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fgf7 enhances the expression of ACE2 in human islet organoids aggravating SARS-CoV-2 infection

Signal Transduction and Targeted Therapy 2024年第5期9卷 2260-2274页

作者： Hao Meng Zhiying Liao Yanting Ji Dong Wang Yang Han Chaolin Huang Xujuan Hu Jingyi Chen Hengrui Zhang Zonghong Li Changliang Wang Hui Sun Jiaqi Sun Lihua Chen Jiaxiang Yin Jincun Zhao Tao Xu Huisheng Liu School of Biomedical Engineering Guangzhou Medical UniversityGuangzhou 511495 GuangdongChina Guangzhou National Laboratory Guangzhou 510320 GuangdongChina State Key Laboratory of Respiratory Disease National Clinical Research Center for Respiratory DiseaseGuangzhou Institute of Respiratory HealthThe First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical UniversityGuangzhou 510120China Center for Translational Medicine Wuhan Jinyintan HospitalWuhan 430023 HubeiChina School of Biomedical Sciences and Engineering South China University of TechnologyGuangzhou 510006 GuangdongChina

The angiotensin-converting enzyme 2(ACE2)is a primary cell surface viral binding receptor for SARS-CoV-2,so finding new regulatory molecules to modulate ACE2 expression levels is a promising strategy against *** the current study,we utilized islet organoids derived from human embryonic stem cells(hESCs),animal models and COVID-19 patients to discover that fibroblast growth factor 7(fgf7)enhances ACE2 expression within the islets,facilitating SARS-CoV-2 infection and resulting in impaired insulin *** hESC-derived islet organoids,we demonstrated that fgf7 interacts with fgf receptor 2(fgfR2)and fgfR1 to upregulate ACE2 expression predominantly inβ*** upregulation increases both insulin secretion and susceptibility ofβcells to SARS-CoV-2 *** fgfR counteracts the fgf7-induced ACE2 upregulation,subsequently reducing viral infection and replication in the ***,retrospective clinical data revealed that diabetic patients with severe COVID-19 symptoms exhibited elevated serum fgf7 levels compared to those with mild ***,animal experiments indicated that SARS-CoV-2 infection increased pancreatic fgf7 levels,resulting in a reduction of insulin concentrations in *** together,our research offers a potential regulatory strategy for ACE2 by controlling fgf7,thereby protecting islets from SARS-CoV-2 infection and preventing the progression of diabetes in the context of COVID-19.

关键词： ACE2 fgf7 islet

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fgf7/10调控表皮细胞向外泌汗腺分化的作用和机制研究

FGF7/10调控表皮细胞向外泌汗腺分化的作用和机制研究

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作者：曹满秀锦州医科大学

学位级别：硕士

目的我们前期对Sprague-Dawley(SD)大鼠外泌汗腺和毛囊基板期差异基因行RNA-seq得到fgf7和fgf10在外泌汗腺基板期的表达显著高于毛囊基板期。本课题的目的是对fgf7/10调控表皮细胞向外泌汗腺分化的作用和机制进行研究。方法1、对SD大鼠... 详细信息

目的我们前期对Sprague-Dawley(SD)大鼠外泌汗腺和毛囊基板期差异基因行RNA-seq得到fgf7和fgf10在外泌汗腺基板期的表达显著高于毛囊基板期。本课题的目的是对fgf7/10调控表皮细胞向外泌汗腺分化的作用和机制进行研究。方法1、对SD大鼠胚胎期E17.5d背部皮肤(毛囊基板存在的部位)和E19.5d足垫腹侧皮肤(外泌汗腺基板存在部位)的组织行免疫荧光染色。检测角蛋白K4,K5,K7-10,K12,K14,K15,K17-20,K27和K73和报道的外泌汗腺特异性标志物Na+/K+-ATPase(NKA),Na+-K+-2Cl-协同转运蛋白1(NKCC1)和毛囊特异性标志物P-cadherin,淋巴增强因1(LEF1),LIM同源框基因2(Lhx2)。Lhx2/K14双重免疫荧光染色将外泌汗腺和毛囊基板进行区分,Western blot(WB)实验检测外泌汗腺和毛囊基板的差异抗原及部分共同表达抗原进一步验证免疫荧光染色结果。2、人表皮细胞裸鼠体内3D培养,分为“人表皮细胞+人表皮细胞3D培养基+浓缩Matrigel”组(NC组),“人表皮细胞+人表皮细胞3D培养基+浓缩Matrigel+100 ng/m L fgf7 PODS”组(fgf7组),“人表皮细胞+人表皮细胞3D培养基+浓缩Matrigel+100ng/m L fgf10 PODS”组(fgf10组),“人表皮细胞+人表皮细胞3D培养基+浓缩Matrigel+100 ng/m L fgf7 PODS+100ng/m L fgf10 PODS”组(fgf7+10组)培养5W后取样行石蜡包埋、HE染色、免疫荧光染色检测人外泌汗腺标记物K7和毛囊标记物K73,人头皮组织(该部位既含外泌汗腺又含毛囊)作为阳性对照,每组3个样本(n=3)。3、人表皮细胞裸鼠体内3D培养,分为NC组、fgf7组、fgf10组、fgf7+10组,体内培养5W后取样、WB检测前期筛选的在SD大鼠外泌汗腺基板期显著升高的MAPK和AKT信号通路蛋白,如ERK,p-ERK,P38,p-P38,JNK,p-JNK,AKT,p-AKT在各组的表达,得出在各组表达的差异性蛋白。结果1、外泌汗腺和毛囊基板共同表达K4,K5,K 14,K15,K 17,K 18,P-cadherin和LEF1,均不表达K7,K 8,K 9,K10,K12,K19,K 20,K 27,K 73,NKA或NKCC1,毛囊基板特异性表达Lhx2。Lhx2和共同表达的抗原K14双重免疫荧光染色可以将外泌汗腺基板和毛囊基板进行区分。2、人表皮细胞裸鼠体内3D培养NC组,fgf7组,fgf10组,fgf7+10组HE染色提示形成类器官团。免疫荧光染色结果表明NC组类器官团仅表达毛囊标志物K73,不表达外泌汗腺标志物K7;fgf7组,fgf10组,fgf7+10组类器官团阳性表达毛囊标记物K73和外泌汗腺标记物K7。3、WB检测fgf7组,fgf10组和fgf7+10组fgfR1,fgfR2,ERK,p-ERK蛋白表达量均高于NC组,但在各组之间未能检测到AKT,p-AKT,P38,p-P38,JNK,p-JNK蛋白的明显变化。结论1、Lhx2是毛囊基板的特异性标记。外泌汗腺和毛囊基板可以通过特异性标记Lhx2和共同表达标记物如K4,K5,K14,K15,K17,K18,P-cadherin和LEF1的双重免疫荧光染色来区分。2、fgf7和fgf10可以调控表皮细胞向外泌汗腺分化。3、ERK1/2信号通路可能参与fgf7和fgf10调控表皮细胞向外泌汗腺的分化。

关键词： fgf7 fgf10 外泌汗腺表皮细胞分化作用机制

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fgf10，fgf7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响和比较

FGF10，FGF7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响和比较

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作者：张咏鑫深圳大学

学位级别：硕士

目的:从临床组织样本中分离人原代泪腺干细胞并进行鉴定与培养,研究并比较fgf10,fgf7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响,同时建立泪腺3D气液培养模型,为泪腺再生研究提供可靠的研究方法与实验数据。方法:1、获取手术切除的人泪腺... 详细信息

目的:从临床组织样本中分离人原代泪腺干细胞并进行鉴定与培养,研究并比较fgf10,fgf7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响,同时建立泪腺3D气液培养模型,为泪腺再生研究提供可靠的研究方法与实验数据。方法:1、获取手术切除的人泪腺组织,取一半进行免疫组化染色及泪腺器官标志性蛋白的免疫荧光。2、另一半进行细胞分离和传代培养。3、免疫荧光染色检测泪腺组织特异性标志物的表达(AQP5、CK15)。4、免疫荧光染色检测泪腺干细胞特异性标志物的表达(Nestin、P63)。5、比较不同浓度fgf10,fgf7和Bmp7对细胞形态的影响,CCK-8检测细胞增殖。6、根据以上检测结果分别选择fgf10,fgf7和Bmp7的实验浓度,用于构建人原代泪腺干细胞3D气液培养模型。结果:1、泪腺组织AQP5、CK15、Lactoferrin和BARX2表达阳性,验证组织来源为泪腺;P63、Ki67表达阳性,说明组织中有具有干细胞特性的细胞。2、泪腺细胞AQP5、CK15表达阳性,提示其来源于泪腺组织。3、P63、Nestin高表达,证明分离得到的细胞具有干细胞特性。4、fgf10,fgf7和Bmp7对细胞增殖分化的影响与比较,对CCK8结果进行分析得到:fgf10实验浓度为100 ng/ml,fgf7实验浓度为100 ng/ml,Bmp7在100ng/ml时最适合用于刺激细胞从快速增殖向分化的过渡。5、对人原代泪腺干细胞3D气液培养物进行H&E染色观察,fgf10,fgf7和Bmp7诱导培养形成的泪腺类器官更类似于腺泡细胞,而不是泪腺组织中的导管细胞。结论:fgf10在100 ng/ml时细胞生长状态最好;fgf7需在100 ng/ml时才能刺激刺激腺体上皮的出芽;Bmp7在100 ng/ml时最适合用于刺激细胞从快速增殖向分化的过渡。以上浓度的fgf10、fgf7和Bmp7组合培养,在气液界面诱导下,人泪腺干细胞可分化形成类似于腺泡细胞的3D气液类器官。

关键词：泪腺再生泪腺干细胞 fgf10 fgf7 Bmp7

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乳腺发育激素对小鼠乳腺中fgf7,fgf10及其受体表达的影响

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中国科学（C辑） 2008年第7期38卷 612-618页

作者：崔英俊李庆章东北农业大学乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030

为阐明雌激素、孕酮以及催乳素3种乳腺发育激素对乳腺发育的调节机制,本研究以昆明鼠为实验材料,通过体外实验,系统地研究了乳腺发育激素对不同时期乳腺中fgf7,fgf10及KGFR表达的影响.结果表明,17β-雌二醇能引起小鼠乳腺中fgf7表达上调... 详细信息

为阐明雌激素、孕酮以及催乳素3种乳腺发育激素对乳腺发育的调节机制,本研究以昆明鼠为实验材料,通过体外实验,系统地研究了乳腺发育激素对不同时期乳腺中fgf7,fgf10及KGFR表达的影响.结果表明,17β-雌二醇能引起小鼠乳腺中fgf7表达上调;孕酮对小鼠乳腺中的fgf7表达没有影响;在小鼠乳腺发育的妊娠期与泌乳期,催乳素能引起fgf7表达显著上调.17β-雌二醇能引起小鼠乳腺中的fgf10表达上调;在青春期小鼠乳腺发育,孕酮和催乳素能显著降低fgf10的表达;在妊娠期小鼠乳腺发育,催乳素能显著增加fgf10的表达.当17β-雌二醇在体内所占比例较高时,会降低KGFR的表达;而17β-雌二醇在体内所占比例较低时,反而会增加KGFR的表达.低浓度孕酮使KGFR的表达增加,高浓度孕酮对于KGFR的表达没有影响.在妊娠期以及泌乳期,对于小鼠乳腺发育,催乳素能显著升高KGFR的表达.

关键词： fgf7 fgf10 KGFR 激素乳腺

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fgf7对帕金森病模型小鼠星形胶质细胞增殖活化的调节及机制研究

FGF7对帕金森病模型小鼠星形胶质细胞增殖活化的调节及机制研究

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作者：张靖南京医科大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是第二常见的神经退行性疾病,以中脑黑质区(Substantia nigra pars compacta,SNc)多巴胺能神经元进行性丢失为病理特征,临床症状表现为静止性震颤、肌僵直、运动迟缓等,同时伴随认知能力下降等非运动... 详细信息

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是第二常见的神经退行性疾病,以中脑黑质区(Substantia nigra pars compacta,SNc)多巴胺能神经元进行性丢失为病理特征,临床症状表现为静止性震颤、肌僵直、运动迟缓等,同时伴随认知能力下降等非运动症状。由于对PD发病机制的认识尚不完全清楚,目前临床治疗仍以对症为主,并不能从根本上逆转或阻止疾病的进展。关于PD的发病机制已经提出了多种假说,包括氧自由基过度释放、线粒体功能损害、营养支持丧失、激酶活性异常、钙稳态破坏、蛋白质降解功能障碍等。随着研究的深入,这些围绕以神经元为核心的假说无法彻底揭示PD发病的分子机制,非神经元细胞在PD发生、发展中的作用越来越受到研究者的重视。星形胶质细胞作为脑组织中的间质细胞,主要作用是支撑组织结构,修复和填充损伤区域。研究发现星形胶质细胞可以指导神经元的发育并调节突触功能,调节离子和神经递质的细胞外浓度,参与免疫反应和修复过程,调节脑微循环和血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性等。星形胶质细胞与神经细胞形成完整的神经-胶质网络,是维持大脑基本生理功能的必要条件;在这样一个网络微环境中,小胶质细胞能释放成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factors,fgf)和炎症因子作用于星形胶质细胞,同时星形胶质细胞又会释放fgf和炎症因子至微环境中,形成了生长因子-炎症因子相互作用的关系网络。在PD的病理过程中,星形胶质细胞扮演着重要的调控炎症反应的角色,活化的星形胶质细胞可以加速PD模型中神经元的丢失,然而这一分子机制尚不清楚。fgfs家族属于脊椎动物中最多样化的生长因子家族之一,参与大脑的早期发育以及脑组织损伤后的修复。fgf7是一种旁分泌型成纤维细胞生长因子,在大脑、肺、输精管、舌和皮肤等组织中均有表达,参与损伤组织修复、新生血管形成、干细胞增殖分化、神经再生以及钙磷代谢等。研究显示fgf/fgfR在调节炎症反应中起重要作用。在中枢神经系统中关于fgf7的确切作用报道较少,本课题组前期研究发现,MPP模型下星形胶质细胞中fgf7的蛋白表达水平显著升高,可能是调控星形胶质增殖,引发炎症反应的重要分子。本课题拟进一步从动物、细胞水平研究PD模型下fgf7在星形胶质细胞增殖和炎症反应中的确切作用及机制。目的:探究fgf7对PD小鼠星形胶质细胞增殖及炎症反应的调节作用及分子机制。方法:制备小鼠MPTP亚急性PD模型,免疫组化和尼氏染色检测中脑TH阳性神经元的丢失和神经元的存活;转录组测序筛选出差异表达基因fgf7;免疫荧光检测GFAP的活化和fgf7在星形胶质细胞以及神经元中的定位和表达;Western blot检测中脑组织fgf7,GFAP的蛋白表达;培养小鼠原代星形胶质细胞,给予MPP刺激,Western blot检测fgf7,GFAP的蛋白表达;在原代星形胶质细胞上用慢病毒敲减fgf7,Western blot验证GFAP蛋白表达情况;在体制备中脑fgf7敲减的MPTP慢性PD模型,行为学检测小鼠运动协调能力,免疫组化检测GFAP活化情况和TH的丢失。进一步探究fgf7的生物学功能,培养原代星形胶质细胞,给予外源性fgf7因子刺激,Western blot检测增殖细胞核抗原PCNA的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxy Uridine,Brd U)染色和免疫荧光检测星形胶质细胞增殖数目和形态变化;接着探究fgf7在星形胶质细胞活化过程中对炎症反应的调节作用,培养原代星形胶质细胞,给予fgf7预孵育后再给LPS刺激,ELISA和QPCR分别检测上清和细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌;Western blot检测NF-κB激活指标,同时检测PI3K/AKT、JAK/STAT3、RAS/MAPK、PKC/GSK3β信号通路相关指标;给予GSK3β抑制剂或敲减GSK3β,Western blot和ELISA验证相关指标。结果:***小鼠和细胞模型中星形胶质细胞增殖活化MPTP亚急性PD模型中,MPTP可诱导TH神经元的丢失,同时引起小鼠中脑SNc区星形胶质细胞增殖活化。MPP刺激诱导原代星形胶质细胞增殖活化。***-Seq发现MPP诱导星形胶质细胞fgf7 m RNA水平升高***小鼠和细胞模型中fgf7蛋白表达上调MPTP亚急性PD模型小鼠中脑fgf7蛋白水平呈现高表达;在小鼠中脑SNc区fgf7能与星形胶质细胞标志物GFAP及神经元标志物Neu N共标,提示fgf7在星形胶质细胞和神经元中均有表达,且MPTP可诱导fgf7表达进一步上调。WT原代星形胶质细胞给予MPP刺激,GFAP和fgf7的蛋白水平均上调。***7干扰抑制MPP诱导

关键词： fgf7 星形胶质细胞增殖活化神经炎症帕金森病

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fgf7通过MAPK-ERK1/2信号通路促进小前列腺中叶增生中上皮细胞的上皮-间质转化

FGF7通过MAPK-ERK1/2信号通路促进小前列腺中叶增生中上皮细胞的...

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作者：周征南京医科大学

学位级别：硕士

背景:良性前列腺增生症(BPH)是老年男性的常见的进行性疾病。中叶突出进入膀胱的前列腺增生患者有着更严重的下尿路症状,这种现象引起了我们的注意。为了寻找可能与这种有趣的临床现象相关的潜在因素,我们收集了中叶增生患者的前列腺组... 详细信息

背景:良性前列腺增生症(BPH)是老年男性的常见的进行性疾病。中叶突出进入膀胱的前列腺增生患者有着更严重的下尿路症状,这种现象引起了我们的注意。为了寻找可能与这种有趣的临床现象相关的潜在因素,我们收集了中叶增生患者的前列腺组织并进行了基因分析。结果显示,与正常前列腺组织相比,fgf7在增生的前列腺中叶中高表达。因此,我们研究了fgf7对前列腺中叶增生进展的潜在影响以及fgf7促进该临床表型发展的机制。方法:收集突入膀胱的增生前列腺中叶和正常前列腺中叶标本,进行RNA测序分析,挑选差异基因。从增生的前列腺中叶和正常前列腺中叶中分离、培养人原代前列腺基质细胞。构建fgf7小干扰RNA并转染进BPH-1细胞系中。将fgf7加入RWPE培养基中,以50,100和200ng/ml的浓度刺激RWPE-1细胞48h。用CCK-8测定RWPE-1细胞增殖能力,ELISA方法测定原代基质细胞、BPH-1和RWPE-1细胞上清中fgf7的蛋白水平。Western blotting测定多种蛋白水平。结果:Western blot结果显示BPH-1细胞中fgf7表达水平高于RWPE-1细胞。ELISA分析结果表明,与正常基质细胞相比,人前列腺中叶增生原代基质细胞的培养上清液中fgf7蛋白水平明显增高(约200倍pfgf7的敲低抑制了BPH-1的增殖,而在RWPE-1中,fgf7随着浓度梯度增加明显刺激了BPH-1细胞的增殖。用fgf7刺激的RWPE-1细胞中,上皮-间质转化(EMT)标记物(例如N-cadherin和Snail)的表达水平增加。在BPH-1细胞中下调fgf7后,这些标志物呈现下降趋势。在BPH-1细胞中,fgf7敲低后磷酸化ERK1/2降低。结论:fgf7不仅促进上皮细胞的增殖,而且还在向膀胱突出的前列腺中叶增生的发展过程中诱导上皮-间质转化。fgf7可能是前列腺中叶增生的原因,这些结果为中叶增生这一前列腺增生临床表型提供了潜在的治疗方案。

关键词：前列腺增生上皮-间质转化前列腺基质细胞 BPH-1 RWPE-1 fgf7 基因分析

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fgf7、10及其受体fgfR2Ⅲb在小鼠肾发育中的表达

FGF7、10及其受体FGFR2Ⅲb在小鼠肾发育中的表达

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作者：李佳辽宁医学院

学位级别：硕士

目的观察成纤维细胞生长因子7、10（fibroblast growth factor7、10，fgf7、fgf10）以及成纤维细胞生长因子受体2Ⅲ b （fibroblast growth factor receptor2Ⅲ b,fgfR2Ⅲb）在小鼠肾发育中的时空性表达，进而探讨三者在肾脏发生发... 详细信息

目的观察成纤维细胞生长因子7、10（fibroblast growth factor7、10，fgf7、fgf10）以及成纤维细胞生长因子受体2Ⅲ b （fibroblast growth factor receptor2Ⅲ b,fgfR2Ⅲb）在小鼠肾发育中的时空性表达，进而探讨三者在肾脏发生发育中的作用。方法选取不同胚龄（E）12、14、16、18d胎鼠和生后不同日龄（N）1、3、7、14、21和42d仔鼠，应用免疫组织化学技术（IHC）和免疫荧光技术（IFA）对小鼠肾组织中fgf7、fgf10及其受体fgfR2Ⅲb的表达进行定位观察;应用图像分析技术（CLAS－1000型细胞图像分析系统）、体视学方法和免疫印迹技术（WB）对小鼠肾组织中三者表达进行定量检测。结果免疫组织化学和免疫荧光结果显示：E12d，因子fgf7、fgf10和受体fgfR2Ⅲb开始在输尿管芽微弱表达。而后伴随着肾脏逐渐发育成熟，因子fgf7、fgf10和受体fgfR2Ⅲ b主要表达于远端小管和集合管;因子fgf10在近曲小管表达，近直小管无阳性表达;因子fgf7和受体fgfR2Ⅲ b在近端小管无阳性表达;生后肾组织及发育各阶段肾小体未见因子fgf7、fgf10和受体fgfR2Ⅲb表达。图像分析、体视学和免疫印迹结果显示：从E12d至N7d，因子fgf7、fgf10和受体fgfR2Ⅲ b在肾脏的表达量逐渐增加，而从N7d至N42d表达量逐渐减少。结论 fgf7、fgf10及其受体fgfR2Ⅲ b在肾脏发生发育的过程中起重要作用，其中因子fgf10主要作用于近曲小管，远端小管和集合管，而因子fgf7、受体fgfR2Ⅲb主要作用于远端小管和集合管。

关键词： fgf7 fgf10 fgfR2 Ⅲb 肾发育小鼠

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MiR-381-3p通过靶向fgf7抑制宫颈癌细胞的增殖与转移

MiR-381-3p通过靶向FGF7抑制宫颈癌细胞的增殖与转移

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作者：卞干霞苏州大学

学位级别：硕士

目的:本研究检测miR-381-3p在宫颈癌中的表达情况,探索其对宫颈癌细胞增殖和迁移等生物学过程中的影响,阐明miR-381-3p其在宫颈癌发病中的分子机制,为宫颈癌的治疗提供新的理论依据和思路。方法:利用GEO数据库筛选差异基因,通过定量实时... 详细信息

目的:本研究检测miR-381-3p在宫颈癌中的表达情况,探索其对宫颈癌细胞增殖和迁移等生物学过程中的影响,阐明miR-381-3p其在宫颈癌发病中的分子机制,为宫颈癌的治疗提供新的理论依据和思路。方法:利用GEO数据库筛选差异基因,通过定量实时PCR检测miR-381-3p的表达水平。通过慢病毒感染构建稳定过表达miR-381-3p表达细胞系和对照细胞系。进行细胞增殖、细胞迁移、侵袭实验和蛋白印迹实验,检测miR-381-3p的体外生物学功能。利用生物信息学数据库预测miR-381-3p靶基因并采用双荧光素酶报告系统验证基因的直接靶向关系。Western blot验证靶基因fgf7蛋白水平的表达。集落形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Transwell迁移/侵袭实验最终检测miR-381-3p和fgf7对细胞迁移和侵袭的影响。结果:宫颈癌组织中miR-381-3p的表达水平低于其相邻的非肿瘤组织。miR-381-3p表达水平的降低可促进宫颈癌细胞增殖,上皮间质转化以及肿瘤细胞的转移。此外,MiR-381-3p表达水平的降低可以明显上调fgf7的表达,证明MiR-381-3p和fgf7有直接的靶向关系。miR-381-3p通过抑制fgf7蛋白的表达,进而抑制细胞增殖、迁移和侵袭,使细胞周期阻滞或促进细胞凋亡。结论:MiR-381-3p通过直接靶向抑制fgf7,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期以及促进凋亡。miR-381-3p可能成为治疗宫颈癌的新型治疗靶点。

关键词：宫颈癌 miR-381-3p fgf7 增殖转移

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Effect of mammogenic hormones on the expression of dfgf7, fgf10 and their receptor in mouse mammary gland

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Science China(Life Sciences) 2008年第8期51卷 711-717页

作者： CUI YingJun & LI QingZhang Key Laboratory of Dairy Science of Education Ministry, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China

To investigate the regulation of estrogen, progesterone and prolactin stimulating the development of mammary gland, the Kunming mice were used as experimental animals in this *** the ex-periment in vitro, the effect of mammogenic hormones were systematically investigated on expression of fgf7 and fgf10 and their receptor in different *** results are as follows:in mammary glands of mice, 17 beta-estradiol increased the expression of fgf7;progesterone did not affect the expression of fgf7;prolactin up-regulated the expression of fgf7 significantly in pregnancy and lac-tation.17 beta-estradiol increased the expression of fgf10;progesterone and prolactin reduced the expression of fgf10 significantly in virgin;prolactin significantly increased the expression of fgf10 in *** 17 beta-estradiol in the body was in relatively high proportion, it would lower the ex-pression of KGFR;while 17 beta-estradiol in the body was in relatively low proportion, it would increase the expression of *** concentration of progesterone increased the expression of KGFR and high progesterone did not affect the expression of *** increased the expression of KGFR significantly in pregnancy and lactation.

关键词： fgf7 fgf10 KGFR hormones mammary gland

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金鱼背鳍发育相关基因筛选及其在胚胎发育中的功能研究

金鱼背鳍发育相关基因筛选及其在胚胎发育中的功能研究

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作者：严鑫扬州大学

学位级别：硕士

鱼鳍分为奇鳍和偶鳍,其中偶鳍沿鱼类躯体两侧成对分布,包括胸鳍和腹鳍;奇鳍沿着身体正中线生长,包括背鳍、尾鳍、臀鳍等。在进化史上,奇鳍早于偶鳍出现,两者拥有相似的形态学特征。研究发现,鱼类偶鳍与四足动物的四肢同源,相关基因如fgf... 详细信息

鱼鳍分为奇鳍和偶鳍,其中偶鳍沿鱼类躯体两侧成对分布,包括胸鳍和腹鳍;奇鳍沿着身体正中线生长,包括背鳍、尾鳍、臀鳍等。在进化史上,奇鳍早于偶鳍出现,两者拥有相似的形态学特征。研究发现,鱼类偶鳍与四足动物的四肢同源,相关基因如fgf、Wnt和Hox等在两者的发育过程中具有相似的表达模式和功能。尽管偶鳍的发育生物学研究已相对清楚,但其起源仍是一个谜。目前,偶鳍起源有以下三种假说:鳃弓起源、鳍褶起源以及奇鳍遗传模式模块共同选择起源。青鳉（Oryziaslatipes）中的最新研究显示,一个保守的SHH基因顺式作用元件（ZRS增强子）既参与胸鳍的发育也对背鳍发育有重要影响,这成为支持偶鳍与奇鳍具有相同发育起源的最新证据。这提示,进一步研究鱼类背鳍的发育机制不仅可为鱼类附肢发育提供新的内涵也有助于进一步揭示偶鳍的进化起源。鉴于金鱼（Carassius auratus）中同时存在有背鳍和无背鳍的品种,是研究鱼类背鳍发育的理想材料。本研究首先对文种金鱼琉金（Ryukin）和蛋种金鱼望天（Celestial）的胚胎发育过程进行了观察和比较,进而通过全长转录组测序和比较转录组分析,筛选了若干文种和蛋种金鱼特有的转录本和差异表达基因,在此基础上对XXIV型胶原蛋白α1（col24a1）、成纤维细胞生长因子7（fgf7）及其受体（fgfr2）在文种琉金、蛋种望天和草种草金三种金鱼胚胎发育过程中的表达模式和功能进行了初步研究,主要研究结果如下:1.蛋种金鱼背鳍不发育的根本原因是背鳍褶不发育。对文种金鱼琉金和蛋种金鱼望天分别进行人工授精,并置24摄氏度环境下进行孵化,根据草种金鱼的胚胎发育和胚后发育分期和时间进行显微观察和拍照。比较发现,琉金和望天的胚胎发育速率与草金相当,各发育阶段的特征也十分一致,但望天背鳍褶的发育与草金和琉金完全不同。琉金胚胎发育至视泡闭合期（OVC期）时,奇鳍褶从尾部向背部延展,并最终止于第8体节处;望天胚胎发育至OVC时期,奇鳍褶并不向背部延展,而是仅终止于尾部第22体节处。在之后的胚胎发育过程中,琉金背鳍褶在背鳍条形成后逐渐消失,望天背鳍褶和背鳍条均始终未见发育。因此,我们推测金鱼背鳍发育的前提是背鳍褶发育,蛋种金鱼背鳍丢失的根本原因可能是某些基因发生突变导致背鳍褶不能正常发育所致。2.全长转录组测序为金鱼胚胎发育生物学研究提供了海量的基因转录本序列资源。在琉金和望天胚胎发育显微观察的基础上,分别取琉金和望天的受精卵、14体节期和35%OVC期胚胎提取总RNA并等量混合,利用PacBio Sequl平台进行全长转录组测序。经聚类去冗余和校正,琉金和望天分别测序产生了 122576和117201条一致序列,且均有超过95%的一致序列比对到参考基因组上。在此基础上,进一步进行校正、聚类去冗余得到54106和54218条高质量同源异构体,其中超过90%的异构体为已知基因的新转录本或来自新基因。琉金和望天共有异构体仅占各自异构体数量的28%,大部分异构体为两品种所特有。这一方面与PacBio Sequl平台测序的饱和度不足有关,但也反映出琉金和望天之间存在大量的转录本序列差异。与参考基因组已注释转录本相比,全长转录组测序得到的转录本序列长度更长、结构更完整,并且预测了大量的可变剪切事件和可变多聚腺苷酸化位点。这为金鱼胚胎发育生物学研究提供了十分有价值的基因转录本序列资源。3.比较转录组分析鉴定了琉金和望天胚胎发育同一时期的差异表达基因。根据皮尔逊相关系数分析后发现,同一品种同一时期的重复间相关性极高,不同品种的同一时期间相关性也很高,但同一品种的不同时期的相关性却很低,这说明大量基因随着金鱼胚胎发育过程而存在时序性表达。同一发育阶段,琉金和望天间存在大量差异表达基因,如合子期望天相比于琉金有3339个基因表达上调,3306个基因表达下调;在35%视泡闭合期望天相比于琉金有1643个基因表达上调,3162个基因表达下调。富集分析未见显著富集的GO条目（P＞0.05）,但在代谢过程、细胞外基质（ECM）受体相互作用等多个通路显著富集（P＜0.05）。鉴于ECM在细胞的迁移转化中发挥重要作用,我们对ECM中的差异表达基因进行了进一步研究。Col24a1基因和fgf7及其受体fgfr2可能在背鳍褶发育中发挥重要作用。金鱼中至少存在3个XXIV型胶原蛋白α1链基因（col24a1）,本文中分别记为col24a1-1、col24a1-2和col/4a1-3。序列比较显示,3个col24a1基因在序列上存在较大区别。通过核心克隆和序列末端快速扩增（RACE）分别获得2188bp、2920bp和800bp的基因片段。在琉金、望天和草金中col24a1-1和col24a1-2的表达水平较高,而col24a1-3的表达水平较低,且col24a1-1主要在

关键词：金鱼背鳍褶发育转录组分析 col24a1 fgf7

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