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慢病毒表达载体的构建及沉默foxq1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达

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世界华人消化杂志 2014年第19期22卷 2752-2757页

作者：白璇唐慧郎丰超郭强昆明医科大学云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)消化内科云南省昆明市650032 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)临床基础医学研究所云南省昆明市650032 中国科学院昆明动物研究所云南省昆明市650032

目的:构建foxq1基因shRNA慢病毒干扰系统,沉默foxq1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达.方法:根据foxq1基因的序列,设计合成3对shRNA干扰序列,退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro,将重组质粒转化至STBl3感受态中,涂板培养挑取单菌落,摇菌后... 详细信息

目的:构建foxq1基因shRNA慢病毒干扰系统,沉默foxq1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达.方法:根据foxq1基因的序列,设计合成3对shRNA干扰序列,退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro,将重组质粒转化至STBl3感受态中,涂板培养挑取单菌落,摇菌后小提质粒,选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提,将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev、pMDlg-pRRE和pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞,收集病毒上清,感染目的细胞DLD-1,嘌呤霉素筛选foxq1沉默细胞,经荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果.结果:酶切及测序结果显示shRNA成功插入载体PLKO.1-puro中,共转染293-T细胞成功获取病毒上清,感染DLD1细胞,经嘌呤霉素筛选出foxq1沉默细胞,荧光定量PCR及Western blot鉴定foxq1基因表达最高抑制率为90.4%.结论:通过构建foxq1基因shRNA慢病毒干扰系统,成功获取foxq1基因沉默细胞.为后续foxq1基因在肿瘤发生发展的研究奠定实验基础.

关键词： foxq1基因慢病毒载体 RNA干扰基因沉默

大肠癌foxq1基因在EGF信号通路中的作用研究

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大肠癌FOXQ1基因在EGF信号通路中的作用研究

作者：岳柯琳昆明医科大学

学位级别：硕士

第一部分：pAcGFPl-N1-foxq1真核表达载体构建及在大肠癌细胞系Colo-320及HCT116中的表达目的：构建人foxq1基因(Homo sapiens forkhead box Q1, foxq1)真核表达载体pAcGFP1-N1-foxq1,研究其在大肠癌细胞系Colo-320及HCT116中瞬时表达的情况方法：利用PCR方法从YR Gene装载了foxq1基因全长cDNA序列(NM033260)的质粒中扩增出foxq1的cDNA片段,与真核表达载体pAcGFP1-N1连接,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定无误后,采用Lipofectamine2000瞬时转染Colo-320及HCT116细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、Western blot. RT-PCR检测foxq1蛋白表达水平;结果：成功构建了真核表达载体pAcGFP1-N1-foxq1, PCR、双酶切和测序鉴定结果均正确,载体能在大肠癌细胞系Colo-320及HCT116中正确表达foxq1蛋白.结论：成功构建foxq1真核表达载体,为进一步开展体内、体外实验,研究foxq1基因的在肿瘤发生发展中的功能奠定了实验基础.第二部分：含pAcGFP1-N1-foxq1真核表达载体的大肠癌细胞系HCT116中EGF与EGFR的表达情况及EGF在结直肠癌(CRC)中的表达及意义。一.含pAcGFP1-N1-foxq1真核表达载体的大肠癌细胞系HCT116中EGF与EGFR的表达情况目的：研究含pAcGFP1-N1-foxq1真核表达载体的大肠癌细胞系HCT116中EGF与EGFR的表达情况。方法：已构建好的pAcGFP1-N1-foxq1真核表达载体利用Lipofectamine2000瞬时转染HCT116细胞,应用Western blot、RT-PCR及ELISA检测EGF及EGFR的表达水平;结果：载体在大肠癌细胞系HCT116中EGFR的表达情况与foxq1的表达情况一致,但EGF的表达情况不理想。结论：载体在大肠癌细胞系HCT116中EGFR基因的表达情况与foxq1基因的表达情况基本一致,表明在大肠癌中foxq1基因与EGFR基因表达可能具有相关性,为之后进一步利用Superarray功能基因芯片平台筛选出foxq1基因参与调控的EGF信号通路中肿瘤血管生成相关的下游靶基因奠定实验基础;但本细胞实验中EGF基因的表达情况不理想,考虑EGF为分泌型蛋白,主要存在于细胞膜上,在细胞中的含量可能相对较少,并且它的表达可能与肿瘤组织的发生发展过程密切相关,利用细胞实验难以验证,故予进一步加做组织免疫组化检测结直肠癌(CRC)组织中EGF的表达情况。二.EGF在结直肠癌(CRC)中的表达目的：探讨结直肠癌(CRC)中EGF表达情况。方法：连续收集云南省第一人民医院2012年2月至2014年2月共120份研究样本,包括手术切除的正常结直肠黏膜组织(距癌旁≥8cm)40例及结直肠癌(CRC)DukesA或B期40例和结直肠癌(CRC)DukesC或D期40例,用即用型(Envision)冲洗酶免疫组化法检测上述组织中的EGF的表达情况。结果：EGF在正常结直肠黏膜组织(距癌旁≥8cm)中无表达,在CRC中的表达阳性率均高于正常结直肠黏膜组织,并且EGF在CRC DukesC或D期高于DukesA或B期;有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者。结论：结直肠癌(CRC)患者组织中EGF表达情况高于正常结直肠黏膜组织,EGF可能参与了结直肠癌的发生发展。

关键词： foxq1基因 EGF EGFR pAcGFP1-N1质粒大肠癌构建表达

SHH信号通路参与foxq1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2023年第6期 16-19页

作者：徐卫张浩姜卫星张洋华北医疗健康集团峰峰总医院胃肠外科河北邯郸056201

研究Sonic Hedgehog信号通路(SHH)是否参与转录因子叉头框Q1基因(foxq1)引起胃癌细胞凋亡。观察癌旁组织及癌灶周围淋巴结转移瘤对该信号通路的影响并分析其机制。方法采用qRT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中foxq1的... 详细信息

研究Sonic Hedgehog信号通路(SHH)是否参与转录因子叉头框Q1基因(foxq1)引起胃癌细胞凋亡。观察癌旁组织及癌灶周围淋巴结转移瘤对该信号通路的影响并分析其机制。方法采用qRT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中foxq1的表达情况,foxq1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-foxq1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),qRT-PCR和Western blot检测foxq1基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。通过对以上指标进行比较分析,探讨了不同胃癌细胞间以及同一胃癌细胞系内两种癌细胞之间是否存在差异。结果 foxq1在胃粘膜上皮细胞GES-1中的表达明显低于胃癌细胞(Pfoxq1在胃癌SGC-7901细胞中的表达最高,可作为后续实验研究的对象。结论胃癌细胞内foxq1基因高度表达;SHH信号通路与foxq1基因有关,其诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡是通过上调Bax及Cleaved Caspase3等蛋白的表达而实现。

关键词： foxq1基因 SHH信号通路胃癌细胞凋亡

SHH信号通路参与foxq1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

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中国现代普通外科进展 2020年第7期23卷 510-514页

作者：高杨李盛涛郝文伟辽宁省铁岭市中心医院普通外科辽宁铁岭112000

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(foxq1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法:采用q RT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中foxq1的表达情况,foxq1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-foxq1组,同... 详细信息

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(foxq1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法:采用q RT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中foxq1的表达情况,foxq1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-foxq1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),q RT-PCR和Western blot检测foxq1基因和蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。结果:foxq1在胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达显著低于胃癌细胞(Pfoxq1的表达最高,作为后续实验研究对象。转染foxq1 siRNA后SGC-7901细胞中foxq1的表达显著下降(Pfoxq1组凋亡率及Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于si-Control组(P0.05)。SHH特异性激活剂purmorphamine能够逆转转染foxq1 siRNA诱导的SGC-7901细胞凋亡。结论:foxq1基因在胃癌细胞中呈高表达,SHH信号通路参与foxq1基因对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,通过上调Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达来实现。

关键词： foxq1基因 SHH信号通路胃癌细胞凋亡

大肠癌细胞foxq1与EGFR基因表达的相关性

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肿瘤防治研究 2016年第1期43卷 20-24页

作者：白璇唐慧郭强昆明医科大学云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)消化科昆明650032 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)临床基础医学研究所昆明650032

目的探讨大肠癌细胞中foxq1与EGFR基因间的相关性,为研究大肠癌中foxq1基因在EGFR通路中的作用机制奠定基础。方法应用荧光定量PCR以293-T细胞中foxq1及EGFR基因相对表达量为1作为参照,检测大肠癌细胞系DLD1、HT29、LOVO、HCT116中foxq1... 详细信息

目的探讨大肠癌细胞中foxq1与EGFR基因间的相关性,为研究大肠癌中foxq1基因在EGFR通路中的作用机制奠定基础。方法应用荧光定量PCR以293-T细胞中foxq1及EGFR基因相对表达量为1作为参照,检测大肠癌细胞系DLD1、HT29、LOVO、HCT116中foxq1及EGFR基因mRNA相对表达量;荧光定量检测经shRNA-foxq1慢病毒干扰后的DLD1细胞(命名为DLD1-shRNAfoxq1)中EGFR的相对表达量改变;DLD1-shRNA-foxq1经EGFR酪氨酸激酶抑制剂Erlotinib HCl和siRNA-EGFR处理后,荧光定量PCR分别检测foxq1和EGFR基因mRNA相对表达量。结果(1)foxq1在DLD1、HT29、LOVO、HCT116细胞系中的相对表达量分别为83.09、59.58、0.06、0.03,EGFR的相对表达量分别为4.95、3.67、2.08、1.36;(2)经shRNA-foxq1干扰的DLD1细胞EGFR表达量随foxq1表达量的降低而增高;(3)细胞DLD1-shRNA-foxq1、DLD1-shRNA-Control分别经siRNA-EGFR处理抑制EGFR的表达后,foxq1表达量随EGFR表达量的降低而增高,经Erlotinib HC1阻断EGFR酪氨酸激酶后,foxq1表达量增高。结论大肠癌细胞系中foxq1与EGFR基因的表达趋势基本一致;同时两者间可能相互存在负反馈调节机制,从而维持大肠癌细胞中foxq1与EGFR高表达的状态。

关键词： foxq1基因表皮生长因子受体 RNA干扰 EGFR酪氨酸激酶抑制

叉头框Q1基因调控肿瘤发生和发展的研究进展

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肿瘤 2017年第2期37卷 177-183页

作者：张锦锦唐慧昆明理工大学医学院神经生物学系云南昆明650504 云南省第一人民医院临床基础医学研究所昆明理工大学附属医院临床基础医学研究所云南昆明650032

转录因子叉头框Q1(forkhead box Q1,foxq1)是叉头框超家族的成员之一,参与多种生物学过程,并在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。foxq1蛋白通过直接作用于靶基因的启动子或与其他转录因子相互作用间接激活靶基因的转录,并通过促进上皮-... 详细信息

转录因子叉头框Q1(forkhead box Q1,foxq1)是叉头框超家族的成员之一,参与多种生物学过程,并在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。foxq1蛋白通过直接作用于靶基因的启动子或与其他转录因子相互作用间接激活靶基因的转录,并通过促进上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和激活多条细胞信号转导通路而影响肿瘤的发生、发展、侵袭和转移。研究表明,foxq1基因与多种肿瘤的发生和发展显著相关,foxq1基因的表达水平可作为判断多种肿瘤预后的指标。本文主要综述foxq1基因在肿瘤发生和发展中可能的作用机制。

关键词：肿瘤信号转导上皮-间质转化 foxq1基因

pAcGFP1-N1-foxq1真核表达载体的构建及在大肠癌细胞系Colo-320中的表达

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世界华人消化杂志 2013年第20期21卷 1966-1971页

作者：岳柯琳郭强唐慧昆明医科大学云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)消化内科云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院)临床基础医学研究所云南省昆明市650032

目的:构建人foxq1(homo sapiens forkhead box Q1)基因真核表达载体pAcGFP1-N1-foxq1,并在大肠癌细胞系Colo-320中瞬时表达.方法:利用PCR方法从YR Gene装载了foxq1基因全长cDNA序列(NM_033260)的质粒中扩增出foxq1的cDNA片段,与真核表达载体pAcGFP1-N1连接,重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定无误后,采用Lipofectamine 2000瞬时转染Colo-320细胞,应用荧光显微镜观察转染效率、Western blot检测foxq1蛋白表达水平.结果:成功构建了真核表达载体pAcGFP1-N1-foxq1,PCR、双酶切和测序鉴定结果均正确,载体能在Colo-320细胞中正确表达foxq1蛋白.结论:成功构建foxq1真核表达载体,为进一步开展体内、体外实验,研究foxq1基因在肿瘤发生发展中的功能奠定了实验基础.

关键词： foxq1基因 pAcGFP1-N1质粒构建

foxq1促进肝癌细胞系SMMC-7721细胞的增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第4期32卷 446-451页

作者：李建水邓大炜曾丽娟川北医学院肝胆胰研究所四川南充637000 川北医学院附属医院肝胆外科四川南充637000 川北医学院附属医院信息科四川南充637000

Forkhead Box Q1(foxq1)是FOX家族的重要成员之一,在许多肿瘤中异常高表达,而foxq1在肝癌中的研究甚少。本研究通过重组慢病毒载体介导的foxq1 shRNA感染肝癌SMMC-7721细胞,敲减foxq1的表达,研究foxq1对SMMC-7721细胞增殖的影响。CCK8... 详细信息

Forkhead Box Q1(foxq1)是FOX家族的重要成员之一,在许多肿瘤中异常高表达,而foxq1在肝癌中的研究甚少。本研究通过重组慢病毒载体介导的foxq1 shRNA感染肝癌SMMC-7721细胞,敲减foxq1的表达,研究foxq1对SMMC-7721细胞增殖的影响。CCK8法、倍增时间及集落形成实验显示,敲减foxq1导致细胞生长减慢,倍增时间延长,细胞集落形成能力减弱。流式细胞技术检测证明,与对照比较,敲减foxq1的表达可显著增加G1期细胞、减少S期细胞,提示G1期阻滞。qRT-PCR和Western印迹法显示,cyclin D1和c-Myc表达下调,其可能与G1阻滞有关。上述结果提示,沉默foxq1的表达能够抑制SMMC-7721细胞增殖,其机制可能与cyclin D1和c-Myc的下调有关。

关键词：肝癌 foxq1基因转录因子增殖

foxq1在肝癌中的临床意义及其对SMMC-7721细胞体外血管形成的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第4期31卷 422-428页

作者：邓大炜孔宪炳王平于庆三王强重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆404100 重庆医科大学附属第一医院胃肠外科重庆404100

探讨叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,foxq1)基因在肝癌中的临床意义及对肝癌细胞体外血管生成作用.利用qRT-PCR法及Western印迹法,检测24例肝癌、癌旁组织、正常肝细胞L02及肝癌细胞SMMC-7721中foxq1的mRNA和蛋白质的表达;利用免疫组织... 详细信息

探讨叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,foxq1)基因在肝癌中的临床意义及对肝癌细胞体外血管生成作用.利用qRT-PCR法及Western印迹法,检测24例肝癌、癌旁组织、正常肝细胞L02及肝癌细胞SMMC-7721中foxq1的mRNA和蛋白质的表达;利用免疫组织化学法检测68例肝癌及癌旁组织中foxq1的蛋白质表达.合成shRNA-foxq1及shRNA-NC慢病毒,转染到SMMC-7721细胞.用体外血管生成实验检测转染shRNA-foxq1的肝癌细胞血管生成能力.用qRT-PCR和Western印迹法检测细胞间foxq1、VEGF基因和蛋白质的表达.结果显示,癌组织和SMMC-7721细胞中foxq1 mRNA和蛋白质的表达均高于癌旁组织和正常肝细胞(Pfoxq1蛋白的表达与TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤数目、肿瘤大小等参数差异显著(Pfoxq1组血管生成能力明显低于shRNA-NC组和空白组(Pfoxq1、VEGF基因和蛋白质的表达也明显低于shRNA-NC组和空白组(Pfoxq1在肝癌中高表达,如果沉默foxq1的表达可抑制肝癌细胞血管生成,与肝癌的临床病理特征密切相关.

关键词：肝癌 foxq1基因转录因子临床病理特征血管生成