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山羊fam134b基因克隆、序列分析及其mRNA表达与肌内脂肪含量的相关性

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农业生物技术学报 2014年第10期22卷 1277-1285页

作者：朱武政江明锋唐璐王永西南民族大学生命科学与技术学院/青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室

fam134b基因对肌内脂肪沉积有重要的调控作用,为了进一步了解fam134b基因的结构与功能及其对山羊(Capra hirus)肉质的影响,本研究以川中黑山羊为实验动物,采用RT-PCR技术克隆了山羊fam134b基因,并对核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息... 详细信息

fam134b基因对肌内脂肪沉积有重要的调控作用,为了进一步了解fam134b基因的结构与功能及其对山羊(Capra hirus)肉质的影响,本研究以川中黑山羊为实验动物,采用RT-PCR技术克隆了山羊fam134b基因,并对核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息学分析,运用实时荧光定量PCR技术检测了fam134b mRNA的表达情况,对肌肉组织中fam134b mRNA表达与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量进行了关联分析。结果表明,山羊fam134b基因(Genbank登录号:KF684947.1)cDNA全长1 071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白序列含有4个N-连接的糖基化修饰位点,20多个磷酸化位点;系统进化树分析显示,山羊fam134b核苷酸序列与牛(bos taurus)的相似性最高;荧光定量PCR分析表明,fam134b在山羊的心、肝、脾、肺、肾、背最长肌和腿肌中均有表达,其中在肝脏的表达量最高,脾的表达量最低;相关分析显示:山羊背最长肌、腿肌中fam134b mRNA表达与肌内脂肪含量呈显著正相关。研究结果显示,fam134b基因可能对山羊肌内脂肪沉积起着重要的调控作用。本研究为进一步了解fam134b基因的功能及其在反刍动物IMF代谢中的作用和营养调控机制提供一定基础资料。

关键词：山羊 fam134b 克隆 mRNA 肌内脂肪(IMF)

基于数据挖掘分析fam134b在肝癌中的表达及其与预后的关系

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临床肝胆病杂志 2019年第11期35卷 2508-2512页

作者：钟蓝海马丹丹张智勇张翌蔡逊南方医科大学第一临床医学院广州510515 中国人民解放军中部战区总医院普通外科武汉430070

目的研究fam134b在肝癌组织中的表达情况,探讨其表达差异与临床病理特征以及预后生存的关系。方法挖掘Oncomine、Human Protein Atlas、TCGA和Kaplan Meier-Plotter数据库,分析fam134b在肝癌组织中的表达,并对表达量与临床病理特征以及... 详细信息

目的研究fam134b在肝癌组织中的表达情况,探讨其表达差异与临床病理特征以及预后生存的关系。方法挖掘Oncomine、Human Protein Atlas、TCGA和Kaplan Meier-Plotter数据库,分析fam134b在肝癌组织中的表达,并对表达量与临床病理特征以及预后生存的关系进行探讨。计数资料组间比较采用χ^2检验。fam134b表达与肝癌预后的关系采用Kaplan-Meier模型分析。结果正常组织中,fam134b在肾脏中表达量最高,肝脏居第9位,肿瘤组织中,其在肾癌组织表达最高,肝癌第11位。共147项有关fam134b表达差异的研究结果差异具有统计学意义,各种癌症中其表达差异不一致。其在肝癌组织中表达量较正常肝组织中低。fam134b蛋白定位于内质网,其表达量与肝癌患者发病年龄、肝硬化、AFP、人种、分化程度有相关性(P值均fam134b表达量与肝癌患者总生存率有关[风险比(HR)=0.67,95%可信区间(95%CI):0.47~0.95,P=0.026],且对亚洲人种预后有显著影响(HR=0.40,95%CI:0.22~0.74,P=0.003),但对白色人种影响不显著(HR=0.65,95%CI:0.40~1.05,P=0.076)。结论fam134b在不同癌症中表达不一致,在肝癌中低表达,蛋白定位于内质网,其低表达与肝癌部分恶性表型相关,且与患者总体生存率低有关。

关键词：肝肿瘤数据挖掘 fam134b 预后

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fam134b缺失通过内质网应激调控破骨细胞分化与功能的机制研究

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Fam134b缺失通过内质网应激调控破骨细胞分化与功能的机制研究

作者：姚艳延安大学

学位级别：硕士

目的:遗传性肢端骨质溶解是一种累及末端指/趾骨的骨质破坏性罕见疾病。病理特征表现为指/趾末节骨粗隆边缘呈半月状缺损,伴有骨质硬化。随着年龄增长,患者病情恶化加剧以截肢告一段落,然而这并不能从根本上治疗疾病解除患者痛苦,因此,... 详细信息

目的:遗传性肢端骨质溶解是一种累及末端指/趾骨的骨质破坏性罕见疾病。病理特征表现为指/趾末节骨粗隆边缘呈半月状缺损,伴有骨质硬化。随着年龄增长,患者病情恶化加剧以截肢告一段落,然而这并不能从根本上治疗疾病解除患者痛苦,因此,发现致病突变并进一步阐明其机制对遗传性肢端骨溶解早期诊断与合理治疗具有重要意义。本研究从一个从未报道过的遗传性肢端骨质溶解家系致病基因fam134b入手,研究fam134b在破骨细胞分化中的影响及其潜在分子机制,希望对骨丢失类疾病治疗提供可能的治疗策略。方法:1.通过感染腺病毒或转染si RNA的方法分别在RAW264.7细胞与人外周血CD14单核细胞中干扰fam134b的表达,进而诱导破骨细胞分化,采用TRAP染色与骨吸收实验评估破骨细胞分化情况,判断fam134b缺失对破骨细胞分化的影响。随后通过RT-PCR与western blot实验检测RANKL通路下游破骨细胞分化相关分子表达;2.通过RT-PCR与western blot实验检测破骨细胞内质网应激相关分子表达,确定内质网应激通路变化。3.通过RT-PCR与western blot实验检测TRPV4表达,并使用GSK2193874抑制TRPV4介导的Ca内流挽救过度破骨细胞生成与骨吸收,采用TRAP染色与骨吸收实验评估破骨细胞分化情况;4.在小鼠软骨细胞系ATDC5中感染腺病毒干扰fam134b表达,使用透射电镜观察内质网扩张,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:1.在RAW264.7细胞中下调fam134b表达后诱导破骨细胞生成,TRAP染色显示TRAP+多核破骨细胞生成增多,骨基质吸收实验显示骨吸收能力也相应增强。western bolt显示破骨细胞生成相关分子p-JNK、NFATc1与自噬关键分子LC3 A/b表达增高;***134b缺失后,内质网应激相关分子ATF6表达增高,而IRE1a与PERK表达无明显变化;***-fam134b组破骨细胞TRAP染色显示,TRAP+多核破骨细胞生成显著减少,骨基质吸收实验显示骨吸收能力也相应减弱;***134b缺失后诱导的破骨细胞中TRPV4表达显著增高,通过GSK2193874抑制TRPV4介导的Ca内流减少了sh-fam134b组的破骨细胞生成及其骨吸收能力;5.在ATDC5细胞中干扰fam134b表达,透射电镜观察到ATDC5细胞内质网扩张,流式细胞术显示早期凋亡细胞增加。结论:***134b基因在调控破骨细胞分化中具有重要作用,其缺失可通过激活JNK与自噬引起破骨细胞生成增多,骨吸收能力增强;***134b作为内质网自噬受体,其缺失可破骨细胞中引起ATF6介导的内质网应激,这在fam134b缺失的破骨细胞分化中具有重要作用;***4介导的Ca内流在fam134b缺失的破骨细胞分化中具有重要作用;4.使用GSK2193874药理学抑制TRPV4可挽救fam134b缺失所导致的破骨细胞分化增多,GSK2193874有望成为临床骨密度下降类相关疾病的治疗药物。***134b缺失可引起ATDC5细胞内质网应激与凋亡。

关键词： fam134b 破骨细胞 ATF6 TRPV4 内质网应激

fam134b对小鼠干细胞始发态到原始态转变的影响和调控机制

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Fam134b对小鼠干细胞始发态到原始态转变的影响和调控机制

作者：郑志鸿广州医科大学

学位级别：硕士

始发态干细胞主要指的是外胚层干细胞(Epiblasts stem cells,EpiSCs),具有一定的自我更新能力,但相比于原始态干细胞,始发态干细胞具有较低的分化潜能。始发态到原始态转变(Primed-Na(?)ve transition,PNT)是一个细胞命运转变的过程,始... 详细信息

始发态干细胞主要指的是外胚层干细胞(Epiblasts stem cells,EpiSCs),具有一定的自我更新能力,但相比于原始态干细胞,始发态干细胞具有较低的分化潜能。始发态到原始态转变(Primed-Na(?)ve transition,PNT)是一个细胞命运转变的过程,始发态干细胞转变为应用前景广泛的原始态干细胞,可用于疾病模型的建立、药物开发、细胞治疗等,有望促进再生医学的发展。在以往的细胞命运转变研究中,大多关注于线粒体,然而内质网相关蛋白在细胞命运转变过程中的功能研究还鲜有报道。关于PNT与内质网之间的关系研究还不全面,其中fam134b(family with sequence similarity 134 member b)是内质网的跨膜蛋白,能够调节内质网、高尔基体、线粒体等重要细胞器的膜形态发生,进而维持细胞器的稳态。此外,有研究报道基于机器学习和生信分析预测fam134b可作为一个生物标记物来进行干细胞与非干细胞之间的区分,这暗示fam134b在干细胞里具有调控多能性的作用。因此,本研究主要关注fam134b对于始发态到原始态转变(PNT)这一命运转变过程是否具有影响,并探究其作用机制。本文以Tet-on-Klf4-EpiSC的诱导PNT体系作为研究模型,探索fam134b在PNT过程中所起到的作用及其调控机制。通过多四环素诱导PNT,进而诱导GFP克隆形成。统计GFP克隆数目和分析流式结果来量化PNT转变效率。借助q PCR来定量分析fam134b在PNT过程中多能性基因表达情况;RNA-seq对sh fam134b进行差异化分析和基因富集分析;蛋白免疫印迹实验(Western blot,Wb)检测多能性蛋白、未折叠蛋白反应(Unfolded Protein Response,UPR)通路蛋白以及H3组蛋白的乙酰化和甲基化水平。在诱导PNT后的第8天(Day 8,D8),通过qPCR检测fam134b的表达情况,发现诱导PNT之后,与未诱导PNT的第0天(Day 0,D0)相比,fam134b表达水平上升,说明fam134b可能参与PNT的调控;随后探索过表达fam134b是否会对PNT造成影响,构建过表达fam134b细胞系后诱导PNT,结果发现过表达fam134b能够明显减少PNT的GFP荧光克隆形成,并且q PCR检测结果表明,过表达fam134b后Na(?)ve阶段标志基因表达下调,而Primed阶段标志基因Nestin表达上调,此外Wb结果也表明Na(?)ve标志蛋白Nanog表达水平下调;与过表达fam134b相对应,通过sh RNA敲低fam134b构建细胞系后再诱导PNT,发现敲低fam134b能够有效提高GFP荧光克隆形成的效率,q PCR结果和Wb结果表明敲低fam134b促进Na(?)ve基因的表达,同时抑制Primed基因的表达;此外,我们发现敲低fam134b在诱导PNT的D2与对照组Scramble相比,更快一步形成GFP克隆,q PCR和Wb结果都表明敲低fam134b有利于PNT进程提前;为了进一步的探索fam134b调控PNT的机制,我们在敲低fam134b后诱导PNT的D8收取了RNA样品,然后进行转录组测序(RNA-seq)。RNA-seq分析结果也表明敲低fam134b后,调控多能性的通路基因被上调,其中包括TGF-β通路等。有研究报道fam134b参与细胞周期和细胞凋亡的调控。同时,在细胞培养过程中,显微镜下观察发现敲低fam134b后细胞数量与Scramble相比较少,为此我们检测了敲低fam134b之后,诱导PNT过程中细胞周期和细胞凋亡的变化。结果表明敲低fam134b在PNT中不影响细胞周期,对细胞凋亡也没有显著影响。这说明fam134b不是通过这两条途径来影响PNT的转变效率。结合RNA-seq的细胞组分的基因富集结果,发现敲低fam134b后,内质网腔内的组分表达水平上升。fam134b能够调控细胞器稳态,为此我们推测fam134b会影响内质网UPR(ER-UPR)和线粒体UPR(mt-UPR)。为此,我们通过Wb检测ERUPR和mt-UPR的标志蛋白水平。过表达fam134b在PNT后ER-UPR和mt-UPR标志蛋白水平下降;敲低fam134b引起ER-UPR和mt-UPR的标志蛋白表达上升,这些结果说明fam134b在PNT中影响了ER-UPR和mt-UPR。表明其可能是通过影响内质网-线粒体重塑和互作而影响了干细胞命运决定。另外,已有研究表明始发态干细胞与原始态干细胞在表观遗传水平上具有差异,为此我们检测了H3组蛋白的乙酰化和甲基化水平。过表达fam134b对H3K9和H3K27的乙酰化水平有下调作用,而对两者的甲基化水平没有影响;sh F

关键词： fam134b Primed-Na(?)ve transition ER-UPR mt-UPR 乙酰化甲基化

fam134b介导的内质网自噬导致线粒体相关凋亡在PE发病中的作用机制研究

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FAM134B介导的内质网自噬导致线粒体相关凋亡在PE发病中的作用机...

作者：王安迪重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:子痫前期的发病机制通常与胎盘氧化应激以及凋亡发生有关。本研究旨在明确胎盘组织以及滋养细胞中内质网自噬标记蛋白fam134b(family with sequence similarity 134,member b)的表达,并阐明其介导线粒体相关内质网膜中钙离子通道... 详细信息

目的:子痫前期的发病机制通常与胎盘氧化应激以及凋亡发生有关。本研究旨在明确胎盘组织以及滋养细胞中内质网自噬标记蛋白fam134b(family with sequence similarity 134,member b)的表达,并阐明其介导线粒体相关内质网膜中钙离子通道功能障碍导致线粒体相关凋亡在子痫前期(Preeclampsia,PE)发病机制中的作用。方法:收集2017年9月—2017年12月于重庆医科大学附属第一医院产科分娩的8例PE与8例正常剖宫产产妇的胎盘组织。应用蛋白印迹法方法验证fam134b介导的内质网自噬通过MAMs中的钙离子通道IP3R导致凋亡蛋白Cytochrome C在PE胎盘和正常胎盘中的表达差异;同时通过免疫组织化学法检测胎盘中fam134b,IP3R的阳性表达;使用早孕人绒毛外滋养细胞株(Human transformed primary extra villous trophoblast cell line,HTR8/SVneo),通过SNP(Sodium nitroprusside)构建PE细胞模型。使用免疫荧光法和激光共聚焦检测细胞fam134b于内质网中和IP3R在氧化应激状态下的表达;构建fam134b慢病毒转染细胞。使用蛋白印迹法检测在HTR8/SVneo细胞中沉默和过表达fam134b后对线粒体相关凋亡的影响;使用流式细胞仪检测正常组,fam134b敲低组,fam134b过表达组三组细胞的凋亡百分率。结果:蛋白印迹法结果显示,PE胎盘组织相比于正常胎盘,其内质网自噬蛋白fam134b,钙离子通道蛋白IP3R和线粒体凋亡蛋白Cytochrome C表达显著增加(pfam134b,IP3R和Cytochrome C蛋白表达显著高于正常HTR8/SVneo细胞(pfam134b后增加滋养细胞线粒体的凋亡(pfam134b介导的内质网自噬通过线粒体相关内质网膜导致细胞凋亡增加,引起滋养细胞的功能异常,从而参与PE的发生发展。本研究为临床PE的治疗提供了理论基础及潜在的治疗靶点。

关键词：内质网自噬 fam134b 线粒体相关内质网膜凋亡子痫前期

猪新基因fam134b基因对肌内脂肪沉积及其分子机理研究

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畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 162-163页

作者：袁章琴汪以真浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养学重点实验室农业部华东动物营养与饲料科学重点实验室浙江杭州310058

本试验通过猪肌内脂肪前体细胞培养模型的建立,结合RNAi技术和基因超表达技术等研究猪新基因pfam134b调控肌内脂肪沉积的分子机制。首先通过RNAi技术,构建并筛选获得了fam134b基因的有效siRNA表达载体fs1,经干扰条件优化。

关键词：肌内脂肪 fam134b 前体细胞培养模型分子机理研究基因对脂肪分解表达载体脂肪代谢脂肪细胞分化

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天府肉羊fam134b和A-FAbP基因克隆、序列分析及其肌内脂肪含量的相关性研究

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天府肉羊FAM134B和A-FABP基因克隆、序列分析及其肌内脂肪含量的...

作者：余俊旭四川农业大学

学位级别：硕士

fam134b和A-FAbP基因对肌内脂肪沉积有重要的调控作用,为了进一步探究fam134b和A-FAbP基因的结构功能及其表达量对山羊肉质的影响,本研究以天府肉羊为实验动物,采用RT-PCR技术克隆了天府肉羊fam134b和A-FAbP基因,并对氨基酸序列进行生... 详细信息

fam134b和A-FAbP基因对肌内脂肪沉积有重要的调控作用,为了进一步探究fam134b和A-FAbP基因的结构功能及其表达量对山羊肉质的影响,本研究以天府肉羊为实验动物,采用RT-PCR技术克隆了天府肉羊fam134b和A-FAbP基因,并对氨基酸序列进行生物信息学比对分析,运用实时荧光定量PCR技术检测了 fam134b和A-FAbP基因mRNA的表达情况,分别对不同肌肉组织中fam134b和A-FAbP基因表达量与肌内脂肪含量进行了关联分析。结果如下:1.获得天府肉羊fam134b基因和A-FAbP基因的编码区序列。fam134b基因序列长1071bp,编码356个氨基酸;A-FAbP基因序列长399bp,编码132个氨基酸,系统进化树分析表明天府肉羊fam134b和A-FAbP基因氨基酸序列分别和牛与绵羊的氨基酸序列有较强的相似度。2.通过采用RT-qPCR方法分析fam134b和A-FAbP基因在3、6与9月龄天府肉羊的8个肌肉组织中的表达量,结果显示fam134b和A-FAP基因在3、6与9月龄龄天府肉羊八个肌肉部位中均有表达,fam134b基因在9月龄天府肉羊背最长肌中相对表达水平最高,fam134b基因在各年龄阶段三角肌中相对表达水平最低;股二头肌中A-FAbP基因表达量变化受年龄的影响最大,其随着年龄的增长表达量随之增长,在9月龄天府肉羊股二头肌中相对表达量水平最高。3.采用残余法分析测定90、180和270日龄天府肉羊8个肌肉组织中肌内脂肪含量,结果表明,随着日龄的增长,肌内脂肪在半膜肌、腓肠肌和背最长肌中的含量逐渐升高,且9月龄天府肉羊的IMF含量极显著高于3月龄(Pfam134b和A-FAbP基因表达水平与IMF含量的相关性分析表明,在三个年龄阶段天府肉羊背最长肌中fam134b基因表达量与IMF含量表现为显著正相关(PbP基因的表达量与股二头肌中IMF含量表现为显著负相关(P<0.05,r=-0.657)。

关键词： fam134b A-FAbP 天府肉羊肌内脂肪IMF 相关性分析

Pannexin-1半通道开放诱导fam134b依赖性内质网自噬介导Apelin-13促H9C2和HL-1细胞肥大

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Pannexin-1半通道开放诱导FAM134B依赖性内质网自噬介导Apelin-13...

作者：张开南华大学

学位级别：硕士

目的:APJ受体蛋白作为一种七次跨膜的G蛋白偶联受体,与其内源性活性肽配体Apelin所形成的Apelin/APJ系统在心血管疾病的发生发展中起着重要的作用。实验室前期报道Apelin-13/APJ系统通过诱导内质网自噬途径促进心肌细胞肥大,此外Western... 详细信息

目的:APJ受体蛋白作为一种七次跨膜的G蛋白偶联受体,与其内源性活性肽配体Apelin所形成的Apelin/APJ系统在心血管疾病的发生发展中起着重要的作用。实验室前期报道Apelin-13/APJ系统通过诱导内质网自噬途径促进心肌细胞肥大,此外Western blot的结果发现,Apelin-13促进大鼠心肌细胞H9C2中Pannexin-1、fam134b、自噬蛋白LC3以及细胞肥大因子ANP、bNP的表达。本文拟采用大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1研究Apelin-13对Pannexin-1的蛋白水平、Pannexin-1半通道的开放、fam134b的水平、内质网自噬和心肌细胞肥大的作用,在前期基础上进一步验证Apelin-13能否通过影响Pannexin-1蛋白的表达,并激活Pannexin-1半通道从而诱导fam134b依赖性内质网自噬,作用于大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1致使细胞肥大,从而揭示Apelin-13/APJ系统在心血管疾病中的作用机制,为将APJ受体作为心肌肥厚治疗的靶标提供新的理论基础。方法:***干扰:设计干扰链SiRNA-fam134b抑制大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1中fam134b的表达;2.免疫荧光技术观察Apelin-13、APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid处理后大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1中Pannexin-1和fam134b的表达,以及内质网常驻蛋白KDEL与自噬标志蛋白LC3b的共定位、KDEL与溶酶体标志蛋白CD63的共定位、fam134b与自噬标志蛋白LC3的共定位;3.荧光染料定量检测技术观察Apelin-13、APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid处理后大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1中摄入荧光黄染料Lucifer yellow的水平;***试剂盒检测Apelin-13、APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid处理后大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1中胞内ATP的水平;5.免疫荧光技术观察Apelin-13、APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid、SiRNA-fam134b处理后大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1的细胞骨架大小;***细胞计数仪测量Apelin-13、APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid处理后小鼠心房肌细胞HL-1直径和体积变化;***蛋白定量试剂盒检测Apelin-13、APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid处理后大鼠心肌细胞H9C2和小鼠心房肌细胞HL-1中蛋白质的浓度。结果:1.免疫荧光结果显示Apelin-13促进H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞中Pannexin-1的表达,而APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid均抑制Apelin-13诱导的H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞中Pannexin-1的表达.2.免疫荧光结果显示Apelin-13促进H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞对Lucifer yellow的摄取,而APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid均逆转Apelin-13诱导的H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞对Lucifer yellow的摄取;***试剂盒结果显示Apelin-13降低H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞中ATP水平,而APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid均逆转Apelin-13降低的H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞中ATP水平;4.免疫荧光结果显示Apelin-13促进H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞中内质网常驻蛋白KDEL与自噬标志蛋白LC3b的共定位,而APJ受体拮抗剂F13A、Pannexin-1半通道抑制剂Carbrnoxolone和Probenecid均抑制Apelin-13诱导的H9C2大鼠心肌细胞和HL-1小鼠心房肌细胞中内质网常驻蛋白KDEL与自噬标志蛋白LC3b的共定位;5.免疫荧光结果显示Apelin-13促

关键词： Apelin-13/APJ Pannexin-1半通道 fam134b 内质网选择性自噬心肌细胞肥大

Pannexin1-fam134b依赖型内质网自噬介导apelin-13促心肌细胞肥大

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Pannexin1-FAM134B依赖型内质网自噬介导apelin-13促心肌细胞肥大

作者：黄仕芳南华大学

学位级别：硕士

目的:Apelin-13是G蛋白偶联受体APJ的内源性配体。Pannexin1为半通道缝隙连接蛋白,pannexin1与心衰等心血管疾病相关。fam134b是内质网自噬的感受体,是介导细胞中内质网自噬发生的关键受体。本研究主要探讨apelin-13诱导心肌细胞肥大的p... 详细信息

目的:Apelin-13是G蛋白偶联受体APJ的内源性配体。Pannexin1为半通道缝隙连接蛋白,pannexin1与心衰等心血管疾病相关。fam134b是内质网自噬的感受体,是介导细胞中内质网自噬发生的关键受体。本研究主要探讨apelin-13诱导心肌细胞肥大的pannexin1-fam134b依赖性内质网自噬调控机制。方法:1、Western blot:检测大鼠H9c2心肌细胞Pannexin1、fam134b、beclin-1、bNP、LC3II/I的表达;2、免疫组化观察人心肌肥厚（尸检）标本心脏组织标本中Apelin-13、Pannexin1、fam134b、beclin-1、LC3II/I的表达;3、si RNA干扰:设计小分子si RNA干扰链干扰H9c2心肌细胞中fam134b的表达;4、ScepterTM手持细胞计数器测量H9c2心肌细胞的直径和体积;5、bCA试剂盒测定H9c2心肌细胞中的蛋白含量。结果:1、Apelin-13呈剂量（0-1μmol/L,24h）依赖性促进H9c2细胞中pannexin1、fam134b、beclin-1和LC3II/I的表达;2、Apelin-13（1μmol/L）呈时间（0-24h）依赖性促进H9c2细胞中pannexin1、fam134b、beclin-1和LC3II/I的表达;3、APJ拮抗剂F13A（1μmol/L,24h）抑制apelin-13（1μmol/L,24h）对pannexin1、fam134b、beclin-1和LC3II/I的作用;4、Pannexin1抑制剂probenecid（200μmol/L,24h）抑制apelin-13（1μmol/L,24h）诱导的H9c2心肌细胞内pannexin1、fam134b、beclin-1和LC3II/I的表达;5、Pannexin1抑制剂carbenoxolone（10μmol/L,24h）抑制apelin-13（1μmol/L,24h）诱导的H9c2心肌细胞内pannexin1、fam134b、beclin-1和LC3II/I的表达;6、Pannexin1抑制剂probenecid（200μmol/L,96h）抑制apelin-13（1μmol/L,96h）诱导的H9c2心肌细胞直径、体积增大以及心肌肥大因子bNP的表达;7、Pannexin1抑制剂carbenoxolone（10μmol/L,96h）抑制apelin-13（1μmol/L,96h）诱导的H9c2心肌细胞直径、体积增大以及心肌肥大因子bNP的表达;8、si fam134b抑制apelin-13（1μmol/L,96h）诱导的H9c2心肌细胞直径、体积增大。9、bNP、apelin、APJ、pannexin1、fam134b、beclin-1和LC3II/I在人心肌肥厚心脏标本中高表达;结论:Pannexin1-fam134b依赖型内质网自噬介导apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞肥大。

关键词： Apelin-13 APJ Pannexin1 fam134b beclin-1 LC3II/I 心肌细胞肥大