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应用激光 2017年第5期37卷 759-762页

作者：王辰樑潘展砚侯霄枭吴伊旋 Christos C.Zouboulis 鞠强上海交通大学医学院附属仁济医院皮肤科上海200127 德国德绍医学中心皮肤性病和变态反应免疫科德绍3806847

研究紫外线诱导的光产物ficz(6-Formylindolo[3,2-b]carbazole)对体外培养的人皮脂腺细胞芳香烃受体(AHR)信号通路影响及相关炎症因子mRNA表达的影响,探讨紫外线诱导痤疮发生的机制。方法:Real-time qPCR检测分析永生化的SZ95人皮脂腺... 详细信息

研究紫外线诱导的光产物ficz(6-Formylindolo[3,2-b]carbazole)对体外培养的人皮脂腺细胞芳香烃受体(AHR)信号通路影响及相关炎症因子mRNA表达的影响,探讨紫外线诱导痤疮发生的机制。方法:Real-time qPCR检测分析永生化的SZ95人皮脂腺细胞暴露于紫外线光产物ficz后,检测AHR及其下游基因CYP1A1表达,以及炎症基因IL-1α、IL-1β、RELA等表达。结果:ficz组AHR表达丰度是CONTROL组(未加入ficz组,以下均称对照组)的1.412倍(Pficz组CYP1A1基因表达丰度是对照组的142.338倍(Pficz组IL-1α基因表达丰度是对照组的4.039倍(Pficz组IL-1β基因表达丰度是对照组的4.245倍(Pficz组RELA基因表达丰度是对照组的1.432倍(Pficz激活AHR信号通路,从而影响皮脂腺细胞的炎症因子IL-1α、IL-1β、RELA等产生,这可能是紫外线诱导痤疮发生的机制之一。

关键词： ficz AHR CYP1A1 IL-1α IL-1β RELA 皮脂腺细胞痤疮

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ficz对人皮脂腺细胞芳香烃受体及炎症因子mRNA表达影响及其意义

FICZ对人皮脂腺细胞芳香烃受体及炎症因子mRNA表达影响及其意义

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作者：王辰樑上海交通大学

学位级别：硕士

目的:研究紫外线诱导的光产物ficz(6-Formylindolo[3,2-b]carbazole)对体外培养的SZ95人皮脂腺细胞芳香烃受体(AHR)信号通路影响以及相关炎症因子mRNA表达的影响,探讨紫外线对人皮脂腺细胞的生物学作用。方法:Real-time qPCR检测分析永... 详细信息

目的:研究紫外线诱导的光产物ficz(6-Formylindolo[3,2-b]carbazole)对体外培养的SZ95人皮脂腺细胞芳香烃受体(AHR)信号通路影响以及相关炎症因子mRNA表达的影响,探讨紫外线对人皮脂腺细胞的生物学作用。方法:Real-time qPCR检测分析永生化的SZ95人皮脂腺细胞暴露于紫外线光产物ficz后,检测AHR及其下游基因CYP1A1表达,以及炎症基因IL-1α、IL-1β、RELA、IL-8、TLR2、IL-12α、TNF等表达。结果:ficz组AHR表达丰度是对照组的1.412倍(Pficz组CYP1A1基因表达丰度是对照组的142.338倍(Pficz促进了皮脂腺细胞内AHR及其经典下游靶位基因表达。ficz组IL-1α基因表达丰度是对照组的4.039倍(Pficz组IL-1β基因表达丰度是对照组的4.245倍(Pficz组RELA基因表达丰度是对照组的1.432倍(Pficz对皮脂腺细胞炎症因子IL-1α、IL-1β、RELA的表达有促进作用。ficz组IL-8基因表达丰度是对照组的0.653倍(Pficz组TLR2基因表达丰度是对照组的0.694倍(Pficz对皮脂腺细胞炎症因子IL-8、TLR2的表达可能有抑制作用。ficz组IL-12α基因表达丰度是对照组的1.006倍(P>0.01);ficz组TNF基因表达丰度是对照组的1.085倍(P>0.01);显示ficz对皮脂腺细胞炎症因子IL-12α、TNF的表达可能没有作用。结论:紫外线可能通过诱导ficz进而激活AHR信号通路,从而影响皮脂腺细胞的炎症因子IL-1α、IL-1β、RELA产生,这可能是紫外线诱导痤疮发生的机制之一。

关键词： ficz AHR CYP1A1 IL-1α IL-1β RELA IL-8 TLR2 IL-12α TNF 皮脂腺细胞痤疮

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芳香烃受体对小鼠结肠炎的缓解作用及机制研究

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免疫学杂志 2017年第1期33卷 13-17页

作者：李良子刘中泽陈维刚杨桦第三军医大学新桥医院普外科重庆400037

目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,Ah R)及其激动剂吲哚并[3,2-B]咔唑-6-甲醛[6-formylindolo(3,2-b)carbazole,ficz]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎的缓解作用及其机制。方法将成年雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、DSS组(每天给予DSS喂养,连续7 d)、DSS+ficz组(给予DSS喂养连续7 d,从第3天开始腹腔注射1 mg芳香烃受体激动剂ficz)。每天检测小鼠体质量变化,7 d后HE染色观察结肠病理学变化,q PCR检测小鼠结肠上皮细胞炎性因子的表达。结果与正常对照组相比,模型组中小鼠体质量明显减轻(P<0.05),结肠长度缩短,肠黏膜明显损伤,促炎因子IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达升高(P<0.05),保护性的细胞因子IL-10的表达变化不明显;与模型组相比,实验组中小鼠体质量下降明显减少(P<0.05),结肠长度增加,肠黏膜损伤减轻,同时促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达降低(P<0.05),保护性细胞因子IL-10明显升高(P<0.05)。结论芳香烃受体(AhR)对小鼠结肠炎具有抑制作用,可能是通过下调促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,上调抗炎因子IL-10的表达发挥作用。

关键词：芳香烃受体 ficz 结肠炎上皮细胞

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芳香烃受体相关的色氨酸代谢及检测方法研究

芳香烃受体相关的色氨酸代谢及检测方法研究

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作者：刘悦中国农业科学院

学位级别：硕士

色氨酸(Tryptophan,Trp)是人体必需的8种氨基酸之一,为蛋白质营养价值评价的重要指标。色氨酸代谢物对人体的情绪、新陈代谢、细胞生长发育、生物节律的形成及免疫功能等均具有重要的调节作用。6-甲酰基吲哚并3-2-b咔唑(6-formylindole[... 详细信息

色氨酸(Tryptophan,Trp)是人体必需的8种氨基酸之一,为蛋白质营养价值评价的重要指标。色氨酸代谢物对人体的情绪、新陈代谢、细胞生长发育、生物节律的形成及免疫功能等均具有重要的调节作用。6-甲酰基吲哚并3-2-b咔唑(6-formylindole[3,2-b]carbazole,ficz)是色氨酸的光解产物,也可由吲哚丙酮酸避光孵育产生。ficz在纳摩尔级别即可诱导芳香烃受体(AHR)及其下游基因高表达,诱导Th17细胞的分化,正向调控免疫反应,这表明ficz对提高机体免疫能力及预防、控制肿瘤具有特殊意义。然而,目前没有直接证据表明ficz可在体内被合成。因此,找到人体中能够代谢色氨酸产生内源性ficz的关键酶至关重要。L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)是代谢色氨酸产生吲哚丙酮酸的关键酶,其人源表达基因为IL4i1。因此,本文以研究人源LAAO酶是否为催化色氨酸产生ficz的关键酶为出发点,通过非靶向及靶向代谢组学技术,对过表达IL4i1的293t细胞代谢色氨酸产生的AHR配体进行了定性及定量分析。主要实验内容及结果:1.构建瞬时和稳定转染IL4i1基因的293t细胞,用蛋白分子免疫印迹实验对细胞上清液及细胞裂解液中的LAAO酶的表达进行检测,同时依据鲁米诺发光反应原理评估LAAO酶活。实验结果表明,人源IL4i1基因表达的LAAO酶在胞内表达,也能分泌到胞外,属分泌型蛋白;LAAO酶在37℃,pH为5.5时可高效催化色氨酸,转化率约为2.2%。2.检测细胞上清诱导AHR报告细胞系荧光素酶表达量,用以反映LAAO酶代谢色氨酸产生AHR配体的水平。色氨酸经LAAO酶催化氧化之后,诱导荧光素酶表达的能力显著增加,表明LAAO酶的催化产物至少有一种为AHR的强激动剂。3.建立ficz、吲哚甲醛、吲哚乙酸、色氨酸、犬尿氨酸、犬尿酸的超高效液相色谱串联质谱检测方法,各检测物线性范围广,线性相关系数均为0.999,定量限在0.05–10.00 ng/mL之间,检出限在0.02–5.00 ng/mL之间,方法回收率为85%-102%,为实现色氨酸及其代谢物靶向定性和定量打下方法基础。4..非靶向代谢组学结合靶向代谢物检测对LAAO酶代谢色氨酸产物进行定性及定量。结果表明,在实验条件下,ficz不是LAAO酶的催化产物,而LAAO酶可代谢色氨酸产生吲哚甲醛和吲哚乙酸,其含量与细胞培养环境中的色氨酸浓度呈正相关。吲哚甲醛和吲哚乙酸均为AHR配体,也是重要的免疫调节物质。本研究首次证实吲哚乙酸为LAAO酶催化色氨酸的的分解产物,也是首次发现吲哚甲醛可以由非细菌合成途径产生,为深入研究吲哚甲醛的体内合成和调控奠定理论基础,也为评估高色氨酸饮食的营养价值提供了新的思路。

关键词：色氨酸 L-氨基酸氧化酶 ficz 吲哚甲醛吲哚乙酸

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超高效液相色谱——三重四级杆串联质谱法同时检测细胞培养基中3种色氨酸代谢物

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中国食物与营养 2019年第2期25卷 37-40页

作者：刘悦贾曼崔婧甘敏陈刚中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所北京100081

为研究色氨酸在细胞水平上代谢成为吲哚乙酸、吲哚甲醛及ficz的转化率,本文建立了用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法同时检测细胞培养上清中吲哚甲醛、吲哚乙酸及ficz的方法,采用C18色谱柱、5mmol乙酸铵水及100%乙腈为流动相进行分离,... 详细信息

为研究色氨酸在细胞水平上代谢成为吲哚乙酸、吲哚甲醛及ficz的转化率,本文建立了用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法同时检测细胞培养上清中吲哚甲醛、吲哚乙酸及ficz的方法,采用C18色谱柱、5mmol乙酸铵水及100%乙腈为流动相进行分离,多反应监测(MRM)负离子模式对3种物质进行检测,外标法进行定量。同时采用空白基质加标实验对方法的回收率及精密度进行了测量。方法线性较好,线性范围广,相关系数均为0. 999,回收率在85%～102%之间,相对标准偏差在3. 75%～8. 75%之间。吲哚甲醛检出限及定量限分别为0. 5、1. 5ng/m L;吲哚乙酸检出限及定量限分别为5、10. 0ng/m L; ficz的检出限及定量限分别为0. 3、1ng/m L。该方法为研究色氨酸代谢打下基础,同时也为评价高色氨酸饮食的营养价值提供新的思路。

关键词：吲哚甲醛吲哚乙酸 ficz 定量检测

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