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fadv-4感染对SPF鸡血清生化指标的影响

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家畜生态学报 2022年第6期43卷 71-75页

作者：张桂枝赵晓阳李新正张晓战靳双星河南牧业经济学院河南郑州450046 河南省家禽疾病防控工程技术研究中心河南郑州450046

由Ⅰ群禽腺病毒C种4型(fadv-4)引起的鸡安卡拉病是近年来在中国广泛流行的一种急性、烈性传染病。为了解fadv-4感染对鸡血清生化指标的影响,将分离鉴定的fadv-4肝病毒液接种于易感日龄SPF鸡复制病理模型,同时设立对照,观察临床症状和病... 详细信息

由Ⅰ群禽腺病毒C种4型(fadv-4)引起的鸡安卡拉病是近年来在中国广泛流行的一种急性、烈性传染病。为了解fadv-4感染对鸡血清生化指标的影响,将分离鉴定的fadv-4肝病毒液接种于易感日龄SPF鸡复制病理模型,同时设立对照,观察临床症状和病理变化,采集血液测定血清生化指标。结果表明:感染组与对照组相比,血液中总胆红素、直接胆红素、间接胆红素均极显著升高(Pfadv-4感染可引起鸡肝功能、肾功能受损,导致血清生化指标发生明显变化。

关键词：鸡 fadv-4 血清生化指标

fadv-4 pcDNA3.1-Fiber2-IL2重组质粒的构建及其免疫效果的初步评价

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FAdV-4 pcDNA3.1-Fiber2-IL2重组质粒的构建及其免疫效果的初步评...

作者：张晓欢沈阳农业大学

学位级别：硕士

禽腺病毒(Fowl Adenovirus)是禽类病毒中最常见的其中一种,其中由血清4型禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotype 4,fadv-4)感染所引起的禽心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-Hepatitis Syndrome,HHS)主要以肝脏发黄肿胀,心包内积聚大量黄色透明状积液为主要特征,对我国的禽类养殖业造成严重的危害,经济损失严重。该病首发于1987年巴基斯坦的安卡拉地区,因此该病又叫禽安卡拉病。禽安卡拉病于2015年在我国呈大面积的爆发并开始流行,对3-6周龄的雏鸡容易造成感染,死淘率最高可达80%。开发安全有效的药物和疫苗来预防该病是非常迫切的,Fiber2蛋白是fadv-4的主要结构蛋白之一,被认为是一种保护性免疫原,能够诱导产生中和抗体。DNA疫苗通常需要佐剂来提高递呈效率。本试验以Fiber2基因为研究对象,并加入鸡细胞因子IL-2作为基因佐剂,构建pc DNA3.1-Fiber2重组质粒,pc DNA3.1-IL2重组质粒,pc DN A3.1-Fiber2IL2重组质粒。将重组质粒分组对雏鸡进行免疫,探究它的免疫效果,为研制安全有效的安卡拉病疫苗提供初步的理论依据。结果如下:1.以本实验室新分离的新宾株肝组织DNA和鸡脾组织c DNA为模板,根据Gen Bank上fadv-4 Fiber2基因、鸡IL-2基因序列设计引物,将Fiber2基因、IL-2基因以及Fiber2-IL2融合基因进行PCR扩增,扩增后将纯化的目的基因插入到克隆载体中,最后连接到pc DNA3.1真核表达载体里构建成重组质粒。对重组质粒进行PCR验证、HindⅢ和XbaⅠ双酶切鉴定、测序验证,显示pc DNA3.1-Fiber2重组质粒,pc DNA3.1-IL2重组质粒,pc DNA3.1-Fiber2IL2重组质粒构建成功。2.将上述已构建好的重组质粒对35只健康SPF雏鸡于14日龄进行分组免疫。通过ELISA方法检测免疫前、后SPF雏鸡血清中fadv-4抗体水平、以及白细胞介素6(IL-6)和干扰素γ(IFN-γ)含量,进而对构建的重组质粒进行免疫效果的初步评价。试验结果显示,重组质粒分组免疫雏鸡后,均能够诱导机体产生fadv-4抗体,刺激机体内IFN-γ、IL-6含量升高。细胞因子IL-2作为基因佐剂能提高pc DNA3.1-Fiber2重组质粒免疫效果。在fadv-4抗体水平方面比较,pc DNA3.1-Fiber2重组质粒和pc DNA3.1-IL2重组质粒混合免疫与pc DNA3.1-Fiber2IL2重组融合质粒的免疫效果相比差异不显著。从提高机体内细胞因子含量以及免疫剂量与成本控制方面相比,pc DNA3.1-Fiber2IL2融合重组质粒要优于pc DNA3.1-Fibe-r2与pc DNA3.1-IL2混合免疫重组质粒。综上,以fadv-4 Fiber2为目的基因构建的重组质粒可以诱导机体产生fadv-4抗体,并刺激机体内IFN-γ、IL-6含量升高。细胞因子IL-2作为基因佐剂可以显著增强Fiber2基因重组质粒免疫效果。

关键词： fadv-4 Fiber2基因重组质粒免疫效果

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fadv-4致鸡胚肝脏炎症损伤的研究

FAdV-4致鸡胚肝脏炎症损伤的研究

作者：王珊珊沈阳农业大学

学位级别：硕士

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,fadv-4)为禽类安卡拉病的病原,该病毒感染家禽后会引起心包积液—肝炎综合征(HHS)。fadv-4侵袭的主要靶器官是肝脏,可引起肝细胞的变性和坏死,及嗜碱性核内或胞浆内包涵体。目前对fadv-4的... 详细信息

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,fadv-4)为禽类安卡拉病的病原,该病毒感染家禽后会引起心包积液—肝炎综合征(HHS)。fadv-4侵袭的主要靶器官是肝脏,可引起肝细胞的变性和坏死,及嗜碱性核内或胞浆内包涵体。目前对fadv-4的研究主要集中于fadv-4病原学及预防免疫学等方面,而鲜有fadv-4致鸡胚肝脏炎症损伤的相关研究。本试验将fadv-4接种11日龄SPF鸡胚,于感染后第7 d剖取肝脏,制备病理切片,观察鸡胚感染fadv-4后肝脏的病理变化;并通过qRT-PCR方法检测炎性细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ)及TLRs/NF-κB信号通路相关细胞因子(TLR2、TLR3、TLR4、p65、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12α、IL-12β)mRNA的表达量,以明确fadv-4感染后致鸡胚肝脏炎症损伤相关基因表达水平的变化,并探索肝脏损伤与炎症相关因子表达之间的关系。本试验结果显示:1.将病毒滴度为10TCID/0.1 ml的fadv-4以0.2 ml每只的剂量,接种于11日龄SPF鸡胚的尿囊腔,每日照蛋观察鸡胚生命体征,接种后第7d从培养箱中取出,4℃过夜,并于第二日从蛋壳中取出鸡胚胎,剖检观察肝脏的眼观病理变化。剖检可见感染fadv-4后,鸡胚肝脏肿大,边缘钝圆,质地变脆易碎,色泽变淡,呈土黄色,表面偶见淤血及出血。镜检可见,肝索排列紊乱,肝细胞肿大,呈现空泡变性,有些发生坏死,肝脏细胞中可见嗜碱性包涵体;肝小叶中心的中央静脉及肝窦红细胞增多;枯否氏细胞也增多。2.采用qRT-PCR方法检测fadv-4感染鸡胚后肝脏中炎症相关细胞因子mRNA的表达水平。结果表明,感染fadv-4后鸡胚肝脏中促炎因子IFN-γ表达量上调;抗炎因子IL-4表达量下降,IL-10表达量上调;趋化因子IL-2表达量下降,且与对照组相比差异性均为极显著(Pfadv-4感染鸡胚肝脏后,引起肝脏发生炎症反应,并导致相关炎症细胞因子的表达产生变化。3.为了进一步探索NF-κB炎症信号通路在fadv-4感染鸡胚过程中的作用,采用qRT-PCR方法检测fadv-4感染鸡胚后肝脏中NF-κB炎症信号通路相关基因mRNA的表达水平。结果表明,感染fadv-4后鸡胚肝脏中TLR3、TLR4表达量上调,且与对照组相比差异性均为极显著(Pfadv-4可激活鸡胚肝细胞中的TLR4及TLR3的表达,介导NF-κB炎症信号通路的活化,促进促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子IL-8、IL-12α、IL-12β的表达量增多,促使血管通透性增加,血管内皮肿胀,造成淤血,坏死等,促进炎症的发生及发展。综上所述,鸡胚感染fadv-4后,肝脏发生实质性肝炎病变,肝组织中的多种炎性细胞因子表达发生变化,其中NF-κB炎症信号通路也被活化,介导产生的大量的炎性细胞因子,诱发肝脏的炎症反应,导致鸡胚肝脏的炎症损伤。本研究为开展细胞因子对症疗法提供了理论依据,若能在治疗过程中减少炎性细胞因子的释放,则能有效地改善fadv-4致肝炎的损伤作用,从而保护肝脏,减少因肝损伤而导致的死亡。

关键词： fadv-4 SPF鸡胚肝脏炎症损伤

fadv-4抚顺分离株对SPF鸡胚肝组织氧化损伤的研究

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FAdV-4抚顺分离株对SPF鸡胚肝组织氧化损伤的研究

作者：崔鹤沈阳农业大学

学位级别：硕士

禽心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)是由血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,fadv-4)引起的禽高度接触性传染病。该病1987年首次在巴基斯坦安哥拉地区爆发,因此又称为禽“安卡拉病”,目前该病在... 详细信息

禽心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)是由血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,fadv-4)引起的禽高度接触性传染病。该病1987年首次在巴基斯坦安哥拉地区爆发,因此又称为禽“安卡拉病”,目前该病在匈牙利、印度、美国、巴西、波兰等多国均曾发生。fadv-4感染能够引发机体免疫抑制,导致其他疾病继发感染性增强。家禽感染后,以心包积液和肝脏坏死为主要病理变化,但是目前关于fadv-4对禽类肝组织氧化损伤的影响尚不明确。本试验将探讨fadv-4对SPF鸡胚肝组织造成的氧化损伤情况。本研究利用实验室保存的fadv-4抚顺株,接种11日龄SPF鸡胚尿囊腔,感染7d后剖检,观察其损伤情况,同时采取鸡胚肝组织。一部肝组织用10%福尔马林固定,制作石蜡切片,HE染色后进行组织病理学观察;另一部分肝组织,用于肝组织氧化损伤研究:一是肝组织氧化损伤相关指标:利用试剂盒检测鸡胚肝脏中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;二是探讨肝组织氧化损伤Nrf2/HO-1通路:运用荧光定量PCR方法检测Nrf2、HO-1的mRNA水平;采用蛋白免疫印迹技术判断肝细胞中细胞浆、细胞核内Nrf2蛋白表达情况,从而探讨fadv-4对SPF鸡胚肝脏氧化损伤机理。结果:鸡胚感染fadv-4后可见鸡胚发育迟缓,剖检可见肝脏呈现黄绿色,表面有出血斑点。组织病理学结果显示,感染鸡胚肝细胞发生严重的水泡变性,细胞核碎裂、溶解,中央静脉和窦状隙扩张,充满大量红细胞。与对照组相比,试验组MDA含量极显著升高(pfadv-4能够破坏鸡胚肝脏氧化还原稳态。细胞浆中Nrf2蛋白表达量显著下降(pfadv-4能够激活Nrf2,发生了核转位,但抑制了肝细胞中Nrf2/HO-1通路关键因子Nrf2和HO-1的表达。综上所述,SPF鸡胚感染抚顺株fadv-4后,能够引起明显眼观病理变化和组织病理学损伤,并诱发肝脏发生氧化损伤反应。Nrf2/HO-1通路中关键因子的表达情况表明,fadv-4可能通过下调Nrf2/HO-1通路,从而诱导SPF鸡胚肝脏发生氧化损伤。本试验结果为揭示fadv-4感染SPF鸡胚肝组织氧化损伤的机制提供了理论依据,同时为有效防治心包积液-肝炎综合征、针对Nrf2/HO-1通路中关键分子药物的研发奠定了基础。

关键词： SPF鸡胚 fadv-4 肝脏氧化损伤

麻黄鸡ALV-J、fadv-4、FWPV混合感染的诊断

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中国兽医杂志 2022年第3期58卷 82-87页

作者：张小波温贵兰张喜懿陈广刘蔓蔓胡璇孙芸贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州贵阳550025

为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(fadv-4)的PCR检测。... 详细信息

为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(fadv-4)的PCR检测。结果显示:实验室剖检可见病鸡存在鸡冠痘状结痂、肝脏肿瘤结节、心包积液、脾脏肿大等症状;细菌分离培养无菌落形成;基于ALV-J gp85、fadv-4 penton、FWPV TK基因片段的PCR检测均呈阳性;随后的ALV-J gp85、fadv-4 penton、FWPV TK基因克隆及序列分析进一步揭示了3种病毒的遗传进化状况。因此,送检病鸡确诊为ALV-J、fadv-4、FWPV混合感染,依据确诊结果向有关养殖场提出了合理的防治措施建议。

关键词：麻黄鸡 ALV-J fadv-4 FWPV 混合感染 PCR检测

fadv-4和fadv-8b分离株感染致病性比较病理学研究

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FAdV-4和FAdV-8b分离株感染致病性比较病理学研究

作者：孙芹芹山东农业大学

学位级别：硕士

禽腺病毒(fowl adenovirus,fadv)是一种无囊膜的双股DNA病毒,属于腺病毒科(Adenoviridae)禽腺病毒属(Aviadenovirus),根据抗原性的差异,被分为3个群(fadv-Ⅰ),其中Ⅰ群禽腺病毒fadv-A又分为5个亚群(A)、12个血清型(fadv-1至11,其中fadv-8分为a和b两型),fadv-Ⅰ可引起鸡的心包积液综合征(Hydropericardium syndrome,HPS)和包涵体肝炎(Inclusion body hepatitis,IBH)。HPS由血清4型禽腺病毒(fadv-4)感染所致,IBH可由fadv-8b、fadv-7和fadv-11多种血清型fadv引起。HPS与IBH患病鸡的肝脏均表现出血性坏死和核内包涵体形成,两者肝脏病变性质相同,但只有HPS发生鸡心包积液病变并造成发病鸡急性死亡。2015年HPS在中国突然大面积爆发流行,发病鸡群表现20%0%的死亡率,给养禽业带来了巨大的经济损失。为了探究HPS和IBH致病性的异同,本研究拟对本实验室分离的fadv-4和fadv-8b两血清型fadv的感染致病性进行比较,通过体内外感染试验,对病毒增殖、炎症因子mRNA表达水平和器官、细胞的损伤性反应等进行差异性比较病理学研究。体内感染实验表明,两种病毒分别通过颈部皮下感染SPF雏鸡,两组感染鸡的临床表现、病毒复制能力、病理学变化等方面有所不同,fadv-4感染雏鸡表现明显的精神萎靡并发生急性死亡,死亡率达60%;fadv-8b感染组雏鸡仅表现精神沉郁;通过剖检可以看出fadv-4引起雏鸡心包腔内胶胨样积液,肝脏斑点状出血、点状坏死,肺脏、脾脏、肾脏、胰腺等器官组织都有不同程度的水肿现象;fadv-8b感染雏鸡肝脏斑点状出血、点状坏死,但未表现出心包积液病变及广泛性器官组织水肿。病理组织学观察发现,fadv-4和fadv-8b均可以引起雏鸡肾脏、胰腺和十二指肠不同程度的炎症反应,法氏囊、胸腺以及脾脏淋巴细胞坏死减少;免疫组化检测发现,fadv-4和fadv-8b感染SPF雏鸡的肝脏均表现明显的阳性反应,见病变肝细胞核内棕黄色病毒粒子,但在心脏均未发现阳性病毒粒子;两病毒感染雏鸡的胸腺和法氏囊免疫器官指数前期均低于对照组,而后期免疫器官指数开始升高,在感染后期脾脏的免疫器官指数高于对照组。两病毒相比fadv-4分离株的致病性强于fadv-8b。体外感染实验表明,荧光定量检测发现两种病毒可以在肝细胞、鸡肝癌细胞大量复制,在心肌细胞内fadv-4少量增殖,fadv-8b的增殖效率极低。两种病毒都不能在心脏成纤维细胞内增殖;通过对Il1b、Tnfα、Il6和Il8细胞因子的mRNA的表达检测发现,两病毒均可以引起肝细胞、鸡肝癌细胞和心肌细胞不同程度的炎性反应,fadv-8b在肝细胞、鸡肝癌细胞引起上述四种细胞因子mRNA表达比较明显,fadv-4在心肌细胞引起较强的炎性反应;fadv-8b在血清中细胞因子含量比fadv-4感染组高,两病毒在心肌细胞和心脏成纤维细胞上清中细胞因子含量检测并没有较明显的差异。通过致病性比较研究显示,两病毒均能对肝脏鸡肝癌细胞具有较强的感染致病性,两者差异不大;fadv-4在心脏和CM中表现较强的感染致病能力。

关键词： fadv-4 fadv-8b 感染致病性

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鸭源fadv-4的分离鉴定与致病性分析

黑龙江畜牧兽医 2019年第4期 98-101页

作者：粟元文王怀禹魏玲南充职业技术学院南充637131

为了对疑似禽腺病毒Ⅰ亚群(fadv-4)感染病例进行确诊,并掌握致病原与流行毒株的基因差异性和致病性,试验采用病毒分离与胚体病变观察、血凝性测定、病毒含量测定、Hexon基因序列鉴定与遗传进化分析、致病性试验等方法对该病例分离的病... 详细信息

为了对疑似禽腺病毒Ⅰ亚群(fadv-4)感染病例进行确诊,并掌握致病原与流行毒株的基因差异性和致病性,试验采用病毒分离与胚体病变观察、血凝性测定、病毒含量测定、Hexon基因序列鉴定与遗传进化分析、致病性试验等方法对该病例分离的病毒进行了鉴定与致病性分析。结果表明:临床病料分离毒株SC株对1%鸡、鸭、鹅、猪红细胞均无凝集性,对SPF鸡胚和健康鸭胚的半数致死量(ELD_(50))分别为1×10^(-5.17)/0.1 mL和1×10^(-4.83)/0.1 mL,SC株Hexon基因序列与GenBank中近几年国内fadv-4流行毒株基因序列做遗传进化分析,分离毒株与国内近2年的fadv-4流行毒株处于同一个小分支中,与国外fadv-4流行毒株处于不同小分支中。SC株对10日龄、20日龄、30日龄SPF鸡的致死率分别为100%、70%、30%,对10日龄、20日龄、30日龄肉鸭的致死率分别为90%、50%、20%。说明SC株为国内近2年流行的fadv-4毒株,且国内fadv-4现流行毒株在遗传进化上具有自己的地域特点,SC株对不同日龄SPF鸡和鸭均具有一定的致病性,且日龄越小死亡率越高。

关键词：鸭 fadv-4 分离鉴定 Hexon基因致病性

fadv-8b分离鉴定与二价灭活疫苗（fadv-4+fadv-8b）初步研究

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FAdV-8b分离鉴定与二价灭活疫苗（FAdV-4+FAdV-8b）初步研究

作者：宋明珍河南农业大学

学位级别：硕士

禽腺病毒(Fowl aviadenovirus,fadv)属于腺病毒科腺病毒属。主要引起的疾病包括包涵体肝炎(Inclusion body hepatitis,IBH)、肝炎-心包积液综合征(Hepatitis-hydropericardium syndrome,HHS)和肌胃糜烂(Gizzard erosions,GE)。禽腺病毒4型(fadv-4)和禽腺病毒8b型(fadv-8b)分别是引起鸡肝炎-心包积液综合征(HHS)和包涵体肝炎(IBH)的主要病原。流行病学资料显示,自2015年以来HHS和IBH在我国的流行呈现日益严重的趋势,而且fadv-4和fadv-8b混合感染在临床中经常被报道。目前我国尚没有同时防控fadv-4导致的HHS和fadv-8b导致的IBH的多价疫苗,因此研制同时防控HHS和IBH的高效疫苗具有重要意义。本研究从山东某养殖场疑似患包涵体肝炎鸡群肝脏病料中分离到一株fadv-8b毒株,采用高通量测序获得其全基因组序列,并进行了遗传进化分析;对fadv-8b在SPF鸡胚以及雏鸡中的致病性进行了研究;针对目前我国尚没有同时防控HHS和IBH的二价疫苗,本研究利用反向遗传技术将fadv-4的Fiber 1替换为fadv-8b的Fiber,构建表达fadv-8b Fiber蛋白的重组嵌合病毒r fadv-4-Fiber/8b,对基于r fadv-4-Fiber/8b的灭活疫苗的免疫原性与免疫效力进行综合评价。以期为控制和预防HHS和IBH的二价疫苗以及相关疫苗研制奠定基础。1.禽腺病毒8b型毒株分离鉴定及遗传进化分析2021年山东省某养殖集团疑似暴发了包涵体肝炎(IBH),发病鸡临床症状表现为精神沉郁、被毛粗乱,剖检可见病鸡的肝脏肿大出血,呈土黄色。鸡群病死率高达20%。为了明确导致此次疫情的病原,本研究采集患有包涵体肝炎鸡的肝脏组织,经过PCR检测确定病料为fadv-8b阳性样品,使用鸡肝癌细胞(LMH)进行病毒的分离,成功分离到1株fadv-8b中国流行株,命名为CH/SDQD/2021;随后进行病毒基因组高通量测序,通过MEGA7.0软件和Meg Align软件完成同源性以及遗传进化分析,结果显示分离株的基因组全长为44000 bp,G+C含量为58%,共编码32个开放阅读框,fadv-8b分离株CH/SDQD/2021与fadv-E毒株同源性在93.4%-98.9%之间,与2020年中国分离株He B20同源性最高,为98.9%,表明毒株CH/SDQD/2021与我国fadv-8b的流行株具有相同的起源,但存在多样性,该毒株的分离为我国IBH流行情况调查以及相关疫苗研发提供基础。***-8b分离株CH/SDQD/2021的体外增殖和致病性研究为了探究fadv-8b型毒株CH/SDQD/2021在鸡肝癌细胞系(LMH)上的增殖规律以及对易感鸡的致病性,将fadv-8b分离株CH/SDQD/2021在LMH细胞上进行传代,测定病毒滴度为10TCID/100μL。通过对不同日龄的SPF鸡以及鸡胚接种不同剂量的病毒评估了该分离株的致病性。通过绒毛尿囊膜途径接种10TCID剂量病毒的10日龄鸡胚存活率为50%,接种10TCID剂量病毒的鸡胚存活率为30%;尿囊腔接种10TCID剂量病毒的鸡胚存活率为20%。1-2周龄雏鸡感染病毒24h后开始出现精神沉郁、食欲减退等临床症状,1周龄SPF鸡经肌肉注射途径接种两种剂量的fadv-8b病毒存活率均为零。2周龄SPF鸡经肌肉注射途径接种10TCID病毒的存活率为90%;接种10TCID病毒的鸡存活率为30%。病毒感染鸡与鸡胚剖检均可见IBH典型病变,如肝脏易碎、黄疸、肿大、表面有白色坏死灶,肾脏肿大且伴有尿酸盐沉积。病理组织学结果显示肝细胞发生了核碎裂,肝细胞空泡样变性,肾小球肿胀有出血,肾小管水肿,空白对照组则没有发现明显组织学变化。3.表达fadv-8b Fiber蛋白的重组fadv-4的构建与鉴定鉴于目前我国尚没有同时防控fadv-4导致的HHS和fadv-8b导致的IBH的多价疫苗,本研究利用反向遗传技术将fadv-4的Fiber 1替换为fadv-8b的Fiber,构建重组嵌合病毒r fadv-4-Fiber/8b,结果显示重组病毒可以稳定表达fadv-8b Fiber,重组病毒r fadv-4-Fiber/8b表现出与亲本fadv-4毒株相似的体外复制能力。r fadv-4-Fiber/8b的致病性研究表明,用fadv-8b Fiber取代fadv-4的Fiber 1并没有改变亲本毒株fadv-4的致病性。目前,对fadv-8b的感染机制缺乏研究,本研究结果显示使用fadv-8b Fiber替代fadv-4的Fiber 1对重组病毒在体外和体内的感染

关键词： fadv-4 fadv-8b 病毒分离鉴定包涵体肝炎肝炎-心包积液综合征二价疫苗

精氨酸对肉鸡生长性能、免疫功能及其抗fadv-4的研究

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精氨酸对肉鸡生长性能、免疫功能及其抗FAdV-4的研究

作者：林智鑫福建农林大学

学位级别：硕士

本研究共分为三个部分,旨在探索精氨酸水平对肉鸡生长性能和免疫功能的影响;肉鸡感染禽腺病毒I群4型（fowl adenovirus serotype4,fadv-4）对肝脏精氨酸代谢基因网络的影响,以及精氨酸抗fadv-4感染的机理研究。为精氨酸提高肉鸡机体免... 详细信息

本研究共分为三个部分,旨在探索精氨酸水平对肉鸡生长性能和免疫功能的影响;肉鸡感染禽腺病毒I群4型（fowl adenovirus serotype4,fadv-4）对肝脏精氨酸代谢基因网络的影响,以及精氨酸抗fadv-4感染的机理研究。为精氨酸提高肉鸡机体免疫功能和抗病毒能力的研究提供理论基础。试验一:精氨酸对肉鸡生长性能和免疫功能的影响选取1日龄罗斯（Ross）308公雏300只,随机分为5组,每组5个重复,每个重复12只。以中国鸡饲养标准NY/T33-2004推荐精氨酸量水平为100%（1-21日龄:1.20%,22-42日龄:1.12%）,设置5个日粮精氨酸水平,分别为精氨酸缺乏组（80%）、正常组（100%）和精氨酸增加量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组（120%、140%和160%）,试验期42 d。测定肉鸡生长性能、屠宰性能、免疫器官指数、血清免疫指标和肝脏i NOS m RNA表达水平。试验结果:1、与缺乏组相比,正常组、增加量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的1-21和1-42日龄F/G均显著降低（P42日龄ADFI、ADG均显著提高（P42日龄ADFI、ADG、F/G均无显著差异（P>0.05）。2、42日龄,与缺乏组相比,正常组、增加量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的半净膛率、胸肌率和腿肌率均显著提高（P0.05）。3、与缺乏组相比,正常组、增加量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的21和42日龄脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数均显著提高（P42日龄胸腺指数均显著提高（P4、与缺乏组相比,正常组、增加量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的21日龄血清GLO、Ig A、Ig M、Ig G和42日龄血清TP、GLO、Ig A、Ig M、Ig G、G/A均显著提高（P42日龄血清Ig M显著提高（P42日龄血清Ig A、Ig G水平均显著提高（P42日龄血清ALB、GLO均显著提高（P42日龄血清IL-6、IFN-γ、i NOS、NO均显著提高（P42日龄血清IL-6、i NOS、NO均显著提高（P42日龄血清TNF-α均显著提高（P42日龄血清IFN-γ均显著提高（P42日龄肝脏i NOS m RNA表达水平均显著提高（P42日龄肝脏i NOS m RNA表达水平均显著提高（Pfadv-4对肝脏精氨酸代谢通路的影响18只21日龄健康的SPF（specific-pathogen-free）雏鸡,随机分为试验组和对照组。试验组肌肉注射0.2 m L fadv-4 NP毒株(tissue culture infected dose 50%[TCID]=10/0.01 m L),对照组注射相同体积的无菌生理盐水。感染2 d后,扑杀,无菌条件下收集肝脏,进行转录组测序,筛选受fadv-4感染和未感染小鸡肝脏中的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,通过KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）分析感染fadv-4的肝脏中精氨酸代谢途径有关的基因网络的富集。试验结果:在肝脏精氨酸代谢途径中获得38个显著性富集DEGs。感染fadv-4的肝脏与对照组相比,其中有10个基因被下调,8个基因被上调。通过q PCR检测肝脏DEGs的m RNA水平与KEGG分析数据一致试验三:精氨酸抗fadv-4感染的机理研究首先通过si-RNA沉默LMH细胞的i NOS和ARG 2基因的表达,研究fadv-4复制与i NOS基因表达的关系。随后用5个精氨酸终浓度0、60、120、180和240μg/m L培养LMH细胞48 h后,fadv-4感染24 h,q PCR测定i NOS m RNA表达水平及病毒载量,研究

关键词：肉鸡精氨酸生长性能免疫功能转录组 fadv-4