检索结果-南通市图书馆

中国免疫学杂志 2001年第4期17卷 191-194页

作者：邓宇斌李树浓 O Cohen-Haguenauer 中山医科大学病理生理学教研室广州510089 巴黎七大血液学研究所基因治疗分子生物学实验室

目的 :为探索新型逆转录病毒载体Lentivector及其基因表达调控序列在造血细胞中的有效表达和基因治疗中的应用 ,用分子克隆的方法构建fanconisAnemis (fa)患者A组基因 (faNCA基因 )基因治疗新型重组载体 (Lentivector)和基因表达调控序... 详细信息

目的 :为探索新型逆转录病毒载体Lentivector及其基因表达调控序列在造血细胞中的有效表达和基因治疗中的应用 ,用分子克隆的方法构建fanconisAnemis (fa)患者A组基因 (faNCA基因 )基因治疗新型重组载体 (Lentivector)和基因表达调控序列 (启动子增强子 ) ,进一步通过内切酶酶切位点鉴定插入的基因表达调控序列方向和目的基因的片段大小、目的基因特异引物PCR扩增特异片段鉴定目的基因。方法 :首先将质粒Friend基因表达调控序列 (Fr MuLVE P)强启动子增强子插入载体LentivectorpRRLsin 18中相应克隆位点 ,成为pRRLsin 18FrMuLV (test 1) ;用NotI、NcoI双酶切载体FochA faNCA ,低溶点胶回收faNCA目的基因片段 ;应用polylinker、adapter方法多步克隆插入新型载体LentivectorpRRLsin 18(test1)中相应特异克隆位点 ,获得重组载体sin 18FrMuLVE P fa (test2 ) ,通过酶切鉴定重组载体插入的基因表达调控序列方向和目的基因的片段大小和方向 ,筛选正向阳性重组质粒 ,用PCR法进一步证实插入的faNCA基因片段。结果 :挑取的阳性克隆经多个酶酶切鉴定 ,有Friend质粒 390bp基因表达调控序列 (Fr MuLVE P)和 4 5kbfaNCA目的基因片段酶切位点 ,用PCR引物扩增出目的基因相应片段 ,证明为正向重组体。结论

关键词： fa贫血 Lentivector faNCA基因 DNA重组基因治疗重组载体基因表达调控序列常染色体隐性遗传性疾病

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