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ApoA-Ⅰ模拟肽重组并包载丹参酮ⅡA的HDL纳米脂质体抗动脉粥样硬化研究

ApoA-Ⅰ模拟肽重组并包载丹参酮ⅡA的HDL纳米脂质体抗动脉粥样硬...

引用

作者：王丽兰州大学

学位级别：硕士

famp5(Fukuoka University apoA-I mimetic peptide type5)是一种由日本福冈大学合成的载脂蛋白apoA-I的模拟肽,研究表明famp5具有促进胆固醇外流和降低血管斑块面积的作用。丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TA)对冠状动脉血循环和血管内皮细... 详细信息

famp5(Fukuoka University apoA-I mimetic peptide type5)是一种由日本福冈大学合成的载脂蛋白apoA-I的模拟肽,研究表明famp5具有促进胆固醇外流和降低血管斑块面积的作用。丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TA)对冠状动脉血循环和血管内皮细胞具有一定的改善作用,具有抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用。但是由于TA在水中的溶解度低,半衰期短,生物利用度低等缺陷限制了它的临床应用。体外重组HDL能够有效的调节由高血脂引起的脂质代谢紊乱以及有效的预防、阻止和改善动脉粥样硬化,同时还能够作为药物载体,在脂质核心包载疏水性药物。本研究为了解决TA溶解度低的问题,以及载脂蛋白的提取繁杂、高成本和医源性感染等问题,采用短链的apoA-I模拟肽famp5替代载脂蛋白(apos),将水溶性差的TA包载到rHDL的脂质核心,设计合成了新型圆盘状的TA-d-rHDL和球状的TA-s-rHDL,并研究评估了其促进胆固醇的外流、降低血管斑块面积,和其生物相容性等性能。采用多肽固相合成及HPLC纯化制备成功获得了纯度达到91.22%的famp5和纯度达到92.26%的famp5-ACD。通过薄膜分散法和纳米沉淀/溶剂蒸发法制备了新型圆盘状的TA-d-rHDL和球状的TA-s-rHDL,并对rHDL的理化表征进行了测定。在透射电镜和扫描电镜下TA-d-rHDL和TA-s-rHDL大小均一,分布均匀,分别呈圆盘状和球状纳米颗粒。马尔文粒度仪测定的TA-s-rHDL的平均粒径为100nm,Zeta电位为-9.38,PDI为0.304。TA在TA-d-rHDL和TA-s-rHDL中的包封率分别为84.46±0.016%和80.35±0.06%。TA-d-rHDL和TA-s-rHDL中famp5的连接效率分别为60.88±0.92%和85.08±0.71%。稳定性实验显示:在2个月内,TA-L、TA-NLC、TA-d-rHDL和TA-s-rHDL的外观基本没有变化,TA在TA-d-rHDL和TA-s-rHDL中的包封率分别从84.46±0.016%和80.35±0.06%降到了81.76±0.122%和77.14±0.099%,没有明显变化,说明脂质体比较稳定。论文进行了TA-rHDL抗大鼠动脉粥样硬化作用研究。49只Wistar大鼠随机分为7组,分为正常组、模型组、TA+famp5组、TA-NLC组、s-rHDL组、低浓度TA-s-rHDL组和高浓度TA-s-rHDL组。除正常组,其他组每天定时定量灌胃高脂乳剂,并按时间腹腔注射VD,28天后按照分组分别给药30天。最后测定各组大鼠的血清以及肝脏组织的血脂和生化指标,观察肝脏和主动脉的病理切片。血清和肝脏的生化指标显示TA-s-rHDL具有降低TG、TC、LDL以及提高HDL的功效,并且具有一定的抗氧化作用,病理切片显示TA-s-rHDL具有一定的抗动脉粥样硬化和预防脂肪肝的作用。本研究将TA、famp5以及rHDL结合起来,创新性的将famp5替代apoA-I,使得rHDL既作为药物载体又发挥抗AS的疗效,还增大了TA进入体内发挥作用的剂量。结果显示,TA-s-rHDL抗AS的作用加倍,保肝作用更强。整体上发挥了多重功效,实现了安全、高效、简单、稳定的给药。本研究为促进疏水性的抗AS的药物递送进行了有益的探索研究。

关键词：纳米脂质体 HDL famp5 丹参酮ⅡA 抗动脉粥样硬化 rHDL

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