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单克隆抗体SM和flT3配体治疗肿瘤的特点及huSM-fl的研究进展

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中国医院药学杂志 2008年第8期28卷 653-654,679页

作者：王丽华李连西宁市第一人民医院药剂科青海西宁810000 大连医科大学附属第一医院中药科辽宁大连116011

目的:综述单克隆抗体SM5-1及flt3配体(flt3ligand,fl)以及二者的融合蛋白抗肿瘤的特点、类型、作用机制,以用相关临床研究。方法:查阅近几年的相关文献,分析并总结。结果:目前,肿瘤的生物药物治疗主要是通过两种途径,一种是抗体直接发... 详细信息

目的:综述单克隆抗体SM5-1及flt3配体(flt3ligand,fl)以及二者的融合蛋白抗肿瘤的特点、类型、作用机制,以用相关临床研究。方法:查阅近几年的相关文献,分析并总结。结果:目前,肿瘤的生物药物治疗主要是通过两种途径,一种是抗体直接发挥的诱导肿瘤细胞凋亡的作用以及抗体介导的免疫应答,另外一种是通过机体对肿瘤的主动免疫反应提高杀伤肿瘤细胞的能力。结论:随着研究的进一步深入,将两种或几种生物大分子融合在一起的生物技术药物必将成为肿瘤治疗的重要模式。

关键词： SM fl SM-fl 融合蛋白抗肿瘤

人fl在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化和生物学活性测定

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基础医学与临床 2002年第2期22卷 125-129页

作者：张友鸿周希亚陈松森娄可佳刘深基杨克恭何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

建立人fl(humanflt3ligand ,hfl)在大肠杆菌中的高效表达系统 ,分离纯化重组hfl为其功能和应用研究打下基础。根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hfl基因膜外区DNA片段 ,由PCR方法获得的hfl基因膜外区DNA片段 ,经测序证明序列正确。构建表... 详细信息

建立人fl(humanflt3ligand ,hfl)在大肠杆菌中的高效表达系统 ,分离纯化重组hfl为其功能和应用研究打下基础。根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hfl基因膜外区DNA片段 ,由PCR方法获得的hfl基因膜外区DNA片段 ,经测序证明序列正确。构建表达载体pET30a Trx hfl并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,hfl融合蛋白的表达占菌体总蛋白的 6 0 %以上 ,并以包涵体形式存在。融合蛋白经离子交换层析、分子筛层析纯化 ,并用FXa切割 ,切割效率 >80 %。切割产物经亲和层析纯化。纯化产物进行Westernblot鉴定。纯化的rhfl(recombinanthfl)与GM CSF及TNFα联合作用 ,具有良好的刺激DC增殖活性 ,其增殖能力是GM CSF +TNFα的 2 5倍左右。本文以大肠杆菌为宿主 ,成功地表达了融合蛋白Trx hfl。经纯化的rhfl在体外与GM CSF及TNFα联合使用能有效地刺激人DC的增殖。

关键词：大肠杆菌 fl 融合表达 FXa裂解纯化

壳聚糖纳米化的结核杆菌ESAT-6和fl重组DNA疫苗对小鼠产生Th1和Th2型细胞因子的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2014年第5期34卷 580-586页

作者：卢燕来冯旰珠蒋青桃邱文赵聃张婧王迎伟南京医科大学微生物与免疫学系江苏南京210029

目的:探讨壳聚糖纳米包被的结核杆菌早期分泌性抗原(6 kd early secretory antigenic target,ESAT-6)与fms样酪氨酸激酶3配体(fms-like tyrosine kinase 3 ligand,fl)重组DNA疫苗接种C57BL/6小鼠对其Th1和Th2型细胞因子生成的影响。方法:制备壳聚糖(nano-chitosan,CS)纳米颗粒,然后用CS纳米粒包被本室构建的结核杆菌ESAT-6与fl重组质粒(nanoESAT-6-fl)、ESAT-6质粒(nano-ESAT-6)、fl质粒(nano-fl)和pIRES载体(nano-pIRES),并进行电镜和Western blot鉴定。此后将上述质粒分别接种小鼠,同时给小鼠接种未用壳聚糖纳米颗粒包被的上述对应质粒,并设PBS、CS纳米粒及BCG作为对照。接种后9周,取小鼠脾细胞进行培养,并用结核菌纯化蛋白衍生物(purified protein derivatives tuberculin,PPD)给予刺激72 h,然后用ELISA试剂盒检查小鼠脾细胞上清液中的Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)的分泌水平。结果:成功制备出壳聚糖纳米包被的结核杆菌ESAT-6和fl重组质粒(包括其他几种质粒),并证实被壳聚糖纳米包被的质粒可在真核细胞中表达。用壳聚糖纳米包被的ESAT-6-fl重组质粒免疫小鼠,其脾细胞上清液中的IFN-γ和IL-12水平显著高于未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他对照组,而IL-4和IL-10的水平与未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他实验组对照组相比均无明显升高。结论:壳聚糖纳米化的ESAT-6-fl重组质粒疫苗接种小鼠能够显著提高小鼠体内Th1型细胞因子的水平。提示用壳聚糖纳米包被结核杆菌ESAT-6-fl重组DNA疫苗能提高其细胞免疫效果。

关键词：壳聚糖纳米 ESAT-6抗原 fl 重组DNA疫苗细胞因子

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小鼠受γ射线全身照射后fl表达变化的研究

中华放射医学与防护杂志 2004年第6期24卷 543-545页

作者：于丽梅陈肖华饶亚岚董波王治东张军权高荣莲张燕毛秉智北京放射医学研究所 100850

目的　fl(flt3ligand)是一种作用于早期造血细胞的生长因子 ,为进一步研究fl水平与辐射所致造血损伤的相关性 ,观察了小鼠受γ射线全身照射后fl的表达变化。方法　以6 0 Coγ射线全身一次性均匀照射所致骨髓型急性放射病小鼠为模型 ,应... 详细信息

目的　fl(flt3ligand)是一种作用于早期造血细胞的生长因子 ,为进一步研究fl水平与辐射所致造血损伤的相关性 ,观察了小鼠受γ射线全身照射后fl的表达变化。方法　以6 0 Coγ射线全身一次性均匀照射所致骨髓型急性放射病小鼠为模型 ,应用ELISA、流式细胞术、Westernblot法检测照射前后小鼠外周血、骨髓、胸腺与脾脏中fl的表达变化。结果　小鼠受 2～ 10Gyγ射线照射后 2 4h ,血清中fl浓度即有增加 ,并且随时间推移fl水平逐渐升高 ;吸收剂量在 2～ 6Gy之间时 ,fl的水平随剂量增加而增加。 6Gyγ射线照射后 2 4h ,外周血白细胞膜表面fl的表达增加 ,但 2 4h后细胞膜表面fl的表达没有升高。 6Gyγ射线照射后 2 4h ,骨髓、胸腺和脾脏有核细胞膜表面fl的表达明显升高 ,总蛋白中fl的水平亦明显增加。结论　辐射后早期小鼠fl可溶性与膜结合型蛋白的水平都有升高 ,而且辐射后血清中fl的水平与受照剂量及照射后时间存在相关性。

关键词：小鼠表达 fl 升高全身照射 γ射线照射骨髓水平细胞膜辐射

转fl、GM-CSF基因的人骨髓基质细胞促进脐血CD34^+细胞体外扩增

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基础医学与临床 2003年第6期23卷 670-674页

作者：李杰李薇侯燕马俐君吉林大学第一医院血液肿瘤科长春130021 首都医学院宣武医院血液科北京100053

研究转fl、GM CSF基因的基质细胞对脐血CD34+ 细胞的扩增效应。将转fl、GM CSF基因的人骨髓基质细胞系与脐血CD34+ 细胞共培养 ,观察细胞总数、CD34+ 细胞数、CFU GM的变化情况。培养到第 4周时 ,第 (4 )组 (SCF+IL 3+IL 6 +GM CSF +fl... 详细信息

研究转fl、GM CSF基因的基质细胞对脐血CD34+ 细胞的扩增效应。将转fl、GM CSF基因的人骨髓基质细胞系与脐血CD34+ 细胞共培养 ,观察细胞总数、CD34+ 细胞数、CFU GM的变化情况。培养到第 4周时 ,第 (4 )组 (SCF+IL 3+IL 6 +GM CSF +fl)和第 (8)组 (HFCL/hGM CSF +HFCL/hfl +SCF +IL 3+IL 6 )的细胞总数增加到最大 ,分别扩增了 717± 2 4 4 7和 70 9± 6 3 6 3,第 1周 ,第 (5 )组 (HFCL +SCF +IL 3+IL 6 )扩增了 10 5± 2 0 8倍 ,较第 (8)组减少 (P fl +SCF +IL 3+IL 6 )为 5 0 2 % ,第 (6 )组 (HFCL/hGM CSF +SCF +IL 3+IL 6 )为 2 8 95 % (P fl、GM CSF基因的基质细胞 ,能有效的协同其他细胞因子对脐血CD34+ 细胞产生明显的扩增作用。

关键词：转基因 fl GM-CSF 人骨髓基质细胞脐血 CD34^+ 细胞体外扩增

人fl基因高效真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

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中国免疫学杂志 2001年第6期17卷 305-308页

作者：王冠军马俐君李梁裴雪涛白求恩医科大学第一临床医学院血液肿瘤科长春130021 北京军事医学科学院输血研究所北京100850

目的 :构建人fl真核表达载体 pIRES1neo/hfl ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型fl(flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hF... 详细信息

目的 :构建人fl真核表达载体 pIRES1neo/hfl ,观察其在COS 7细胞中的表达。方法 :采用RT PCR方法自人白血病细胞系TF 1中克隆可溶型fl(flt3 ligand)cDNA片段 ,测序鉴定正确后 ,插入真核表达载体 pIRES1neo中的EcoRI和BamHI位点 ,构建hfl真核表达载体 pIRES1neo/hfl。脂质体介导法将其转染COS 7细胞 ,72h以RT PCR检测转染细胞中外源hfl基因的转录、ELISA法及脐血CD34 + 细胞增殖实验测定转染细胞上清中hfl的含量和活性。结果 :酶切鉴定表明成功构建了重组真核表达载体 pIRES1neo/hfl ;外源hfl基因能在转染细胞中有效转录 ;ELISA法测得 72h后培养上清中的hfl含量为每 2 4小时 2 5 1ng/ 10 6cells,并且分泌的hfl具有良好的生物学活性。结论 :构建hfl真核表达载体在COS 7细胞中具有良好的表达活性。

关键词： fl 真核表达载体 COS-7细胞表达活性生物学活性专职抗原递呈细胞 APC

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高温匀染剂fl的应用

印染助剂 1999年第3期16卷 27-28页

作者：周希人佛山市华联有机硅有限公司

介绍了高温匀染剂ＦＬ的实用工艺，以及评价匀染剂性能的两种实用方法；综述了高温匀染剂ＦＬ的应用效果。

关键词：匀染剂性能 fl 高温匀染剂

FIt3/fl在急性白血病中的表达及其临床意义

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FIt3/FL在急性白血病中的表达及其临床意义

作者：王静河北医科大学

学位级别：硕士

目的:flt3(Fms-like tyrosine kinase-3),属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinase, RTK)家族成员,它可以使细胞外酪氨酸残基磷酸化,并通过各种细胞胞浆蛋白传导激活信号,提供增殖刺激,从而也能促进白血病恶性克隆的增殖和维持... 详细信息

目的:flt3(Fms-like tyrosine kinase-3),属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinase, RTK)家族成员,它可以使细胞外酪氨酸残基磷酸化,并通过各种细胞胞浆蛋白传导激活信号,提供增殖刺激,从而也能促进白血病恶性克隆的增殖和维持。flt3 配基(flt3 ligand, fl),通过和flt3结合在造血系统发挥多效性和潜在性的能力,一些急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)细胞共表达flt3 和fl,可能提示二者有通过自分泌、旁分泌等形式活化的可能性。flt3/fl 信号传导系统可能在人类白血病发病中发挥重要作用。另外,fl 作为新近发现的一种造血细胞生长因子,其主要生物学活性表现为调节早期造血干/祖细胞的增殖和分化,提高机体的造血机能。本实验旨在探讨flt3/fl 的表达与白血病转归及二者共表达与白血病发病的关系。另外检测fl 浓度在急性白血病化疗前后的动态变化,为其作为一种新的造血生长因子应用于临床打下基础。方法:本研究分两部分。第一部分的研究对象包括106例急性白血病(acute leukemia, AL)患者,将其分为初治组(64 例)、复发组(12 例)、缓解组(30 例)。19 名健康人为正常对照和K562、KG-1α、HL60 细胞株为阳性和阴性对照。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(simi-quantity reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测各组flt3、fl 的mRNA 水平。

关键词：白血病 flt3 fl 聚合酶链反应酶联免疫吸附技术

分泌人可溶性fl基因转染细胞及其生物学活性分析

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上海免疫学杂志 2003年第1期23卷 6-9页

作者：丁天徐颖沈丽琴许志祥朱一蓓王月丹张学光复旦大学生化系上海200433 苏州大学医学生物技术研究所免疫室苏州215007

应用基因重组技术构建了人可溶性fl基因逆转录病毒载体pLXSN fl ,经转染PA317细胞和G4 18筛选抗性细胞克隆 ,获得重组病毒液。NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后 ,选择适当滴度的重组病毒 (5× 10 5CFU/ml)感染ECV30 4细胞 ;应用聚合酶链反... 详细信息

应用基因重组技术构建了人可溶性fl基因逆转录病毒载体pLXSN fl ,经转染PA317细胞和G4 18筛选抗性细胞克隆 ,获得重组病毒液。NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后 ,选择适当滴度的重组病毒 (5× 10 5CFU/ml)感染ECV30 4细胞 ;应用聚合酶链反应 (PCR )及反转录聚合酶链反应 (RT PCR )检测感染ECV30 4细胞fl的DNA及mRNA表达 ;应用ELISA测定rhfl在ECV30 4中的表达水平 ,用荧光标记和流式细胞仪检测转基因上清对单个核细胞来源DC的表型影响及3 H TdR掺入法测定DC对T细胞的促增殖作用。结果表明 ,外源性rhfl基因整合到ECV30 4细胞染色体DNA并有效地转录和翻译 ,稳定表达水平为 82 4ng (10 6细胞 /2 4h )的人fl。转基因ECV细胞培养上清能有效诱导人PBMC来源DC的分化和增强DC对T细胞的激发作用。外源性fl基因可以转移到ECV30 4细胞并稳定表达。

关键词： flt3配体 fl 逆转录病毒载体 ECV304细胞