及致病机制奠定了基础。

关键词：小孢子菌属丝氨酸蛋白酶类绿色荧光蛋白质类犬小孢子菌 fsh1 亚细胞定位

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

犬小孢子菌丝氨酸水解酶fsh1全长cDNA的克隆及序列分析

引用

中国皮肤性病学杂志 2017年第1期31卷 27-30页

作者：张芙蓉徐宇刘洋杨国玲大连市友谊医院皮肤性病科辽宁大连116011 大连医科大学附属第一医院皮肤性病科辽宁大连116001

目的克隆犬小孢子菌丝氨酸水解酶fsh1基因全长c DNA,为进一步研究fsh1的功能以及其在头癣中的致病机理打下基础。方法以犬小孢子菌的总RNA为材料,采用c DNA末端快速扩增(Rapid c DNA end amplification,RACE)方法扩增犬小孢子菌丝氨酸... 详细信息

目的克隆犬小孢子菌丝氨酸水解酶fsh1基因全长c DNA,为进一步研究fsh1的功能以及其在头癣中的致病机理打下基础。方法以犬小孢子菌的总RNA为材料,采用c DNA末端快速扩增(Rapid c DNA end amplification,RACE)方法扩增犬小孢子菌丝氨酸水解酶fsh1基因的全长c DNA。结合生物学软件对其序列进行了生物信息学分析。结果该全长c DNA大小为945bp,包含44bp的5’UTR、70bp的3’UTR、开放阅读框为831bp,编码276个氨基酸。Blast搜索结果显示,该全长c DNA与已报道的编码犬小孢子菌的结构域蛋白的基因序列同源性达100%,与编码石膏样小孢子菌的结构域蛋白基因序列同源性达78%。结论首次成功获得犬小孢子菌丝氨酸水解酶fsh1基因的全长c DNA,为进一步研究其在头癣发病中的功能奠定了基础。

关键词：头癣 RACE fsh1 犬小孢子菌克隆

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

犬小孢子菌fsh1在儿童头皮与光滑皮肤组织诱导前后的表达

犬小孢子菌FSH1在儿童头皮与光滑皮肤组织诱导前后的表达

引用

作者：祝逸平大连医科大学

学位级别：硕士

目的：犬小孢子菌是亲动物性真菌,常常感染动物(尤其是猫狗)及人类,导致真菌性疾病。它易于感染头皮组织,且以儿童多见。近年来,人类与猫狗等宠物的密切接触导致犬小孢子菌病发病率逐年上升。在研究犬小孢子菌致病作用过程中,蛋白酶类... 详细信息

目的：犬小孢子菌是亲动物性真菌,常常感染动物(尤其是猫狗)及人类,导致真菌性疾病。它易于感染头皮组织,且以儿童多见。近年来,人类与猫狗等宠物的密切接触导致犬小孢子菌病发病率逐年上升。在研究犬小孢子菌致病作用过程中,蛋白酶类与头癣的相关性及在头癣的发病机制中的作用是研究关注的重点。本实验应用半定量RT—PCR技术,检测30株犬小孢子菌头癣株和30株体癣株的丝氨酸水解酶(fsh1)表达水平;并检测二者于沙堡液体培养基传代后fsh1的表达及分别经儿童头皮、儿童光滑皮肤诱导前后fsh1的表达。期望本实验结果能为fsh1功能分析奠定一定基础,为fsh1在犬小孢子菌所致头癣发病机制中的作用提供一定的依据。方法：30株头癣株和30株体癣株接种于米饭培养基中,培养2周,分离孢子。将5×106个孢子接种于100ml沙堡液体培养基,培养21-28天后收集培养基中的菌丝团,为第一代,用同样的方法传五代后得第五代。同时将头癣株和体癣株各5×106个孢子分别接种于100ml儿童头皮诱导培养基和100ml儿童光滑皮肤诱导培养基,培养21-28天后收集两种皮肤组织诱导培养基中的菌丝团。应用半定量RT—PCR检测以上各菌株的fsh1mRNA表达水平。结果：犬小孢子菌在沙堡液体培养基中及含儿童头皮组织和儿童光滑皮肤两种底物诱导培养基中均生长,形成菌丝团块。该菌在沙堡液体培养基中生长较佳,在含儿童头皮组织和儿童光滑皮肤组织的诱导培养基中生长略差。应用半定量RT—PCR检测犬小孢子菌的fsh1mRNA表达水平。结果发现fsh1在犬小孢子菌中都有表达,且头癣株和体癣株fsh1mRNA表达水平差异明显(P1);两者于沙堡液体培养基传代后fsh1mRNA表达水平无明显差异(P>0.05);皮肤组织诱导前后的菌株fsh1mRNA表达水平差异明显(P1),且儿童头皮、儿童光滑皮肤诱导后菌株fsh1mRNA表达水平差异明显(P1)。结论：1.fsh1在犬小孢子菌中有活性表达。2.头癣株fsh1mRNA表达量明显高于体癣株。3.经沙堡液体培养基传代的菌株能稳定表达fsh1,且不受传代影响。4.经皮肤组织诱导后,fsh1mRNA表达水平明显升高,且儿童头皮组织诱导后的菌株其表达最明显。5.fsh1可能与犬小孢子菌致头癣有关。

关键词：犬小孢子菌 fsh1 皮肤诱导基因表达半定量RT-PCR

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：