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成纤维细胞生长因子受体3在失神经骨折愈合过程中对骨痂矿化的实验研究

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中国矫形外科杂志 2017年第10期25卷 912-916页

作者：赵军伟李争争李康罗伟孟会强汪玉良兰州大学第二医院骨科甘肃省骨关节疾病重点实验室兰州730000

[目的]通过建立失神经骨折模型并给予注射fgfr3抑制剂,观察骨痂生成过程中钙盐沉积速率。探讨该受体与失神经骨折愈合过程中骨痂矿化的关系。[方法]将60只成年健康wistar大鼠随机分为实验组和对照组,实验组建立T10脊髓离断下的胫骨骨折... 详细信息

[目的]通过建立失神经骨折模型并给予注射fgfr3抑制剂,观察骨痂生成过程中钙盐沉积速率。探讨该受体与失神经骨折愈合过程中骨痂矿化的关系。[方法]将60只成年健康wistar大鼠随机分为实验组和对照组,实验组建立T10脊髓离断下的胫骨骨折模型,并于术后给予fgfr3阻滞剂;对照组为T10脊髓离断合并胫骨骨折模型,术后给予等剂量生理盐水,分别于术后7、14、21、28 d拍X线片后取标本(每个时间点=6只),经固定、脱钙处理后,与骨折端上下5 mm处修剪标本,石蜡包埋,切成6um切片,每组另外6只大鼠用于钙黄绿素双标实验,并做硬组织切片,切片进行臧红固绿染色,VG染色。[结果]与对照组相比,实验组骨折愈合加速,钙盐沉积速率加速,骨小梁数目增多,差异具有统计学意义(Pfgfr3在失神经状态下能够促进骨痂的矿化,减少骨质的流失,促进骨小梁的再生。

关键词： fgfr3 失神经骨折愈合矿化脊髓损伤

羊水直接扩增快速诊断骨骼发育异常类单基因遗传病

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南京医科大学学报（自然科学版） 2020年第3期40卷 409-413,420页

作者：黄欢卢守莲王珏孙丽洲南京医科大学第一附属医院产前诊断中心江苏南京210029

目的:以最原始的羊水样本为起始模板直接进行PCR扩增,建立一种快速、简便的骨骼发育异常单基因遗传病的产前基因诊断方法。方法:对2013年4月-2018年1月于南京医科大学第一附属医院就诊的超声提示骨骼发育异常的38例胎儿行羊膜腔穿刺并... 详细信息

目的:以最原始的羊水样本为起始模板直接进行PCR扩增,建立一种快速、简便的骨骼发育异常单基因遗传病的产前基因诊断方法。方法:对2013年4月-2018年1月于南京医科大学第一附属医院就诊的超声提示骨骼发育异常的38例胎儿行羊膜腔穿刺并进行软骨发育不全、软骨发育低下、致死性发育不全及成骨发育不全4种单基因遗传病诊断,抽取孕妇羊水后不经过胎儿细胞培养,也不经过羊水中胎儿细胞DNA的提取,加入中性盐等物质作为PCR缓冲液,控制缓冲液pH值为8~10,扩增fgfr3及COL1A2基因上的靶标片段,直接在反应体系中加入8μL羊水进行PCR扩增测序,行产前基因诊断;考察扩增体系中的成分及含量对羊水直接扩增方法的影响。结果:38例胎儿样本中检出单基因遗传病致死性发育不全3例,分别为Ⅰ型1例,Ⅱ型2例;软骨发育不全3例,软骨发育低下1例。中性盐缓冲液、0.20 U/μL Promega Taq DNA聚合酶、每条引物1.2 pmol/μL用于羊水直接扩增效率最佳。结论:本方法省略了羊水细胞培养和羊水中胎儿DNA核酸提取这两步繁琐步骤,无需浓缩羊水即可直接扩增,缩短了诊断时间,节约了诊断成本,可以减少PCR过程中可能出现的样本交叉污染,是一种很有前景的快速产前基因诊断新方法。

关键词：骨骼发育异常 fgfr3 COL1A2 产前诊断基因分析

马德隆畸形家系、先天性软骨发育不全家系和诺里病家系的遗传学病因分析

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马德隆畸形家系、先天性软骨发育不全家系和诺里病家系的遗传学病...

作者：梅利斌中南大学

学位级别：硕士

背景：马德隆畸形（Madelung deformity）是一种罕见的特发性和先天性由于桡骨远端尺侧及掌侧骨骺发育障碍所引起的腕关节畸形。其特征性的临床表现有腕部疼痛无力、前臂弯曲畸形,尺骨茎突隆起;腕关节背伸、掌屈、尺偏及旋转受限。该病... 详细信息

背景：马德隆畸形（Madelung deformity）是一种罕见的特发性和先天性由于桡骨远端尺侧及掌侧骨骺发育障碍所引起的腕关节畸形。其特征性的临床表现有腕部疼痛无力、前臂弯曲畸形,尺骨茎突隆起;腕关节背伸、掌屈、尺偏及旋转受限。该病属拟常染色体显现遗传病,呈渐进式发病,多在青春期出现症状,女性多于男性,常为双侧及对称性发病。马德隆畸形具有明显表型异质性,该病与矮小同源盒基因SHOX缺陷有关。目的：对一马德隆畸形家系三代8人,其中患者3人进行分子遗传学分析,明确致病突变,将来为家系成员生育提供准确的产前诊断。方法：对家系部分成员进行临床骨科影像学检查;应用聚合酶链反应（PCR）和DNA测序的方法,对先证者的SHOX基因进行遗传突变分析;对测序发现的性质未知的碱基改变在相关家系成员及正常人群中进行进一步检查。结果：先证者SHOX基因第2号外显子存在一个未见报道的杂合突变c.21delT,导致其编码蛋白第7位氨基酸后的氨基酸发生移码突变,在75位氨基酸提前引入终止密码子,使其编码的SHOX蛋白为截短蛋白,家系中其他患者均存在相同突变。另外,家系中所有正常成员和200名中国健康对照个体均未检测到该突变。结论：SHOX基因的c.21delT杂合缺失突变是导致该家系成员发生马德隆畸形的新发致病突变;背景：先天性软骨发育不全（Achondroplasia,ACH）是最常见的短肢侏儒症遗传病。主要临床特征是四肢短引起身材矮小,头大,前额隆突,面中部发育不良,腰椎前凸,肘关节伸展受限,弓形腿,三叉戟样的手等。产前影像学诊断中,B超可发现胎儿四肢短小,长骨短粗,骨端膨大,羊水量增多等。发病率为1/40000～1/15000,呈常染色体显性遗传,外显率100%,80%为新生突变,与父亲的年龄有关。ACH是由fgfr3基因突变所致。目的：对本实验室接诊的10例临床诊断为ACH的家系进行遗传学病因分析,了解中国人ACH的基因突变情况。方法：运用聚合酶链式反应（PCR）和DNA测序的方法,对先证者的fgfr3基因进行突变检测。结果：7例ACH家系中患者均为fgfr3第9号外显子c.1138G＞A杂合点突变,3例ACH患者未检测到突变。结论：G1138A为先天性软骨发育不全的突变热点,中国人ACH患者基因突变与fgfr3基因1138位核甘酸G＞A突变密切相关。背景：诺里病（Norrie Disease, ND）是一种罕见的由于神经视网膜退行性和增生性改变导致先天或早发性双目失明,呈X染色体连锁隐性遗传。该病以先天性白内障和视网膜出血为主要临床特征,患者以男性为主,约有1/3诺里病患者有感音神经性耳聋,大约50%的患者会出现智力低下和精神行为异常。有些患者甚至会有生长障碍和癫痫更复杂的表型,ND是由NDP基因突变引起的。目的：运用分子遗传学方法对本室收集到的1例诺里病家系进行病因分析,明确该家系的致病突变,为家系成员生育提供准确的遗传咨询和产前诊断。方法：（1）运用聚合酶链式反应（PCR）和DNA直接测序的方法,对先证者的NDP基因进行突变检测;（2）选择高杂合度的8个STR位点对家系成员进行单倍体分析。结果：NDP基因检测结果发现先证者NDP基因在2号外显子上存在无义突变c.109C＞T（***37Term）,其姐姐为携带者,该突变为已报道的致病性突变;通过单倍体分析,证实先证者与其姐姐遗传了同一个携带有致病基因的单体型。结论：（1）NDP基因的c.109C＞T无义突变是学致该家系成员发生诺里病的致病突变（2）5个STR标记能提供有效的遗传信息,可用于临床植入前遗传学诊断（PGD）。

关键词：马德隆畸形 SHOX 基因突变 c.21delT 先天性软骨发育不全 fgfr3 G1138A 热点突变诺里病 NDP基因单体型分析

上尿路尿路上皮癌分型与免疫组化标记物的预后研究

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上尿路尿路上皮癌分型与免疫组化标记物的预后研究

作者：欧勇电子科技大学

学位级别：硕士

目的:检测连接蛋白4(Nectin-4)、叉头盒转录因子A1(FOXA1)、滋养细胞抗原2(Trop2)、成纤维细胞生长因子受体3(fgfr3)在上尿路尿路上皮癌(upper tract urothelial carcinoma,UTUC)组织中的表达情况,研究其与UTUC临床特征及预后的关系,评... 详细信息

目的:检测连接蛋白4(Nectin-4)、叉头盒转录因子A1(FOXA1)、滋养细胞抗原2(Trop2)、成纤维细胞生长因子受体3(fgfr3)在上尿路尿路上皮癌(upper tract urothelial carcinoma,UTUC)组织中的表达情况,研究其与UTUC临床特征及预后的关系,评估其作为新型分子标记物和分子靶点的可能性。方法:根据WHO2014年发布的分类标准及2017版UTUC的TNM分期标准,将标本分为高级别肿瘤组及低级别肿瘤组;乳头状肿瘤组及浸润性肿瘤组;T1期、T2期、T3期及T4期;根据患者术后是否出现复发和/或转移,分为术后有复发转移组及术后无复发转移组;依据患者临床特征:性别分为男性组、女性组;年龄分为高年龄组(≥70岁)、低年龄组(fgfr3的表达情况。通过卡方检验分析Nectin-4、FOXA1、Trop2、fgfr3表达水平与UTUC患者各临床指标之间的关系,Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验分析Nectin-4、FOXA1、Trop2、fgfr3表达水平与UTUC患者总生存期(Overall survival rate,OS)之间的关系;拟合单因素和多因素Cox比例风险模型评价Nectin-4、FOXA1、Trop2、fgfr3与UTUC患者预后的关系。结果:1、高级别肿瘤组、浸润性组、术后复发转移组、高临床分期组UTUC中Nectin-4、FOXA1表达率均高于各对应组,有统计学差异(P0.05)。2、fgfr3的表达与各临床特征之间均无统计学意义(P>0.05)。生存分析示fgfr3表达与患者生存率之间无统计学意义(P>0.05)。结论:1、Nectin-4、FOXA1、Trop2可能参与了UTUC的发生与发展,其表达可能影响了UTUC患者预后,但是不能作为独立的预测指标。2、fgfr3可能没有参与UTUC的发生与发展,与UTUC患者预后无关。3、具体参与机制需要进一步研究。

关键词： Nectin-4 FOXA1 Trop2 fgfr3 上尿路尿路上皮癌

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两种单基因遗传疾病致病基因的鉴定

两种单基因遗传疾病致病基因的鉴定

作者：余雪广西医科大学

学位级别：硕士

第一部分:一个巴基斯坦综合征型智力障碍家系致病基因的鉴定目的:通过体外细胞学实验和在体小鼠模型实验,对一个巴基斯坦综合征型智力障碍家系的候选突变位点(A基因C.270 G>A p.90 W*)的致病性进行鉴定。方法:1.提取患者和其同种族正常... 详细信息

第一部分:一个巴基斯坦综合征型智力障碍家系致病基因的鉴定目的:通过体外细胞学实验和在体小鼠模型实验,对一个巴基斯坦综合征型智力障碍家系的候选突变位点(A基因C.270 G>A p.90 W*)的致病性进行鉴定。方法:1.提取患者和其同种族正常人的外周血RNA,反转录为c DNA,通过实时荧光定量PCR技术评估该候选突变对其m RNA表达的影响;2.体外构建野生型和候选突变点的表达载体,转染入HEK293T细胞中,孵育24h后提取细胞的RNA,反转录为c DNA,通过实时荧光定量PCR技术评估该候选突变对其m RNA表达的影响;3.将表达载体转染入HEK293T细胞中,孵育48h后提取细胞的蛋白,利用蛋白质免疫印记法评估该候选突变对其蛋白表达的影响;4.通过候选基因和线粒体maker的免疫荧光共定位实验,验证候选突变基因的定位以及观察该候选突变基因是否会影响其表达部位;5.在体外特异性的诱发A基因的沉默,将si RNA表达载体转染入HEK293T细胞中,观察HEK293T细胞中线粒体功能的变化;6.利用Crispr/Cas 9技术构建候选突变位点的小鼠模型,将杂合雌性和杂合雄性小鼠进行交配繁殖,对其后代的野生型小鼠、杂合型小鼠以及纯合型小鼠的数目进行统计学分析;7.待小鼠生长至2月龄时,选取同窝同性别的小鼠进行行为学实验。评估其生长发育、认知功能、运动协调能力等。结果:1.患者和其同种族正常人外周血m RNA表达量的结果提示:和正常人相比,患者的m RNA的表达量明显减少;2.实时荧光定量PCR结果提示:和野生型表达载体相比,突变型表达载体的m RNA表达量明显减少,和体内实验的结果一致;3.蛋白质免疫印记的结果提示:和野生型表达载体相比,突变型表达载体的蛋白表达量也明显减少;4.免疫荧光共定位的结果提示:和野生型表达载体相比,突变型表达载体中A基因也是和线粒体共定位的;*** RNA结果提示:未成功的在体外特异性的诱导A基因的沉默;6.对杂合雌性与杂合雄性交配后代的统计发现:A基因+/+(野生型小鼠):A基因+/-(杂合型小鼠):A基因-/-(纯合型小鼠)的比值不符合孟德尔定律,A基因-/-(纯合型小鼠)的占比明显减少;***/Cas9定点突变小鼠模型的行为学实验结果:统计小鼠出生后一周的体重,野生型小鼠和纯合型小鼠之间没有统计学差异(p>0.05);水迷宫实验中,相比野生型小鼠,纯合型小鼠寻找可见平台和定向航行的潜伏期均明显延长(p0.05);在旷场实验中,相比于野生型小鼠,纯合型小鼠在中央区的总路程和总时间明显减少(pA p.90W*)为丧失功能突变;2.免疫荧光共定位实验中突变型和野生型表达载体的A基因都是和线粒体共定位,提示该无义突变并不是通过影响基因的表达部位而致病;***/Cas 9定点突变的小鼠模型中A基因-/-(纯合型小鼠)明显减少,提示纯合型小鼠存在不完全的胚胎致死;4.水迷宫实验和跳台实验中纯合型小鼠的潜伏期明显延长,旷场实验中纯合型小鼠在中央区的总路程和总时间明显减少,提示纯合型小鼠表现出学习记忆能力减退、认知功能低下、协调运动能力减弱等,该小鼠模型可以进一步作为该智力障碍家系候选致病基因的遗传学和分子机制研究的模型。第二部分:两个黑棘皮病家系致病突变的筛查目的:通过全外显子组和一代测序实验,对2个黑棘皮病家系的致病基因进行鉴定。方法:收集先证者及家庭成员的临床资料并采集外周血,提取基因组DNA,对先证者进行全外显子组测序,筛选出可疑致病位点后,用聚合酶链式反应和Sanger测序在家系成员和200名正常对照中进行验证。结果:1.本研究收集到两个黑棘皮病家系,两个先证者均表现为:从婴幼儿时期开始出现腋窝、腹股沟等褶皱部位皮肤的色素沉着、增厚、增粗,随着年龄的增长,上述皮损逐渐加深,最后呈天鹅绒样改变。两个家系均符合常染色体显性遗传模式。2.全外显子高通量测序结果:两个家系的患者均存在fgfr3基因c.1955A>C错义突变,该突变导致其编码蛋白的第652位氨基酸由赖氨酸变成苏氨酸(p.K 652 T)。***测序结果:在家系中的正常成员和200名健康对照志愿者中均未检测到相同突变。4.致病性预测:该突变在Ex AC、gnom ADenome等公共数据库中未见报道,SIFT、Polyphen等软件均高度提示该氨基酸的改变可能致病。结论:fgfr3基因c.1955 A

关键词：智力障碍 A基因无义突变小鼠模型黑棘皮病 fgfr3 错义突变致病基因

骨髓间充质干细胞源性外泌体miR-99b-5p在结直肠癌中的生物学功能及作用机制初探

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骨髓间充质干细胞源性外泌体miR-99b-5p在结直肠癌中的生物学功能...

作者：陈雨莎广西医科大学

学位级别：硕士

目的:比较无转移结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)患者与肝转移(colorectal liver metastases,CRLM)患者血浆外泌体中miR-99b-5p的表达差异;探究人骨髓间充质干细胞(Human bone marrowmesenchymal stem cells,hBMSC)源性外泌体(Exosome,Exos)中miR-99b-5p在CRC发生发展中的作用并探索其可能的调控机制。方法:(1)采用临床血浆样本进行分离提取血浆外泌体,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Rea-ltime-PCR,q PCR)技术,比较血浆外泌体miR-99b-5p在无转移CRC患者、CRLM患者中的表达情况。(2)采用超速离心法分离hBMSC上清外泌体,通过透射式电子显微镜、纳米粒子追踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)和蛋白免疫印记(Western blot,WB)技术对其进行鉴定;采用共聚焦显微镜观察CRC细胞系LoVo对hBMSC-Exos的摄取情况;利用外泌体抑制剂GW4869抑制hBMSC外泌体分泌,构建Exo-miR-99b-5p低表达模型;利用miR-99b-5p mimic瞬时转染hBMSC细胞,建立hBMSC-Exos中miR-99b-5p过表达模型。通过CCK-8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验观察hBMSC-Exos中miR-99b-5p对CRC细胞系LoVo增殖、迁移、侵袭能力的影响。通过WB检测CRC细胞系LoVo中成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor,fgfr3)、波形蛋白、E-粘钙素、N-粘钙素的表达水平,观察hBMSC-Exos对CRC下游蛋白的调控作用。(3)利用CRC细胞系LoVo构建结直肠癌裸鼠皮下成瘤模型,将裸鼠随机分为PBS对照组,Exo-miR-NC组,Exo-miR-99b-5p组,根据分组每周尾静脉注射PBS或相应的外泌体,4周后处死所有小鼠,测定移植瘤体积和质量,观察Exo-miR-99b-5p对裸鼠体内肿瘤生长的影响。采用全自动生化分析仪检测裸鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血肌酐和血尿素氮水平,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察主要脏器组织(心、脑、肝、肺、脾、肾)切片,以观察Exo-miR-99b-5p对裸鼠重要脏器和功能有无影响。结果:(1)qPCR结果显示,CRLM患者血浆外泌体中miR-99b-5p的表达水平(0.46±0.88)明显低于无转移CRC患者(1.36±2.67),差异有统计学意义(P3、CD9、TSG101阳性,符合外泌体特征;共聚焦显微镜显示CRC细胞LoVo可摄取hBMSC-Exos;外泌体抑制剂GW4869可明显抑制hBMSC外泌体及Exo-miR-99b-5p的产生,LoVo+Exo-miR-99b-5p抑制组较对照组增殖、迁移能力增强。LoVo+Exo-miR-99b-5p过表达组与较对照组增殖、迁移、侵袭能力减弱,WB分析结果显示LoVo+Exo-miR-99b-5p组较NC组细胞E-粘钙素水平升高,fgfr3、N-粘钙素、波形蛋白水平降低。(3)在用LoVo构建的结直肠癌裸鼠皮下成瘤模型中,尾静脉注射Exo-miR-99b-5p组较尾静脉注射PBS对照组及Exo-miR-NC组,肿瘤体积和重量显著减少;三组裸鼠肝肾功能等血清学指标无明显异常,主要器官组织的HE染色未见明显的组织病理学异常或损伤。结论:miR-99b-5p在CRLM中较无转移CRC患者血浆外泌体中表达下调;hBMSC分泌的外泌体中miR-99b-5p可以抑制结直肠癌的进展和转移,这种生物学作用有部分是通过调控fgfr3来影响结直肠癌上皮间充质转化完成的。

关键词：结直肠癌肝转移外泌体 miRNA-99b-5p fgfr3

microRNA-99a对结肠癌细胞HT-29生物学行为的影响及机制研究

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microRNA-99a对结肠癌细胞HT-29生物学行为的影响及机制研究

作者：宋军南京医科大学

学位级别：硕士

结肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类生命健康。结肠癌的发生发展及疾病的转归是个复杂的多基因、多因素参与的过程,越来越多的学者关注结肠癌细胞内的基因表达对结肠癌的影响。micro RNA是一类小分子非编码RNA,主要通过... 详细信息

结肠癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人类生命健康。结肠癌的发生发展及疾病的转归是个复杂的多基因、多因素参与的过程,越来越多的学者关注结肠癌细胞内的基因表达对结肠癌的影响。micro RNA是一类小分子非编码RNA,主要通过种子序列与靶信使RNA(m RNA)的3’-非编码区(3’-Untranslated Region,3’-UTR)完全或不完全配对,抑制靶基因或蛋白质的表达,从而实现在转录后水平对靶基因的表达进行调控。研究发现多种micro RNA在肿瘤的发病机制中表现为促癌或抑癌作用,micro RNA表达的上调或下调,与胃癌、结肠癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关。因此,探讨micro RNA与结肠癌的相互作用机制,可以为结肠癌的防治提供一定的理论基础。目的:micro RNA-99a已经被证实在骨肉瘤和乳腺癌中的表达是显著下调的,而在胃癌和急性髓性白血病中则表达增高,提示micro RNA-99a可能促进肿瘤的发展。目前,micro RNA-99a对结肠癌细胞的影响尚未明确,本文旨在研究micro RNA-99a在结肠癌患者组织中的表达,对结肠癌细胞的增殖和迁移能力的影响及其可能机制。方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞株HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常结肠上皮细胞株HCoe Pic,采用实时荧光定量PCR检测结肠癌患者肿瘤组织和结肠癌细胞株中micro RNA-99a表达情况;将结肠癌细胞株HT-29转染micro RNA-99a抑制剂后,CCK-8法检测micro RNA-99a对结肠癌细胞增殖的变化;transwell法观察micro RNA-99a对结肠癌细胞迁移的影响;Western blot检测HT-29中fgfr-3的表达水平。结果:micro RNA-99a在结肠癌组织中的表达量明显高于正常组织(6.27±0.48 vs1.34±0.54,P34,7.67±0.24,5.78±0.22,6.28±0.44 vs 1.45±0.37,Pfgfr-3表达显著降低(Pfgfr-3信号通路可能参与了上述过程。

关键词：结肠癌 microRNA-99a 增殖迁移 fgfr3

MicroRNA-99a促进结肠癌细胞的增殖和迁移及其可能机制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第8期24卷 880-883页

作者：宋军汤黎明刘坤刘寒旸周艳南京医科大学附属常州二院江苏常州213003

目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响。方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常... 详细信息

目的:探讨结肠癌患者组织中microRNA-99a表达水平以及对结肠癌细胞增殖和迁移的影响。方法:取南京医科大学附属常州二院胃肠病中心49例结肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织(癌旁5cm)标本以及结肠癌细胞HCT-116、HT-29、SW-480、Caco-2和正常结肠上皮细胞HCoe Pic,采用实时荧光定量PCR检测结肠癌患者肿瘤组织和结肠癌细胞中microRNA-99a表达水平;结肠癌细胞株HT-29转染microRNA-99a抑制剂后,CCK-8法检测microRNA-99a对结肠癌细胞增殖的变化;transwell法观察microRNA-99a对结肠癌细胞迁移的影响;Western blotting检测了HT-29中fgfr-3的表达水平。结果:microRNA-99a表达在结肠癌组织中明显高于癌旁组织(6.27±0.48 vs 1.34±0.54,P34,7.67±0.24,5.78±0.22,6.28±0.44 vs 1.45±0.37,Pfgfr-3显著降低(Pfgfr-3信号通路发挥作用。

关键词： microRNA-99a 结肠癌增殖迁移 fgfr3

复发性非肌层浸润性膀胱癌临床化疗耐药与MKP-1的相关性研究

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复发性非肌层浸润性膀胱癌临床化疗耐药与MKP-1的相关性研究

作者：雷思羽浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究探讨MKP-1对化疗耐药的非肌层浸润性膀胱癌细胞耐药性的影响及其可能机制,为该类患者术后随访及后续治疗方案提供指导。方法:收集嘉兴市**医院2018年1月-2019年6月期间,收治且术后病理确诊的膀胱癌患者临床病例资料,统计分析... 详细信息

目的:研究探讨MKP-1对化疗耐药的非肌层浸润性膀胱癌细胞耐药性的影响及其可能机制,为该类患者术后随访及后续治疗方案提供指导。方法:收集嘉兴市**医院2018年1月-2019年6月期间,收治且术后病理确诊的膀胱癌患者临床病例资料,统计分析膀胱癌耐药复发的相关因素。筛选其中初发和复发的非肌层浸润性膀胱癌患者分组进行免疫组化和RT-PCR检测,分析临床肿瘤组织样本中fgfr3和MKP-1的表达变化;进一步设计细胞实验,分析MKP-1介导膀胱癌细胞耐药过程中的作用机制。结果:1、临床资料分析可得,膀胱癌耐药复发与肿瘤的数目、大小及级别高低存在相关性(Pfgfr3和MKP-1在复发组NMIBC中表达明显增高,差异具有统计学意义(P3、细胞实验中,与对照组相比,siMKP-1组磷酸化的JNK、ERK和p38表达升高;细胞凋亡显著增加(P38活化后,与对照组相比,siMKP-1组细胞活性明显增强(Pfgfr3和MKP-1在复发性非肌层浸润性膀胱癌患者中相较初发性膀胱癌患者表达增加。膀胱癌耐药复发可能与MKP-1的过度表达密切相关,MKP-1可能通过抑制JNK、ERK和p38活化参与fgfr3过表达的膀胱癌术后频发的化疗耐药过程,MKP-1可能成为膀胱癌化疗耐药的一个新型治疗靶点,为临床膀胱癌患者后续随访及新诊治方案的制订提供依据。

关键词：膀胱癌耐药 MKP-1 fgfr3 吡柔比星