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fhl1基因突变相关遗传性肌病一家系临床特征分析

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中华神经医学杂志 2023年第2期22卷 174-177页

作者：李矜玥崔丽英中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经内科北京100730

4个半LIM1结构域蛋白(four and a half LIM domains 1,fhl1),也称为骨骼肌LIM蛋白1,是一个高表达于骨骼肌和心肌的多功能蛋白,人体其他组织如卵巢、肾脏、肺等中也可观察到部分fhl1蛋白表达[1,2,3]。研究发现fhl1蛋白位于成熟骨骼肌肌节... 详细信息

4个半LIM1结构域蛋白(four and a half LIM domains 1,fhl1),也称为骨骼肌LIM蛋白1,是一个高表达于骨骼肌和心肌的多功能蛋白,人体其他组织如卵巢、肾脏、肺等中也可观察到部分fhl1蛋白表达[1,2,3]。研究发现fhl1蛋白位于成熟骨骼肌肌节的I带和M线上,可能具有转录因子、细胞骨架支架以及生物机械应激反应等生理功能[4,5,6,7]。fhl1基因突变可能导致多种不同类型的肌病,如还原体肌病(reducing body myopathy,RBM)、X连锁显性遗传肩胛骨腓骨肌病(X-linked dominant scapuloperoneal myopathy,XSPM)、X连锁肌病伴体位性肌萎缩(X-linked recessive myopathy with postural muscle atrophy,XMPMA)和Emery-Dreifuss肌营养不良(Emery Dreifuss muscular dystrophy,EDMD)等[8,9,10]。该基因突变较为罕见,相关的临床表型异质性较大,临床诊断具有极大的挑战性。北京协和医院神经内科曾收治1例fhl1基因突变相关遗传性肌病患者,现总结分析其临床表现及家系特点,希望提高临床医师对该病的认识。

关键词：遗传性肌病还原体肌病 fhl1基因

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fhl1基因与心肌细胞分化关系的研究

FHL1基因与心肌细胞分化关系的研究

作者：郭英杰南京医科大学

学位级别：硕士

目的观察fhl1(Four and a half LIM domains protein 1)基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化;通过构建fhl1基因过表达(overexpression)载体,探讨fhl1基因过表达对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法(1)P19细胞经1%二... 详细信息

目的观察fhl1(Four and a half LIM domains protein 1)基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化;通过构建fhl1基因过表达(overexpression)载体,探讨fhl1基因过表达对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法(1)P19细胞经1%二甲基亚砜(DMSO)诱导悬浮培养4d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基粘附培养至14d,观察细胞跳动情况,用肌钙蛋白I(cTnI)抗体行Western Blot以鉴定心肌细胞分化,采用RT-PCR、Western Blot技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中fhl1基因mRNA和蛋白的表达水平;(2)构建fhl1基因的过表达载体,转染P19细胞后,以1%二甲基亚砜(DMSO)诱导分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中心肌分化标志基因MEF-2c、GATA-4的mRNA表达水平,Western Blot技术检测cTnI蛋白的表达变化。结果(1)DMSO诱导4d后,用生长培养基粘附培养至第8天,P19细胞出现自发性节律跳动的细胞团片,Western Blot检测cTnI蛋白呈阳性,fhl1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,Western Blot检测结果与RT-PCR检测结果基本一致。fhl1基因在分化第0～8天表达显著增高,各时间点之间差异显著(P＜0.05),第8～14天表达趋于稳定,各时间点之间差异无显著性(P＞0.05);(2)菌落PCR、重组载体酶切与测序、转染后P19细胞中his标签蛋白阳性均提示成功构建载体和转染P19细胞,同一时间点稳定过表达fhl1基因的P19细胞中GATA-4、MEF-2c基因mRNA表达水平、cTnI蛋白表达水平与空载细胞相比无明显差异(P＞0.05)。结论fhl1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,但其基因过表达对P19细胞向心肌细胞的分化并无明显影响。

关键词： fhl1基因表达载体 P19胚胎癌细胞细胞分化心肌细胞

P19细胞向心肌细胞分化过程中fhl1基因的表达变化

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南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第5期28卷 601-604页

作者：郭英杰张奇军钱玲梅孔祥清曹克将南京医科大学第一附属医院心脏科江苏南京210029

目的:观察fhl1(Four and a half LIM domains protein1)基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨fhl1基因与心肌细胞分化之间的关系。方法:P19细胞经1%二甲基亚砜(DMSO)诱导悬浮培养4天形成细胞聚集体,将聚集体用生... 详细信息

目的:观察fhl1(Four and a half LIM domains protein1)基因在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨fhl1基因与心肌细胞分化之间的关系。方法:P19细胞经1%二甲基亚砜(DMSO)诱导悬浮培养4天形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至14天,观察细胞跳动情况,用肌钙蛋白I(cTnI)抗体行Western Blot以鉴定心肌细胞分化,并采用RT-PCR、Western Blot技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中fhl1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:DMSO诱导4天后,用生长培养基黏附培养至第8天,P19细胞出现自发性节律跳动的细胞团片,Western Blot检测cTnI蛋白呈阳性。fhl1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,Western Blot检测结果与RT-PCR检测结果基本一致。fhl1基因在分化第0～8天表达显著增高,各时间点之间差异显著(P0.05)。结论:fhl1基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,可能参与心肌细胞的分化和发育。

关键词： fhl1基因 P19细胞细胞分化

利用CRISPR/Cas9技术构建fhl1基因敲除的HepG2稳定细胞株及其功能鉴定

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生物技术通讯 2018年第6期29卷 723-727,735页

作者：张亚楠常振宇刘婕丁丽华叶棋浓军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100850 解放军总医院肝胆外二科北京100853

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人肝癌细胞HepG2中的四个半LIM结构域蛋白1(fhl1)基因,构建fhl1基因敲除的HepG2稳定细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别fhl1基因第三外显子相关序列的上下游小向导RNA,构建... 详细信息

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人肝癌细胞HepG2中的四个半LIM结构域蛋白1(fhl1)基因,构建fhl1基因敲除的HepG2稳定细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别fhl1基因第三外显子相关序列的上下游小向导RNA,构建真核重组表达质粒,测序鉴定后,将重组质粒包装慢病毒感染HepG2细胞,用嘌呤霉素抗性筛选稳定敲除fhl1基因的细胞株,用免疫印迹法鉴定HepG2细胞中fhl1基因的敲除效果,利用生长曲线实验和划痕实验检测基因敲除对细胞生长和迁移的影响。结果:筛选出敲除fhl1基因的HepG2细胞株,且fhl1基因敲除显著促进细胞的增殖和迁移。结论:利用CRISPR/Cas9技术获得了内源fhl1基因敲除细胞株,初步实验提示敲除fhl1基因可以促进肝癌细胞增殖和迁移,为后续研究fhl1在肝癌中的功能奠定了基础。

关键词： fhl1基因 CRISPR/Cas9 HepG2细胞细胞增殖细胞迁移

甲状腺乳头状癌中fhl1基因的表达及临床意义

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中国现代医生 2017年第32期55卷 5-7,11页

作者：权明明陈珍珍戴岳楚梁勇浙江省台州市中心医院(台州学院附属医院)肿瘤外科浙江台州318000 浙江省台州市中心医院(台州学院附属医院)超声科浙江台州318000 台州学院医学院浙江台州318000

目的研究fhl1蛋白和fhl1基因在甲状腺癌中的表达及临床意义。方法分别应用实时定量PCR、蛋白质杂交检测人甲状腺乳头状癌组织标本及结节性甲状腺肿标本中fhl1基因和蛋白的表达情况。结果实时定量PCR提示fhl1基因在结节性甲状腺肿中高表... 详细信息

目的研究fhl1蛋白和fhl1基因在甲状腺癌中的表达及临床意义。方法分别应用实时定量PCR、蛋白质杂交检测人甲状腺乳头状癌组织标本及结节性甲状腺肿标本中fhl1基因和蛋白的表达情况。结果实时定量PCR提示fhl1基因在结节性甲状腺肿中高表达,在甲状腺乳头状癌中低表达,相对表达量为(0.4538±0.0074),差异有统计学意义(Pfhl1蛋白在甲状腺乳头状癌中低表达(0.4033±0.0296),在结节性甲状腺肿中高表达(0.8021±0.0269),差异有统计学意义(Pfhl1的阳性表达率为41.4%,男性fhl1的阳性表达率为36.4%,有颈部淋巴结转移的fhl1阳性表达率为42.9%。结论 fhl1蛋白和fhl1基因在甲状腺乳头状癌中均低表达,提示在甲状腺乳头状癌中fhl1可能起抑制癌细胞的作用。

关键词：甲状腺乳头状癌 fhl1基因 fhl1蛋白抑癌基因

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还原体肌病的临床、肌肉病理与致病基因初探

还原体肌病的临床、肌肉病理与致病基因初探

作者：刘巍吉林大学

学位级别：硕士

目的：本文对以四肢无力为首发症状的还原体肌病家系进行临床研究,运用多聚酶链反应-单链构象多态性(Poly merase chain reaction-single strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)方法对该家系成员进行fhl1基因突变检测,旨在为还... 详细信息

目的：本文对以四肢无力为首发症状的还原体肌病家系进行临床研究,运用多聚酶链反应-单链构象多态性(Poly merase chain reaction-single strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)方法对该家系成员进行fhl1基因突变检测,旨在为还原体肌病的基因遗传学研究奠定基础。材料和方法：经吉林大学第一医院神经内科临床诊断为还原体肌病的一名患者,按血缘关系追溯家系三代成员,绘制家系图,对4名女性家系成员进行临床资料采集和fhl1基因突变检测。对先证者进行常规生化、肌电图检查、肌肉活检、用PCR-SSCP方法进行fhl1基因突变检测,并观察本家系发病与fhl1基因的关系,综合分析此家系临床特点和基因遗传学特点。结果：该家系三代共8人,其中女性5人,仅有1名女性发病。先证者14岁发病,41岁就诊,以四肢无力为首发表现,病程进展缓慢,未影响寿命,但日常生活受不同程度影响。查体见屈颈轻度无力,翼状肩胛;肱三头肌、肱二头肌萎缩;骨盆带肌肌肉无力;腱反射减弱;Gower征阳性。先证者常规生化检测未见异常;肌电图示肌源性损害。肌肉活检符合还原体肌病病理表现。fhl1基因突变检测结果为阴性。先证者经过适当体育锻炼、神经营养药物治疗病情未见加重,先证者女儿18岁,除12岁起跑跳较同龄人差外,未发现其他临床症状及体征,视为临床疑似患者,需进一步随访观察。该家系其他成员体格检查及fhl1基因突变检测未见异常。结论：此家系有1名患病者,1名临床疑似患者,家系中其他成员尚未发病,需要进一步进行随访观察;先证者以四肢无力为主要临床表现,属于晚发型;此家系肌肉活检标本符合还原体肌病典型光镜下表现;排除fhl1基因突变导致的还原体肌病;此家系可能是由于其他非fhl1基因突变所致的先天性肌病,需要进一步行肌肉活检标本病理检查及基因检测测定

关键词：还原体肌病四肢无力 fhl1基因

慢病毒介导的shRNA敲低fhl1的表达促进HeLa和HepG2细胞生长

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第7期31卷 879-883页

作者：范忠义徐小洁张晓梅王涛韩白玉梁迎春叶棋浓焦顺昌解放军总医院肿瘤内科北京100853 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 解放军总医院消化内科北京100853 北京军区第264医院山西太原030001

目的通过构建靶向四个半LIM结构域蛋白1（fhll）基因的慢病毒介导的短发夹RNA（shRNA），观察fhll表达降低对HeLa细胞和HepG2细胞生长的影响。方法构建fhll基因的shRNA干扰病毒载体，将重组质粒转染人胚肾293T细胞，实时定量PCR（qRT-PC... 详细信息

目的通过构建靶向四个半LIM结构域蛋白1（fhll）基因的慢病毒介导的短发夹RNA（shRNA），观察fhll表达降低对HeLa细胞和HepG2细胞生长的影响。方法构建fhll基因的shRNA干扰病毒载体，将重组质粒转染人胚肾293T细胞，实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot法检测转染pLenti-H1 fhllsh RNA对fhll表达的抑制效果。慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞和HepG2肝癌细胞，经2-3周嘌呤霉素筛选后得到fhll稳定低表达的细胞，利用生长曲线实验和克隆形成实验检测fhll基因表达降低后对细胞生长的影响，利用软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响。结果qRT-PCR和Western blot结果显示，构建的shRNA病毒载体能够明显抑制fhll的表达；生长曲线实验和克隆形成实验显示，慢病毒介导的fhllshRNA能够明显促进肿瘤细胞的生长；软琼脂实验结果表明，fhll低表达能够促进肿瘤细胞的非锚定依赖性生长。结论构建的pLenti-H1 fhll shRNA慢病毒载体可有效地抑制fhll表达，明显促进HeLa细胞和HepG2细胞的增殖。

关键词： fhl1基因小发夹RNA 细胞生长

靶向fhl1的microRNA初步筛选研究

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军事医学 2013年第6期37卷 423-426页

作者：王瑜付洁程龙徐小洁宋海峰叶棋浓广西医科大学南宁530021 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 军事医学科学院生物工程研究所北京100850

目的构建含有fhl1基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体,用以检测与其相互作用的microRNA(miRNA)。方法 PCR扩增出fhl1基因3'-UTR区片段,插入到经过改造的荧光素酶报告基因载体pcDNA 3.0中;利用Target Scan5.1软件预测可能与fhl1基因3'UT... 详细信息

目的构建含有fhl1基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体,用以检测与其相互作用的microRNA(miRNA)。方法 PCR扩增出fhl1基因3'-UTR区片段,插入到经过改造的荧光素酶报告基因载体pcDNA 3.0中;利用Target Scan5.1软件预测可能与fhl1基因3'UTR区相互作用的miRNA,将miRNA与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中,检测其荧光活性;构建针对荧光活性结果变化明显的miRNA的种子区缺失突变体,检测荧光活性。结果测序结果表明,含有fhl1基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体构建正确;荧光素酶活性实验表明,与对照组相比,miR-200c、miR-146a、miR-146b-5p可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低40%左右,并构建上述miRNA缺失突变体,miR-200c使荧光素酶活性回复。结论成功构建了fhl1基因3'UTR区的荧光素酶报告基因载体,而miR-200c、miR-146a、miR-146b-5p可以抑制其荧光素酶活性,其中miR-200c可能直接作用于fhl1基因3'-UTR区。

关键词： fhl1基因荧光素酶报告基因转录活性 3'-UTR区 microRNA

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综合康复治疗幼儿还原体肌病病例报告

康复学报 2016年第6期26卷 38-42页

作者：吴心虹吴帆张芸李泰标燕铁斌厦门市第五医院福建厦门361101 中山大学孙逸夫纪念医院广东广州510120

目的:探讨还原体肌病(RBM)的病例特点与康复治疗方法。方法:收集RBM患儿1例,分析其临床表现、实验室检查、影像学表现、肌肉病理及基因检测结果。对患儿采取综合康复治疗,治疗前后对患儿作康复评定,评估其转移能力、肌力、肌张力、关节... 详细信息

目的:探讨还原体肌病(RBM)的病例特点与康复治疗方法。方法:收集RBM患儿1例,分析其临床表现、实验室检查、影像学表现、肌肉病理及基因检测结果。对患儿采取综合康复治疗,治疗前后对患儿作康复评定,评估其转移能力、肌力、肌张力、关节活动度、GMFM评分等。结果:基因检测示fhl1基因c.C369G杂合突变,病例特点均符合RBM表现。经综合康复治疗后,患儿肌力、GMFM-88、Berg评分均较治疗前有所提高。结论:综合康复训练可维持RBM患儿肢体肌力及平衡能力,促进运动功能和转移能力恢复,延缓疾病进展。

关键词：还原体肌病综合康复治疗 fhl1基因病例报道