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菌物学报 2022年第4期41卷 561-569页

作者：刘璐摇廖魏祖张恒高露娟李琳芸孙毅长江大学医学部湖北荆州434020 复旦大学附属中山医院皮肤科上海200032 复旦大学附属中山医院厦门医院皮肤科福建厦门361006 长江大学附属荆州医院检验科湖北荆州434020 长江大学附属荆州医院皮肤科湖北荆州434020

FAD结合的氧化还原酶编码基因fadb(GenBank ID:Afu4g14630)的编码产物在烟曲霉中为一种与FAD结合的氧化还原酶,可能参与真菌的呼吸。为了探究其具体功能,本研究通过克隆烟曲霉fadb基因,构建烟曲霉fadb基因的敲除株,了解该基因对烟曲霉... 详细信息

FAD结合的氧化还原酶编码基因fadb(GenBank ID:Afu4g14630)的编码产物在烟曲霉中为一种与FAD结合的氧化还原酶,可能参与真菌的呼吸。为了探究其具体功能,本研究通过克隆烟曲霉fadb基因,构建烟曲霉fadb基因的敲除株,了解该基因对烟曲霉药物敏感性、渗透压、氧化压力物质敏感性的作用机理。采用高通量基因替换方法构建出fadb基因的敲除盒,筛选出符合的烟曲霉fadb敲除株Δfadb。观察该突变株与野生株AF293对药物敏感性、氧化压力、渗透压物质敏感性的变化。利用E-test法检测Δfadb对3种唑类药物(泊沙康唑、伊曲康唑、伏立康唑)的敏感性,结果证实Δfadb对泊沙康唑的敏感性明显提高。在渗透压和氧化压力的培养试验中,与野生株AF293相比较,Δfadb对氧化剂D-山梨醇和甲萘醌更敏感。加入泊沙康唑后,Δfadb比野生株AF293产生的活性氧更多。说明烟曲霉fadb基因参与泊沙康唑抗烟曲霉机制并起到一定作用,该基因诱导的氧化应激反应可能是抗真菌药物杀伤真菌的作用机制之一,本研究为烟曲霉唑类耐药机制的研究提供了新的理论基础。

关键词：烟曲霉 fadb 泊沙康唑

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大肠杆菌fadb缺失突变株构建及对聚羟基脂肪酸酯积累影响

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大连理工大学学报 2003年第5期43卷 595-598,603页

作者：杭晓明蔺兆星王关林陈国强大连理工大学生物化工系辽宁大连116024 清华大学生物科学与技术系北京100084

应用一种简单的方法构建出一株大肠杆菌脂肪酸降解基因B(fadb)缺陷型菌株KM32B(fadb∷Tet).该方法不需克隆和第二轮PCR,只需要一对各70个碱基的引物.引物的前45个碱基分别与大肠杆菌目的基因的3′和5′互补,后25个碱基分别与抗性(四环素... 详细信息

应用一种简单的方法构建出一株大肠杆菌脂肪酸降解基因B(fadb)缺陷型菌株KM32B(fadb∷Tet).该方法不需克隆和第二轮PCR,只需要一对各70个碱基的引物.引物的前45个碱基分别与大肠杆菌目的基因的3′和5′互补,后25个碱基分别与抗性(四环素Tet)基因的3′和5′互补.将PCR产物,即抗性基因两侧各带与目的基因3′和5′互补的45个碱基的片段,通过高频电转化入大肠杆菌KM32菌株.重组子经PCR验证整个fadb基因区域因被四环素基因置换而敲除.将两种BurkholderiacaryophylliAS1.2741聚羟基脂肪酸酯合成酶基因,phaC1Bc和phaC2Bc,在此缺失突变株中进行了表达.结果表明聚羟基脂肪酸酯的合成能力较相同条件下的野生型大肠杆菌有所提高.

关键词：大肠杆菌脂肪酸降解基因B fadb 缺失突变株聚羟基脂肪酸酯 PHA合成酶基因表达

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肠炎沙门菌持续性感染相关基因的筛选及鉴定

肠炎沙门菌持续性感染相关基因的筛选及鉴定

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作者：李灵芝扬州大学

学位级别：硕士

肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis,SE)是重要的人兽共患病原菌,可以通过多种途径在不同宿主间传播,引发腹痛、腹泻等胃肠道疾病,严重的会导致宿主休克甚至死亡。肠炎沙门菌能够凭借复杂的免疫逃逸机制躲避宿主免疫系统的清除,实现在... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis,SE)是重要的人兽共患病原菌,可以通过多种途径在不同宿主间传播,引发腹痛、腹泻等胃肠道疾病,严重的会导致宿主休克甚至死亡。肠炎沙门菌能够凭借复杂的免疫逃逸机制躲避宿主免疫系统的清除,实现在宿主体内的长期定植,造成持续性感染。沙门菌致病力与宿主免疫应答能力的相互抗衡不断影响持续性感染的进程,但肠炎沙门菌引发持续性感染的关键因子有待于进一步研究。基于此,本研究利用Tn-seq技术筛选肠炎沙门菌Z11菌株引发持续性感染的关键基因,分别在细胞和动物模型上探索这些基因对沙门菌持续性感染的影响,为深入探究肠炎沙门菌逃避宿主免疫应答建立持续性感染的机制提供了关键靶点。1筛选肠炎沙门菌持续性感染相关基因本研究以肠炎沙门菌Z11菌株为研究对象,以1×108 CFU剂量口服感染129 S2/SvE小鼠,建立持续性感染模型。分别在不同时间点观察小鼠肝、脾、胆囊、盲肠和派尔氏结等5种脏器中肠炎沙门菌的定植情况,结果表明Z11菌株主要定植在盲肠和派尔氏结中,少部分能够突破肠上皮细胞屏障扩散至肝、脾和胆囊等部位。因此,后续实验选取盲肠和派尔氏结作为研究对象,利用Tn-seq技术筛选Z11菌株持续性感染相关基因。构建Z11菌株高丰度转座子插入突变体库作为初始文库,以1×108 CFU剂量口服灌胃小鼠,于感染后不同时间点提取盲肠和派尔氏结中沙门菌基因组作为回收文库。获得37份有效样品进行基因组打断、末端修复磷酸化加A及PCR扩增以构建高通量测序文库。根据Tn-seq结果,筛选到KMIPBBJO1249、fadb等11个基因可能对Z11菌株持续性感染后期盲肠中的定植有重要作用,而在派尔氏结中并未发现与感染后期密切相关的基因。此外,本研究也筛选发现csrA等43个基因可能与Z11菌株在盲肠和派尔氏结中的早期定植密切相关。2持续性感染候选基因生物学鉴定为探究不同基因在Z11菌株引发持续性感染过程中的作用,我们选取KMIPBBJO1249、fadb等9个基因构建框内无标记缺失突变株,并进行生物学鉴定。与野生株(WT)相比,所有缺失突变株的生长能力均无显著差异。运动性结果显示,ΔKMIPBBJO1249、Δfadb、ΔassT和ΔnrdE的游动能力显著低于WT,表明这些基因能够影响Z11菌株的运动能力。此外,本研究测定了不同缺失突变株对RAW 264.7细胞的细胞毒性、黏附侵袭和胞内增殖能力。结果显示Δfadb对巨噬细胞的细胞毒性较WT显著降低,ΔKMIPBBJO1249和Δfadb侵袭能力显著低于WT,表明KMIPBBJO1249和fadb可以影响Z11菌株的侵袭能力及对宿主细胞的细胞毒性。fadb基因编码脂肪酸β氧化多酶复合体,参与沙门菌对脂肪酸的利用,因此本研究考察了以不同脂肪酸为唯一碳源时,沙门菌不同缺失突变株的生长情况。结果显示,以辛酸钠(C8)为唯一碳源时,Δfadb生长能力受到明显抑制,表明fadb通过促进Z11菌株对宿主体内辛酸钠等脂肪酸盐的利用,为肠炎沙门菌的肠道定植提供有利条件。以129 S2/SvE小鼠为模型,考察Z11、ΔKMIPBBJO1249和Δfadb体内持续性感染情况,结果发现在感染初期小鼠盲肠中Δfadb载菌量较WT显著上升,感染后期Δfadb载菌量显著低于WT,表明fadb通过影响Z11菌株肠道定植能力参与持续性感染的进程。感染初期ΔKMIPBBJO1249在小鼠盲肠中的定植能力显著低于WT,而派尔氏结中的载菌量显著高于Z11菌株,但在感染后期均未出现显著差异。盲肠、派尔氏结的组织病理切片观察,发现小鼠盲肠组织病变严重,出现大量溃疡,肠腺坏死消失,固有层及黏膜下层可见较多淋巴细胞和粒细胞散在浸润,派尔氏结中病变程度随感染进行而加重,但不同菌株感染组之间无显著差异。

关键词：肠炎沙门菌持续性感染 Tn-seq fadb 毒力因子

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电场对AZ31B/Cu连接界面反应和扩散溶解层结构的影响

电场对AZ31B/Cu连接界面反应和扩散溶解层结构的影响

引用

作者：王福明太原理工大学

学位级别：硕士

镁合金具有高的比强度、高的比模量、优良的阻尼减振和加工性能等优点,是目前被广泛使用最轻的金属结构材料;铜及铜合金具有良好的塑性,冷、热加工性能及优良的导电性、导热性、耐蚀性。目前对镁-铜异种材料扩散连接的研究已成为研究的... 详细信息

镁合金具有高的比强度、高的比模量、优良的阻尼减振和加工性能等优点,是目前被广泛使用最轻的金属结构材料;铜及铜合金具有良好的塑性,冷、热加工性能及优良的导电性、导热性、耐蚀性。目前对镁-铜异种材料扩散连接的研究已成为研究的热点和难点。近年来关于外加电场在固相扩散过程中的激活作用的研究,为镁-铜扩散连接机理的研究提供了新的方法。在对铜镁扩散偶施加电场后,很快在界面上就形成了扩散溶解层。采用光学显微镜、扫描电子显微镜、X射线能谱与X射线衍射仪等分析方法,研究了电场对AZ31B/Cu连接界面扩散反应和扩散溶解层生长过程及其结构的影响。对溶解扩散层的显微组织、相组成和界面元素分布进行了分析。利用显微硬度计及剪切试验对扩散溶解层的显微硬度和抗剪切性能进行了测试。在压力30MPa,温度为450℃、475℃、500℃,保温时间为5～60min的条件下,应用fadb进行了AZ31B/Cu之间的连接试验。分析结果表明,在450℃时,扩散界面平整,为固相扩散,并且随着保温时间的延长,扩散层宽度逐渐增大;在475℃时,由于基体受热软化,扩散界面呈现弯曲状;在500℃时,随着扩散时间的延长,紧邻Mg2Cu靠近镁合金的一侧出现了共晶组织,最终共晶组织会布满整个界面。相对于传统的热扩散,在温度相同下施加电场降低了金属元素的扩散激活能并且提高了扩散系数,随电场强度的增加,Mg、Al元素的扩散系数增大,扩散激活能下降。在温度450℃,时间30min,电流密度为35Acm-2时,过渡层宽度为10μm,为未施加电场时过渡层宽度的5倍。电场之所以能加快扩散溶解层生长是因为提高了新相中的点缺陷浓度及原子迁移率。

关键词： fadb 扩散连接电场溶解扩散 AZ31B Cu

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