检索结果-南通市图书馆

甘蓝型油菜fad2基因的RNA干扰及无筛选标记高油酸含量转基因油菜新种质的获得

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物生理与分子生物学学报 2006年第6期32卷 665-671页

作者：陈苇李劲峰董云松李根泽寸守铣王敬乔云南省农业科学院经济作物研究所云南省农业生物技术重点实验室昆明650223

利用已获得的油菜种子贮存蛋白——十字花科蛋白(cruciferin)基因的启动子和终止子,构建了无选择标记基因且同时具有正义及反义结构的油酰去饱和酶基因(fad2)种子特异表达RNAi载体,并通过农杆菌介导的转化,获得了只含有油菜原有基因且F... 详细信息

利用已获得的油菜种子贮存蛋白——十字花科蛋白(cruciferin)基因的启动子和终止子,构建了无选择标记基因且同时具有正义及反义结构的油酰去饱和酶基因(fad2)种子特异表达RNAi载体,并通过农杆菌介导的转化,获得了只含有油菜原有基因且fad2基因表达受抑制的转基因植株。RT-PCR分析结果表明,在油酸含量达到83.9%的转基因植株中未检测到在非转基因植株中普遍存在的fad2基因转录mRNA——一种典型的RNA干扰现象。通过对植株生长发育状态的观察比较,该高油酸含量转基因株系并未表现出双突变体中由于fad2基因的失活所引起的植株抗寒能力差、发育迟缓、花蕾死亡、结实率低等不利农艺学性状。

关键词：油菜 fad2基因 RNA干扰转基因油酸

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

fad2基因表达载体构建及转化南瓜的研究

FAD2基因表达载体构建及转化南瓜的研究

作者：张言朝东北农业大学

学位级别：硕士

籽用南瓜营养丰富,是人们理想的食疗保健佳品,其富含油脂和蛋白质,其中油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸,易于被人体吸收。南瓜籽粒油脂的品质是由脂肪酸的含量和组成决定的,而不同南瓜品种间的种子含油量和脂肪酸组成存在很大差异。这说明... 详细信息

籽用南瓜营养丰富,是人们理想的食疗保健佳品,其富含油脂和蛋白质,其中油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸,易于被人体吸收。南瓜籽粒油脂的品质是由脂肪酸的含量和组成决定的,而不同南瓜品种间的种子含油量和脂肪酸组成存在很大差异。这说明不同南瓜品种的脂肪酸积累在遗传上是有差异的,这种差异与脂肪酸代谢相关基因是相关的。因此,研究籽用南瓜种子中与脂肪酸的代谢相关的基因的功能,对于改良南瓜籽的品质和进行南瓜品质育种具有重要的理论意义。油酰磷脂酰胆碱去饱和酶(fad2)是植物体中一个催化多不饱和脂肪酸形成比较重要的酶,主要催化油酸(18：1)向亚油酸(18：2)的转化,是决定植物种子中油酸和亚油酸含量多少的最关键酶。fad2基因是fad2酶的编码基因,在南瓜中已成功克隆到该基因。fad2酶对植物体内的脂肪酸含量具有明显的调控作用,fad2基因正义表达能提高亚油酸和其他多不饱和脂肪酸的含量,反义表达能提高油酸含量。因此,可以通过基因工程手段来验证南瓜种子中fad2基因的功能。子房注射法是一种育种工作中经常使用的植物转基因方法。此法有效地利用了植物自然生殖过程,无需进行细胞或原生质体的组织培养,可以直接得到转化种子,有效的缩短了育种周期;而且所用的仪器设备简单便宜,在田间或温室即可进行,是一种较为简捷而有效的手段。因此。本试验利用子房注射法将fad2基因导入南瓜,期望获得南瓜转基因植株,为分子育种提供了一条新的、更有效的途径。同时,也为验证南瓜种子中fad2基因的功能和南瓜品质育种奠定了基础。主要研究结果如下： 1.构建植物表达载体pCMBIA2300-NAPIN-fad2质粒通过PCR扩增获得甘蓝型油菜种子特异性表达的启动子NAPIN基因(1147bp)和油酸脱饱和酶基因(fad2),以植物表达载体pCMBIA2300+标载体,通过酶切、连接、筛选、鉴定等操作构建了植物表达载体pCMBIA2300-NAPIN-fad2. 2.探索出适于南瓜的子房注射体系通过花粉管的苯胺蓝染色和对子房进行不同处理研究,结果表明：(1)南瓜子房注射法的转化时间：授粉后24小时;(2)注射处理：在切除子房上部的柱头和花柱后再进行子房注射。 3.获得转基因南瓜通过子房注射法,成功将fad2基因转入南瓜“银辉一号”品种中。对转基因后代植株进行PCR和PCR-Southern 验证,获得了转fad2基因南瓜7株,转化率为0.66%。

关键词：南瓜 fad2基因子房注射法转基因

中间锦鸡儿fad2基因片段克隆、反义表达载体构建及遗传转化初步研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

林业科学研究 2007年第1期20卷 6-9页

作者：汪阳东李春秀齐力旺张守攻中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室

以我国重要的生物能源灌木——中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段。在GenBank中Blast(GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高... 详细信息

以我国重要的生物能源灌木——中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段。在GenBank中Blast(GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高达88%,位于fad2基因编码区中部。将所得片段经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建了反义表达载体pBI121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和氨苄青霉素的再生烟草植株。初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异,而亚油酸则减少10.3%。

关键词：中间锦鸡儿生物柴油 fad2基因反义表达载体遗传转化

油茶fad2基因的植物表达载体和RNA干扰载体构建及其功能分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物研究 2015年第3期35卷 347-354页

作者：陈鸿鹏谭晓风谢耀坚吴志华张党权曾艳玲国家林业局桉树研究开发中心湛江524022 中南林业科技大学经济林培育与保护省部共建教育部重点实验室长沙410004 中南林业科技大学经济林培育与利用湖南省协同创新中心长沙410004 中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004

茶油是从油茶种子中提取的食用植物油,富含油酸、亚油酸以及亚麻酸等多种人体必需的不饱和脂肪酸。在植物的不饱和脂肪酸生物合成途径中,脂肪酸脱饱和酶(Fatty Acid Desaturase,fad)有多个家族成员,可以将单不饱和脂肪酸转化成多不饱和... 详细信息

茶油是从油茶种子中提取的食用植物油,富含油酸、亚油酸以及亚麻酸等多种人体必需的不饱和脂肪酸。在植物的不饱和脂肪酸生物合成途径中,脂肪酸脱饱和酶(Fatty Acid Desaturase,fad)有多个家族成员,可以将单不饱和脂肪酸转化成多不饱和脂肪酸,其中fad2可以将油酸(18∶1Δ9)和棕榈油酸(16∶1Δ9)转化成亚麻酸(18∶2Δ9,11)和十六碳二烯酸(16∶2Δ9,11)。为了揭示油茶fad2基因的功能,本研究在原有的基础上构建了这个基因的植物表达载体p BI121-Co fad2以及RNA干扰载体p BI121-Co fad2 RNAi,并分别对相应的拟南芥突变体和野生型植株进行了转基因研究。结果表明,同野生型相比,fad突变体中,18∶1和16∶1含量较高,18∶2和16∶2含量较低;突变体植株经过植物表达载体的转化后,脂肪酸组分得到了恢复;而野生型植株经过RNA干扰载体的转化后,18∶1和16∶1含量升高,18∶2和16∶2含量降低。由此说明,油茶fad2基因在植物体内具有调控18∶1和16∶1转变成18∶2和16∶2的功能,对于茶油脂肪酸组分的构成起着关键的调控作用。

关键词：油茶 fad2基因载体构建功能分析

RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的种子特异性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

分子植物育种 2012年第3期10卷 305-310页

作者：周晓婴申爱娟张洁夫浦惠明龙卫华胡茂龙陈锋付三雄顾慧陈松戚存扣江苏省农业科学院经济作物研究所农业部长江下游棉花与油菜重点实验室南京210014

为研究RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的效果及其器官特异性,实时荧光定量PCR法分析比较了转基因油菜W-4与非转基因对照Westar开花后第7天、第14天、第21天、第28天的种子以及越冬期油菜根、茎、叶器官中的fad2基因的相对表达量。结果... 详细信息

为研究RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的效果及其器官特异性,实时荧光定量PCR法分析比较了转基因油菜W-4与非转基因对照Westar开花后第7天、第14天、第21天、第28天的种子以及越冬期油菜根、茎、叶器官中的fad2基因的相对表达量。结果显示:对照Westsr种子中fad2基因的相对表达量随开花后的天数呈逐渐增加的趋势,但W-4种子中fad2基因的相对表达量在开花后第21天、第28天较对照Westar显著下降,降幅达到60%。说明转基因油菜W-4在种子发育过程中表达的fad2基因的dsRNA干扰了fad2基因表达。W-4与Westar在越冬期根、茎、叶器官中fad2基因的相对表达量基本一致,无显著性差异。脂肪酸组成分析结果显示:W-4种子中油酸平均含量达到81.5%较Westar增加了近15%,而多不饱和脂肪酸平均含量为5.25%,较Westar下降了近70%;但根、茎、叶中的脂肪酸含量二者无显著差异;结果表明转基因油菜中RNAi干扰fad2基因表达具有种子特异性,不干扰其它器官的fad2基因表达。研究还发现转基因油菜fad2基因表达下降的时期与napin基因表达时期同步,均始于开花后21d左右,表明目标基因的表达受napin启动子的准确控制。

关键词：转基因油菜实时荧光定量PCR fad2基因表达特异性

中间锦鸡儿fad2基因拷贝数检测及组织表达谱分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第1期38卷 119-124页

作者：林萍汪阳东齐力旺张守攻中国林业科学研究院亚热带林业研究所浙江富阳311400 中国林业科学研究院林业研究所北京100091

【目的】探索中间锦鸡儿基因组中fad2基因的拷贝数,分析不同拷贝的表达模式,以期揭示不同拷贝在植物体内的功能分工。【方法】根据中间锦鸡儿(Caragana intermedia)fad2基因的保守序列设计1对引物SF和SR,利用该引物对PCR扩增制备114 bp... 详细信息

【目的】探索中间锦鸡儿基因组中fad2基因的拷贝数,分析不同拷贝的表达模式,以期揭示不同拷贝在植物体内的功能分工。【方法】根据中间锦鸡儿(Caragana intermedia)fad2基因的保守序列设计1对引物SF和SR,利用该引物对PCR扩增制备114 bp的Southern检测探针,探针进行地高辛标记后,采用罗氏Southern杂交试剂盒进行Southern检测。根据中间锦鸡儿3个fad2基因各自的特异差异序列,分别设计定量PCR引物序列,以actin基因为内参,对中间锦鸡儿的根、茎、叶及不同发育时期(发芽15,25,35 d)种子的cDNA进行定量PCR分析。【结果】中间锦鸡儿fad2基因至少有4个拷贝,且不同拷贝的表达模式不同。fad2-2A基因在根和发育中期、后期的种子中低水平表达,在幼嫩的茎、叶以及发育早期的种子中高水平表达;fad2-1A基因在根中的表达量最低,在种子发育早期、中期大量表达,在幼嫩叶子中表达水平也较高;fad2-1B基因仅在种子发育中期大量表达,在其他组织及种子其他发育阶段的表达量均保持在本底水平。在不同组织以及种子的不同发育时期,fad2-1A相对表达量的变化幅度最大,达到了近100倍,fad2-1B次之,fad2-2A最小。【结论】结合序列比对分析推测:fad2-2A基因可能主要负责合成膜脂中的亚油酸,fad2-1A主要负责种子及叶子贮脂中亚油酸的合成,fad2-1B负责种子贮脂中油酸的去饱和作用。

关键词：中间锦鸡儿 fad2基因实时定量PCR 表达谱

甘蓝型油菜种子特异性表达fad2基因的ihpRNA载体构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国油料作物学报 2006年第3期28卷 251-256页

作者：陈松张杰夫陈峰陈新军龙卫华浦惠明戚存扣江苏省农业科学院经济作物研究所江苏南京210014

旨在通过转基因途径诱导油菜种子中fad2基因发生转录后基因沉默,本文构建了fad2基因的ihpRNA植物表达载体。通过PCR扩增分离到甘蓝型油菜种子特异性表达的Nap in启动子序列(1147bp)以及油酸脱饱和酶基因(fad2)的一个537bp的片段,并将它... 详细信息

旨在通过转基因途径诱导油菜种子中fad2基因发生转录后基因沉默,本文构建了fad2基因的ihpRNA植物表达载体。通过PCR扩增分离到甘蓝型油菜种子特异性表达的Nap in启动子序列(1147bp)以及油酸脱饱和酶基因(fad2)的一个537bp的片段,并将它们分别克隆到pGEM-T easy载体中。利用中间载体pHurrican构建fad2基因的反向重复框。将fad2基因片段以正向的方式连接在一个可剪切的内含子的5’末端,而以反向的方式连接到该内含子的3’末端;然后将Nap in启动子序列连接到该反向重复框的5’端,而在其3’端接有一个nos终止子序列;最后将fad2基因的反向重复表达框分两步克隆到植物双元载体pCAMB IA2300的pUC18多克隆位点,构建具有种子特异性表达的fad2基因的ihpRNA表达载体pCNFIRnos。限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析。

关键词：甘蓝型油菜 fad2基因 ihpRNA表达载体

油茶fad2基因全长cDNA的克隆和序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

林业科学 2008年第3期44卷 70-75页

作者：谭晓风陈鸿鹏张党权曾艳玲李魏蒋瑶谢禄山胡孝义胡芳名中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室长沙410004

fad2基因控制油酸转化为亚油酸,是油茶油脂合成代谢的关键酶基因。在构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶fad2基因的全长cDNA克隆。该基因序列长1682bp,开放阅读框为1149bp,编码382个氨基酸,并且具有fad2... 详细信息

fad2基因控制油酸转化为亚油酸,是油茶油脂合成代谢的关键酶基因。在构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶fad2基因的全长cDNA克隆。该基因序列长1682bp,开放阅读框为1149bp,编码382个氨基酸,并且具有fad2特有的保守序列和相关特征。经过比对分析,发现油茶的fad2基因与其他植物的fad2基因具有较高的相似性。

关键词：油茶 EST文库 fad2基因 RACE 交错延伸PCR 基因克隆

花生fad2基因RNAi载体转化及转基因籽粒脂肪酸分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国油料作物学报 2008年第3期30卷 290-293页

作者：黄冰艳张新友苗利娟严玫海燕易明林徐静陈占宽河南省农作物新品种重点实验室河南郑州450002

在构建了以花生△12脂肪酸去饱和酶(fad2)基因自身启动子驱动、有内含子间隔的该基因编码序列反向重复片段的RNA干扰载体的基础上,对上述干扰载体进行了农杆菌介导的花生胚小叶的遗传转化,以期特异调控花生籽粒中油酸、亚油酸含量。在2... 详细信息

在构建了以花生△12脂肪酸去饱和酶(fad2)基因自身启动子驱动、有内含子间隔的该基因编码序列反向重复片段的RNA干扰载体的基础上,对上述干扰载体进行了农杆菌介导的花生胚小叶的遗传转化,以期特异调控花生籽粒中油酸、亚油酸含量。在2个受体品种中获得105株抗性再生植株,用两对引物对其进行了PCR扩增,其中32株初步证实为转基因植株。采用近红外分析仪对转基因T1籽粒油酸和亚油酸含量的检测结果表明,转基因株系内油酸/亚油酸比值的变异高于对照,多数转基因株系油酸亚油酸比值平均数也显著高于对照。

关键词：花生 fad2基因 RNA干扰遗传转化油酸亚油酸